服用扶正抗癌方后非小細(xì)胞肺癌晚期患者CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D和NKG2A受體的變化①

吳姍姍 王柏山 嚴(yán) 峰 張 寧 張 程 李志靜

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中心，沈陽110032)

肺癌是目前全世界發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，吸煙、肺部持續(xù)慢性感染、遺傳等因素均可導(dǎo)致肺癌的發(fā)生。約有85%的病例屬于非小細(xì)胞肺癌(NSCLC),包括鱗癌、腺癌、腺鱗癌和大細(xì)胞肺癌等，多數(shù)病例在發(fā)現(xiàn)時(shí)已有局部浸潤(rùn)或已發(fā)生轉(zhuǎn)移[1,2]。盡管在過去的幾十年已經(jīng)開發(fā)了多種化療和靶向治療方案，但是多數(shù)NSCLC仍會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)[3]。一些研究發(fā)現(xiàn)扶正抗癌方聯(lián)合化療藥物治療，能夠增加化療藥物敏感性并且降低其毒性[4,5]。扶正抗癌方具有扶正補(bǔ)虛,提高機(jī)體免疫力抗癌抑瘤的作用。但是具體免疫學(xué)機(jī)制尚不清楚。T細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤免疫的重要效應(yīng)細(xì)胞，并且通過功能各異的細(xì)胞亞群來完成免疫調(diào)控機(jī)能。成熟T細(xì)胞分為 CD4+T和CD8+T細(xì)胞。CD8+T細(xì)胞又稱為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，主要發(fā)揮對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視作用。CD8+T細(xì)胞通過T細(xì)胞受體(TCR)與靶細(xì)胞上的抗原肽-MHC-Ⅰ類分子結(jié)合,傳導(dǎo)活化信號(hào)并直接作用于靶細(xì)胞使其溶解。CD8+T細(xì)胞也可表達(dá)一些NK相關(guān)受體，有活化性受體NKG2D和抑制性受體NKG2A等，通過識(shí)別其相應(yīng)的配體傳遞抑制或活化信號(hào)，抑制與活化信號(hào)發(fā)生整合，最終決定CD8+T細(xì)胞能否殺傷靶細(xì)胞[6]。

NKG2D是一種廣泛表達(dá)于免疫效應(yīng)細(xì)胞(如NK細(xì)胞、CD8+αβT細(xì)胞、NKT細(xì)胞等)的活化性細(xì)胞表面受體，T細(xì)胞上的NKG2D是作為TCR激活的一個(gè)重要共刺激分子[7]。而且有研究發(fā)現(xiàn)結(jié)腸癌患者的CD8+T細(xì)胞可以分別通過TCR或NKG2D受體識(shí)別自體和同種異體的腫瘤細(xì)胞[8]。食道癌Ⅲ/Ⅳ期患者的CD8+T細(xì)胞NKG2D受體表達(dá)顯著低于Ⅰ/Ⅱ期患者，說明其表達(dá)與腫瘤疾病的嚴(yán)重程度密切相關(guān)[9]。人類患宮頸癌時(shí)CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2A上調(diào)使CD8+T細(xì)胞釋放穿孔素明顯減少，而且細(xì)胞毒性試驗(yàn)表明NKG2A表達(dá)的上調(diào)可抑制CD8+T細(xì)胞的細(xì)胞毒作用[10]。無論是小鼠還是人類當(dāng)阻斷抑制性的NKG2A受體時(shí)，可以通過提升CD8+T和NK細(xì)胞的效應(yīng)功能從而加強(qiáng)對(duì)腫瘤的免疫作用[11]。由此可見，通過觀察CD8+T細(xì)胞表面NKG2D和NKG2A表達(dá)的高低，可以預(yù)測(cè)腫瘤疾病的嚴(yán)重程度。本研究旨在探索晚期NSCLC患者按療程規(guī)范服用扶正抗癌方前后CD8+T細(xì)胞表面NKG2D和NKG2A的表達(dá)情況。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1研究對(duì)象 本研究通過本院倫理委員會(huì)審批以及患者的知情同意。選擇我院2018年5月至2019年1月期間收治的有病理學(xué)明確診斷的31例NSCLC晚期患者，其中男18例，女13例；年齡35～79歲，平均年齡為(45.5±3.8)歲，其中鱗癌14例，腺癌17例；TNM分期Ⅲa期8例，Ⅲb期11例，Ⅳ期12例。上述患者為治療組，根據(jù)服用扶正抗癌方前后分別定義為治療前組和治療后組。

1.1.2病例入選標(biāo)準(zhǔn) 入選標(biāo)準(zhǔn)：①患者符合原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[12]且無其他腫瘤史；②患者不伴發(fā)自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、風(fēng)濕性骨關(guān)節(jié)病等；③患者未服用激素類藥物或接受免疫抑制劑的治療；④排除活動(dòng)性(病毒)感染。Karnofsky評(píng)分≥70分。選擇與患者性別年齡相匹配的健康人21例即健康對(duì)照組，其中男11例，女10例；年齡32～77歲，平均(42.3±3.5)歲。

1.1.3藥物干預(yù) 治療組服用院內(nèi)扶正抗癌方(基本組成：苦參15 g，生白術(shù)12 g，生甘草5 g，半夏15 g，大貝20 g，半枝蓮15 g，白花蛇草30 g，茯苓20 g，陳皮15 g，生苡仁30 g)；辨證加減：反復(fù)咳嗽并痰中帶血可加三七和仙鶴草等；胸痛者可加枳殼、香附、延胡索等；陰虛者可加沙參和麥冬等；陽虛者加巴戟天、肉蓯蓉和杜仲等。上述中藥由我院藥房提供并按正規(guī)流程制備，每日1劑水煎至150 ml，分3次服用，連續(xù)服用30日為1個(gè)療程。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1T 淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)量檢測(cè) 完全依照1997年美國CDC頒布的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值檢測(cè)指導(dǎo)方法嚴(yán)格執(zhí)行。具體步驟：將20 μl CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP試劑加入BD公司TruCOUNT管中，逆向加樣法加入50 μl EDTA抗凝血，室溫避光15 min，加入經(jīng)10倍稀釋的免洗溶血素450 μl，室溫避光15 min，樣本溶血充分后流式細(xì)胞儀FACSCalibur檢測(cè)，MULTISET 軟件進(jìn)行分析。

1.2.2CD8+T細(xì)胞表面NKG2D和NKG2A的表達(dá) 具體步驟：采用熒光標(biāo)記的單克隆抗體組合CD3 PE-Cy7/CD8 Percp-Cy5.5/NKG2D APC/NKG2A PE 對(duì)治療組和健康對(duì)照組的外周靜脈血進(jìn)行表面染色，即每個(gè)研究對(duì)象均有一管按上述組合染色的樣本管，另設(shè)一管同型對(duì)照管。樣本管內(nèi)加入100 μl EDTA抗凝全血，按上述組合的單克隆抗體分別加入樣本管內(nèi)，室溫避光25 min后加入溶血素3 ml，繼續(xù)室溫避光8 min溶血充分后，300 g離心10 min棄上清。加入3 ml PBS進(jìn)行洗滌，室溫下300 g離心10 min后棄上清，共洗滌兩次。最終加入含有1% 多聚甲醛的PBS 200 μl懸浮，BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)，CELLQUEST軟件進(jìn)行分析。

1.2.3生存質(zhì)量評(píng)價(jià) 根據(jù)Karnofsky評(píng)分評(píng)價(jià)患者的生存質(zhì)量。提升：比治療前評(píng)分升高≥10分；平穩(wěn)：治療前后評(píng)分變化幅度≤10分；降低：比治療前評(píng)分減少≥10分[13]。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用中位數(shù)的95%可信區(qū)間表示。各組間兩兩比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1CD4+T和CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值在NC組、治療前組和治療后組的差別 NC組的CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著高于治療前組和治療后組(P<0.01)；治療前組和治療后組的CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值無顯著性差異，見表1。NC組的CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著高于治療前組和治療后組(P<0.01)；治療后組的CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著高于治療前組(P<0.01)，見表1和圖1A。

2.2CD8+T細(xì)胞表面NKG2D和NKG2A在NC組、治療前組和治療后組所占百分比

2.2.1CD8+T細(xì)胞表面NKG2D+NKG2A-在NC組、治療前組和治療后組占百分比 NC組的NKG2D+NKG2A-CD8+T細(xì)胞的百分比顯著高于治療前組和治療后組(P<0.01)；治療后組NKG2D+NKG2A-CD8+T細(xì)胞的百分比顯著高于治療前組(P<0.01)，見表1、圖1B和圖 2,流式細(xì)胞圖見圖3。

2.2.2CD8+T細(xì)胞表面NKG2D-NKG2A+在NC組、治療前組和治療后組所占百分比 NC組的NKG2D-NKG2A+CD8+T細(xì)胞的百分比顯著低于治療前組(P<0.01)；NC組也顯著低于治療后組(P<0.05)；而治療前組和治療后組無顯著性差異,見表1、圖1C和圖 2,流式細(xì)胞圖見圖3。

2.2.3CD8+T細(xì)胞表面NKG2D+NKG2A+在NC組、治療前組和治療后組占百分比 NC組的NKG2D+NKG2A+CD8+T細(xì)胞的百分比顯著低于治療前組(P<0.01)；在其余各組間無顯著性差異,見表1、圖1D和圖 2,流式細(xì)胞圖見圖3。

2.3治療前組不同病理類型上述指標(biāo)的差別 治療前組包含鱗癌14例，腺癌17例。鱗癌NKG2D+NKG2A+CD8+T細(xì)胞的百分比顯著低于腺癌(P<0.05);CD4+T、 CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值以及NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)、NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)在鱗癌患者和腺癌患者間并無顯著性差異,見表2。

GroupsnCD4+T(cells/μl)CD8+T(cells/μl)NKG2D+NKG2A-(%)NKG2D-NKG2A+(%)NKG2D+NKG2A+(%)Pre31449(268,623)347(241,437)2)74.7(66.2,78.7)2)0.7(0.2,1.1)2)8.6(2.7,15.1)2)Post31495(343,672)426(366,547)2)81.9(69.6,86.3)2)0.5(0.1,0.9)1)5.4(1.6,10.8)NC21946(746,1 138)679(527,863)93.1(87.8,94.0)0.1(0,0.2)2.8(2.2,4.9)

Note:Compared with NC group，1)P<0.05，2)P<0.01.

圖1 治療前、治療后和NC組的CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值、NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)、NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)、NKG2D+NKG2A+CD8+T(%)的差異Fig.1 Comparison percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells， NKG2D-NKG2A+CD8+T cells,NKG2D+NKG2A+CD8+T cells and absolute counts of CD8+ T cells among Pre-treatment group,Post-treatment group and NC three groupsNote: A.The comparison of the absolute counts of CD8+T cells;B.The comparison of the percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells;C.The comparison of the percentage of NKG2D-NKG2A+CD8+T cells;D.The comparison of the percentage of NKG2D+NKG2A+CD8+T cells.

圖2 治療前、治療后和NC組NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)、NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)、NKG2D+NKG2A+CD8+T(%)以及NKG2D-NKG2A-CD8+T(%)Fig.2 Percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells， NKG2D-NKG2A+CD8+T cells,NKG2D+NKG2A+CD8+T cells and NKG2D-NKG2A-CD8+T cells among Pre-treatment group,Post-treatment group and NC three groups

圖3 各組CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D和NKG2A不同亞群所占百分比的流式細(xì)胞圖Fig.3 Representative flow cytometric graphs of NKG2D+/-NKG2A+/-CD8+T cells in Pre-treatment group,Post-treatment group and NC group

Pathological typenCD4+T(cells/μl)CD8+T(cells/μl)NKG2D+NKG2A-(%)NKG2D-NKG2A+(%)NKG2D+NKG2A+(%)Squamous cell carcinoma14416(205,668)361(230,395)73.0(62.3,81.5)0.6(0.2,1.1)4.4(2.3,8.9)1)Adeno carcinoma17449(309,588)311(241,474)75.0(69.6,78.4)0.7(0.4,1.4)13.8(5.6,19.1)

Note:Compared with Adenocarcinoma group，1)P<0.05.

TNMnCD4+T(cells/μl)CD8+T(cells/μl)NKG2D+NKG2A-(%)NKG2D-NKG2A+(%)NKG2D+NKG2A+(%)Ⅲ19581(449,643)2)391(278,466)1)77.4(75.0,82.5)2)0.4(0.2,0.8)2)8.6(3.7,13.9)Ⅳ12248(191,335)267(185,357)61.5(53.4,67.4)1.1(0.8,2.4)9.8(2.6,25.9)

Note:Compared with Phase Ⅳ group，1)P<0.05，2)P<0.01.

圖4 Ⅲ期、Ⅳ期患者CD4+和CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值、NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)以及NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)的差異Fig.4 Comparison the percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)，NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)，absolute counts of CD4+ T cells and absolute counts of CD8+ T cells between Phase Ⅲ and Phase ⅣNote: A.The comparison of the absolute counts of CD4+T cells;B.The comparison of the absolute counts of CD8+T cells;C.The comparison of the percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells;D.The comparison of the percentage of NKG2D-NKG2A+CD8+T cells.

GendersnCD4+T(cells/μl)CD8+T(cells/μl)NKG2D+NKG2A-(%)NKG2D-NKG2A+(%)NKG2D+NKG2A+(%)Males18472(329,601)315(256,470)75.5(70.5,79.0)0.6(0.2,1.0)9.0(6.6,18.8)Females13437(299,633)360(218,395)71.8(61.3,79.0)0.8(0.4,1.4)8.7(6.2,18.3)

圖5 NSCLC患者治療前和治療后NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)和NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)的相關(guān)性(A和B)Fig.5 Correlation analysis of percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells and percentage of NKG2D-NKG2A+CD8+T cells between Pre-treatment group and Post-treatment groupNote: A.The correlation analysis of the percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells and percentage of NKG2D-NKG2A+CD8+T cells in pre-treatment group;B.The correlation analysis of the percentage of NKG2D+NKG2A-CD8+T cells and percentage of NKG2D-NKG2A+CD8+T cells in post-treatment group.

2.4治療前組不同TNM分期患者上述指標(biāo)的差別 治療前組包含Ⅲ期19例，Ⅳ期12例。Ⅲ期的CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著高于Ⅳ期(P<0.01),見表3和圖4A；Ⅲ期的CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著高于Ⅳ期(P<0.05),見表3和圖4B；Ⅲ期的NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)顯著高于Ⅳ期(P<0.01),見表3和圖4C；Ⅲ期的NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)顯著低于Ⅳ期(P<0.01),見表3和圖4D。

2.5治療前組不同性別上述指標(biāo)的差別 治療前組包含女性10例，男性11例，CD4+T、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值以及NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)、NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)、NKG2D+NKG2A+CD8+T(%)在女性和男性間并無顯著性差異,見表4。

2.6相關(guān)性分析 治療前組NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)與NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01，R=-0.66),見圖5A。

治療后組NKG2D+NKG2A-CD8+T(%)與NKG2D-NKG2A+CD8+T(%)也呈負(fù)相關(guān)(P<0.01，R=-0.54)，見圖5B。

2.7治療后生存質(zhì)量評(píng)價(jià) 共31例患者治療前后Karnofsky評(píng)分的變化，其中7例患者評(píng)分升高≥10分，占總體的22.0%；19例患者評(píng)分變化幅度≤10分，占總體的61.2%；5例患者評(píng)分減少≥10分，占總體的16.1%。83.9%的患者治療后生存質(zhì)量都穩(wěn)中有升。

3 討論

中醫(yī)定義肺癌是一種全身屬虛，局部屬實(shí)，本虛標(biāo)實(shí)之病證，邪毒聚結(jié)，最易耗傷人體正氣，隨著邪長(zhǎng)正消，正氣受戕益甚?？梢娬撌欠伟┑膬?nèi)因,也是推動(dòng)肺癌發(fā)展的關(guān)鍵,扶正培本以及時(shí)時(shí)顧護(hù)正氣是中醫(yī)對(duì)肺癌進(jìn)行辨證施治的核心。中醫(yī)的正氣主要由先天的元?dú)夂秃筇斓闹袣鈽?gòu)成。有研究發(fā)現(xiàn)通過補(bǔ)中益氣不僅可以改善非特異性免疫，特異性免疫也會(huì)有所改善[14]。中醫(yī)學(xué)的正氣理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫理論有相通之處但是不能等同，二者的關(guān)聯(lián)有待深入研究，本研究旨在探索按療程規(guī)范服用扶正抗癌方前后，NSCLC晚期患者CD8+T細(xì)胞表面表達(dá)NKG2D和NKG2A的變化。

CD4+T細(xì)胞又稱為輔助性T細(xì)胞，可以調(diào)控或輔助其他淋巴細(xì)胞發(fā)揮功能。本研究發(fā)現(xiàn)NSCLC晚期患者CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著低于NC組，在按療程規(guī)范服用扶正抗癌方前后患者CD4+T細(xì)胞絕對(duì)值無顯著性變化。眾多研究表明，細(xì)胞毒性T細(xì)胞可以抑制惡性實(shí)體瘤的生長(zhǎng)[15]。NSCLC晚期患者CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著低于NC組，應(yīng)用扶正抗癌方后患者CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值較治療前明顯升高。應(yīng)用扶正抗癌方后NSCLC晚期患者CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值顯著升高，有利于抑制患者體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)。

腫瘤浸潤(rùn)的NKG2D+CD8+T細(xì)胞可以識(shí)別并消除表達(dá)NKG2D配體的腫瘤細(xì)胞[16]。Lin等[17]的研究發(fā)現(xiàn)：與腫瘤細(xì)胞共同孵育后，CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D顯著下調(diào)。當(dāng)阻斷NKG2D或其配體可抑制CD8+T細(xì)胞殺傷腫瘤的活性。其研究顯示NKG2D受體可能是胃癌的有利預(yù)后指標(biāo)，并推測(cè)NKG2D表達(dá)下降是腫瘤的免疫逃逸機(jī)制[17]。有數(shù)據(jù)表明NSCLC晚期患者較早期患者CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D顯著下降[18]。相似的結(jié)果在本研究同樣得到了印證，本研究發(fā)現(xiàn)NSCLCⅢ期患者的NKG2D+NKG2A-CD8+T占百分比顯著高于Ⅳ期，隨著腫瘤疾病的進(jìn)展CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D會(huì)明顯減少?；颊叻梅稣拱┓胶?，83.9%的患者生存質(zhì)量評(píng)價(jià)穩(wěn)中有升，只有16.1%的患者生存質(zhì)量評(píng)價(jià)下降。與其相對(duì)應(yīng)的我們發(fā)現(xiàn)治療后NKG2D+NKG2A-CD8+T占百分比較治療前顯著升高但是仍然顯著低于NC組。結(jié)果表明患者在服用扶正抗癌方后CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D顯著上調(diào)，可能有利于體內(nèi)CD8+T細(xì)胞識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞，從而使患者的一般狀況得到改善，二者之間存在因果關(guān)聯(lián)。

NKG2A是一種帶有酪氨酸抑制性基序(ITIM)的NK相關(guān)抑制性受體，既表達(dá)于NK細(xì)胞又表達(dá)于T細(xì)胞[19]。在健康個(gè)體的外周血中約有5%的CD8+T細(xì)胞表面可穩(wěn)定表達(dá)NKG2A，當(dāng)有慢性抗原刺激時(shí)這種表達(dá)可以上調(diào)[20]。NKG2A/CD94形成的異二聚體可與人類非經(jīng)典的MHCⅠ類分子復(fù)合物HLA-E結(jié)合，傳導(dǎo)抑制信號(hào)從而抑制NK和CD8+T細(xì)胞的活性[21]。最新研究發(fā)現(xiàn)：通過阻斷CD8+T細(xì)胞而非NK細(xì)胞表面的NKG2A受體，可以提高機(jī)體對(duì)治療性腫瘤疫苗的臨床反應(yīng)[22]。Yu等[18]的研究發(fā)現(xiàn)NSCLC晚期患者較早期患者CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2A顯著升高。本研究發(fā)現(xiàn)NSCLCⅢ期患者的NKG2D-NKG2A+CD8+T占百分比顯著低于Ⅳ期，隨著腫瘤疾病的進(jìn)展CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2A增多。我們的結(jié)果與Yu等[18]的研究結(jié)果相符?；颊叻梅稣拱┓胶?，大部分患者生存質(zhì)量保持穩(wěn)中有升的狀態(tài)。我們發(fā)現(xiàn)治療后NKG2D-NKG2A+和NKG2D+NKG2A+CD8+T兩群細(xì)胞的百分比，較治療前雖有下降的趨勢(shì)但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。我們推測(cè)之所以沒有產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能是由于本研究的樣本量偏小?；颊呱尜|(zhì)量的改善還是與CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2A減少的趨勢(shì)相對(duì)應(yīng)的，但是CD8+T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷功能是否有改善則需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

NKG2D和NKG2A受體可同時(shí)表達(dá)于CD8+T細(xì)胞，CD8+T細(xì)胞的活性取決于上述兩個(gè)受體疊加的效果。本研究的相關(guān)性結(jié)果顯示無論在治療前還是治療后，NSCLC晚期患者NKG2D+NKG2A-CD8+T和NKG2D-NKG2A+CD8+T兩群細(xì)胞的百分比呈負(fù)相關(guān)，說明CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D和NKG2A受體呈現(xiàn)互為消長(zhǎng)的狀態(tài)。免疫活化和免疫抑制之間存在平衡，可以間接反映免疫監(jiān)視的效果，在腫瘤微環(huán)境中免疫活化和免疫抑制信號(hào)的比例可以更好地預(yù)測(cè)免疫治療的結(jié)果[23]。我們的結(jié)果也再次印證這種CD8+T細(xì)胞上免疫活化和免疫抑制的平衡理論。

本研究的NSCLC晚期患者包含鱗癌14例、腺癌17例，鱗癌NKG2D+NKG2A+CD8+T細(xì)胞的百分比顯著低于腺癌患者，其他細(xì)胞群無顯著性差異。而之前Yu等[18]的研究發(fā)現(xiàn)鱗癌CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D和NKG2A有低于腺癌的趨勢(shì)但無顯著性差異，之所以結(jié)果會(huì)有差異，我們推測(cè)可能是由于患者構(gòu)成的不同引起上述的差異，Yu等[18]的研究包含23例早期患者和17例晚期患者，而我們的患者全部是晚期患者。NKG2D和NKG2A同時(shí)表達(dá)于同一個(gè)CD8+T細(xì)胞，二者可能處于一種博弈狀態(tài)，CD8+T細(xì)胞是否能夠殺傷腫瘤細(xì)胞主要取決于腫瘤細(xì)胞表面何種受體的配體處于優(yōu)勢(shì)，但仍有待于進(jìn)一步的研究證實(shí)。本研究發(fā)現(xiàn)NSCLC晚期患者CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D和NKG2A的水平無性別差異，這與Yu等[18]的研究結(jié)果一致。

綜上所述，NSCLC晚期患者按照辨證施治的原則，服用扶正抗癌方一個(gè)月大部分患者生存質(zhì)量穩(wěn)中有升，與之相對(duì)應(yīng)的CD8+T細(xì)胞表達(dá)NKG2D升高和NKG2A降低，我們推測(cè)扶正抗癌方的應(yīng)用可能激活體內(nèi)CD8+T細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞的活性，有利于改善患者預(yù)后?？梢猿蔀槭中g(shù)、放化療以及靶向治療的輔助療法，而且眾多研究已經(jīng)證實(shí)服用扶正抗癌方可增加放化療敏感性同時(shí)降低放化療引起的不良反應(yīng)。