非健康烏蘇里蝮雄性生殖系統(tǒng)組織學(xué)結(jié)構(gòu)初探

姚晨昊 路生鑫 陸宇燕* 李丕鵬 薛百強(qiáng) 周正彥，3

(1.沈陽師范大學(xué)兩棲爬行動物研究所，沈陽，110034；2.沈陽宏泰蛇類養(yǎng)殖有限公司，沈陽，110168；3.沈陽師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，沈陽，110034)

烏蘇里蝮(Gloydiusussuriensis)隸屬蝰科(Viperidae)，亞洲蝮屬，在東北又稱白眉蝮，俗稱七寸子、土球子、草上飛，廣泛分布于我國東北黑龍江、吉林、遼寧三省，在俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)以及朝鮮均有分布[1]。由于烏蘇里蝮蛇毒成分特殊的藥用價(jià)值[2-4]，近年來野外種群數(shù)量呈急劇下降趨勢。國內(nèi)很多養(yǎng)殖單位都在尋求人工養(yǎng)殖烏蘇里蝮的方法，希望實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖條件下的成功繁育，以達(dá)到最大程度地補(bǔ)充商業(yè)需求，并維持野外種群的穩(wěn)定。但目前烏蘇里蝮的生物學(xué)資料極少，僅見對烏蘇里蝮蛇毒成分的研究[2-7]和無冬眠與冬眠條件下烏蘇里蝮生長發(fā)育規(guī)律以及捕食行為與排毒量的研究[8-9]，而對烏蘇里蝮生殖生物學(xué)方面的報(bào)道極少[10-11]，并未見到烏蘇里蝮疾病方面的相關(guān)報(bào)道。本研究在對烏蘇里蝮生殖系統(tǒng)進(jìn)行組織學(xué)觀察時，發(fā)現(xiàn)了2條消化道結(jié)構(gòu)異常的個體，而它們的精巢在解剖學(xué)特征上與健康蛇之間也表現(xiàn)出明顯的差異。雖然目前沒有查詢到關(guān)于消化道疾病與生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能之間關(guān)系的研究報(bào)道，但本文試圖探究兩者的內(nèi)在關(guān)聯(lián)，為烏蘇里蝮的生物學(xué)研究積累科學(xué)資料，也為人工養(yǎng)殖烏蘇里蝮的疾病預(yù)防和治療奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用烏蘇里蝮來自牡丹江地區(qū)，在養(yǎng)殖場飼養(yǎng)1年左右，于2018年5月隨機(jī)選取外觀正常的成年雄蛇，共計(jì)4條。經(jīng)解剖后確認(rèn)健康蛇2條，患病蛇2條。

1.2 方法

將實(shí)驗(yàn)用蛇置于放有適量乙醚的干燥器中，當(dāng)觸及蛇體沒有明顯應(yīng)激反應(yīng)時取出，利用Mettler ToledoQ/OAFA02—2009電子天平(精度 0.01 g)進(jìn)行稱重，利用米尺測量蛇體長和體全長。用“U”鐵絲將頭部固定于解剖板上，用透明膠帶將吻部封閉，并固定。經(jīng)腔上鱗前緣縱剖腹部至下頜處，檢查各個器官位置、形態(tài)和色澤等，并拍照。剝離出雙側(cè)精巢和輸精管，利用Mettler ToledoQ/OAFA02—2009電子天平(精度 0.01 g)分別進(jìn)行稱重，利用哈爾濱量具廠GB/T 14899—94 數(shù)顯游標(biāo)卡尺進(jìn)行長度測量。取左側(cè)精巢和輸精管前半段制成懸液，進(jìn)行精子形態(tài)學(xué)測量。其余部分置于DW—50 W255冰柜中冰凍待用。右側(cè)精巢和輸精管置于10%的中性福爾馬林溶液中固定至少24 h后，取右側(cè)精巢中段，輸精管前段1/3長度流水沖洗過夜，常規(guī)石蠟切片，厚7 μm，H.E 染色。利用Olympus BX5顯微鏡和Olympus DP71攝像頭觀察拍照，Image-Pro Plus 測量。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，相關(guān)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，設(shè)置P<0.05為顯著性差異，P<0.01為極顯著性差異。

1.3 相關(guān)計(jì)算方法

軀體肥滿度(g/cm3)=軀體重(除去內(nèi)臟后的胴體重，g)/體長3(cm3)[12]

精巢系數(shù)=[精巢重量(左右兩側(cè)精巢重量之和，g)/軀干重(g)]× 100%[13]

精巢長與體長的比值=精巢長(左右兩側(cè)精巢長之和，cm)/體長(cm)

精子團(tuán)面積與輸精管管腔面積的比值=精子團(tuán)面積(cm2)/輸精管管腔面積(cm2)

2 結(jié)果

2.1 大體解剖學(xué)

2.1.1 解剖觀察

正常烏蘇里蝮縱剖后(圖1 A)，可見2個精巢分別位于小腸的左右兩側(cè)，長水滴狀，乳黃色，并可見有較為密集的毛細(xì)血管的分布，右側(cè)精巢明顯高于左側(cè)。而在精巢分布的相應(yīng)區(qū)段，可見呈新鮮肉紅色的腸管(小腸部位)。腸管飽滿，呈略微彎曲狀盤曲在體腔的后半部分。

具腫塊蛇解剖后臟器整體顏色缺少血色，精巢顏色與腸管相近，呈淡土黃色，少有毛細(xì)血管的分布。由于在右側(cè)精巢的前方有一個棒狀腫塊(圖1 B，黃色箭頭段處為腫塊的原始位置)的存在，其長度明顯變小(表1)。棒狀腫塊，有膜包被，與消化道可輕松剝離，長度約60 mm，肉眼可見膜內(nèi)緊密排列著大小不均、形態(tài)各異的橢圓粒狀結(jié)構(gòu)。此蛇的其他各器官未見實(shí)質(zhì)性病變。

圖1 5月烏蘇里蝮健康蛇和患病蛇的解剖結(jié)果及光學(xué)顯微鏡下精子結(jié)構(gòu)Fig.1 Anatomical results of healthy and diseased snakes，and sperm structure under optical microscope of Gloydius ussuriensis in May 注：A.健康蛇，B.具腫塊蛇、雙箭頭示將異物從圖示位置平移出體腔外，C.小腸腫脹蛇，D.精子；1.胃，2.精巢，3.小腸，4.脂肪體，5.小腸腫脹部位；a.頂體，b.頭長，c.尾中段，d.尾主段和尾末端，e.尾 Note：A.Healthy Gloydius ussuriensis，B.With lump snake，the double arrow head shows the foreign matter out of the body cavity from the pictorial position，C.Small intestine with swollen snake，D.Sperm；1.Stomach，2.Testis，3.Small intestine，4.Fat body，5.Swelling site of small intestine；a.Acrosome，b.Head length，c.Midpiece of tail，d.Principal and end pieces of tail，e.Tail

表1 烏蘇里蝮雄蛇5月一般形態(tài)學(xué)測量指標(biāo)

Tab.1 General morphological parameters of male Gloydius ussuriensis in May

小腸腫脹蛇解剖后可見體腔中臟器顏色較為暗沉，兩個精巢上少見有毛細(xì)血管的分布。而在兩精巢之間的小腸前端部分呈腫脹狀態(tài)(圖1 C)，其長度約為40 mm左右。此部分小腸呈乳白色，腸管直徑明顯大于后方的小腸，用鑷子觸碰此部位略硬。而此蛇其他各器官未見實(shí)質(zhì)性病變。

2.1.2 相關(guān)形態(tài)學(xué)測量

表1顯示，在軀體肥滿度、精巢長/體長和精巢系數(shù)3個指標(biāo)的數(shù)值上，具腫塊蛇和健康蛇均較為接近，而小腸腫脹蛇這3項(xiàng)指標(biāo)分別僅是健康蛇的78.13%、60%和72.04%，小腸腫脹蛇是具腫塊蛇的75.76%、75%和73.63%。即小腸腫脹蛇在這3項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)值上與健康蛇和具腫塊蛇均出現(xiàn)了明顯的差異。

2.1.3 精子形態(tài)

在觀察由輸精管中段制備而成的精子涂片時發(fā)現(xiàn)，健康蛇、具腫塊蛇和小腸腫脹蛇的精子均可清晰分辨出精子基本結(jié)構(gòu)(圖1 D)。成熟精子可區(qū)分出3個結(jié)構(gòu)成分，即頭部、頸部和尾部。吉姆薩染色后，精子頭部呈藍(lán)色，尾部呈藍(lán)紫色，兩者之間為半透明的收縮區(qū)即精子的頸部。精子的頭部整體呈長圓錐狀，前1/4著色較淺的為頂體，其后著色深藍(lán)色部分是精子核的部位，尾部可區(qū)分為略粗的主段和較細(xì)的末端2部分。表2顯示，健康蛇、具腫塊蛇和小腸腫脹蛇輸精管內(nèi)精子各部位測量數(shù)據(jù)上均無顯著性差異。

表2 烏蘇里蝮雄蛇輸精管中精子形態(tài)學(xué)測量

Tab.2 Morphological measurements of sperm in the seminiferous duct of male Gloydius ussuriensis

2.2 組織學(xué)

2.2.1 精巢組織學(xué)觀察

健康烏蘇里蝮精巢切片中曲細(xì)精管飽滿，大多呈圓形或者橢圓形，排列整齊，間隙均勻。曲細(xì)精管之間由結(jié)締組織充填，即精巢中的間質(zhì)區(qū)(圖2 1)。曲細(xì)精管管壁結(jié)構(gòu)可清晰分辨出基膜(basal lamina，由纖維成分和類肌細(xì)胞構(gòu)成)和生精上皮(spermatogenic epithelium)。生精上皮由支持細(xì)胞(sertoli cells，Sert)、精原細(xì)胞(spermatogonia，SPG)、初級精母細(xì)胞(primary spermatocyte，PS)、次級精母細(xì)胞(secondary spermatocyte，SS)、精子細(xì)胞(spermatids，SPT)和精子 (spermatozoa，SPZ)構(gòu)成(圖2 4)。曲細(xì)精管的生精狀態(tài)在所觀察的曲細(xì)精管中存在著明顯的差異，有的生精上皮排列整齊，可見大量各級精母細(xì)胞(圖2 4b)，并可觀察到大量分裂相和具有桿狀核的變態(tài)中的精子細(xì)胞；有的已經(jīng)基本完成了精子演化過程，生精上皮的排列顯得有些許凌亂，并在近腔面可見大量完成變態(tài)的精子。各級生精細(xì)胞和支持細(xì)胞胞核均為深染，胞質(zhì)均勻，細(xì)胞界限依稀可辨。間質(zhì)區(qū)可見較多的橢圓形或者長橢圓形的間質(zhì)細(xì)胞，一般3—5成群。在曲細(xì)精管管腔中，可見疏密不同的絲狀殘留物和少量精子。

具腫塊烏蘇里蝮精巢中曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)不規(guī)則，均呈明顯的塌陷狀，可見少量疑似管壁破裂處(圖2 2a)。生精上皮排列松散，成束排列的現(xiàn)象基本消失，出現(xiàn)了明顯的分層和剝落現(xiàn)象(圖2 5)。生精上皮的個別區(qū)域雖然仍可見有精母細(xì)胞的分裂相，但發(fā)現(xiàn)細(xì)胞胞質(zhì)淡染，且有明顯的空泡狀，疑似水樣變性或脂肪變性特征，故生精上皮整體染色較健康蛇的淺(圖2 5e)。管腔中絲狀物較稀少，極少見精子游離其中。間質(zhì)區(qū)明顯增大，其中結(jié)締組織也極其松散。

圖2 烏蘇里蝮健康蛇和患病蛇的精巢及輸精管結(jié)構(gòu)Fig.2 The schematic diagram of the testis and vas deferens of healthy and diseased of the Gloydius ussuriensis 注：1、4.健康烏蘇里蝮5月的曲細(xì)精管及生精上皮，2、4.具腫塊烏蘇里蝮的曲細(xì)精管及生精上皮，3、6.小腸腫脹烏蘇里蝮的曲細(xì)精管及生精上皮，7、10.健康烏蘇里蝮5月的輸精管及輸精管壁，8、11.具腫塊烏蘇里蝮的輸精管及輸精管壁，9、12.小腸腫脹烏蘇里蝮的輸精管及輸精管壁；a.管壁破裂，b.束狀排列的生精細(xì)胞，c.空泡狀細(xì)胞，d.管腔中絲狀物，e.細(xì)胞破裂，f.“拉絲”狀結(jié)構(gòu)，g.黏膜層與肌層破裂，h.黏膜細(xì)胞缺損，i.上皮細(xì)胞呈假復(fù)層結(jié)構(gòu)；L.腔，Leyd.間質(zhì)細(xì)胞，SPG.精原細(xì)胞，SPC.精母細(xì)胞，SPT.精子細(xì)胞，Sert.支持細(xì)胞，SPZ.精子，Ec.脫落細(xì)胞 Notes：1 and 4.Seminiferous tubules and spermatogenic epithelium of Gloydius ussuriensis in May，2 and 4.Seminiferous tubules and seminiferous epithelium of Gloydius ussuriensis s with lump，3 and 6.The seminiferous tubules and seminiferous epithelium of Gloydius ussuriensis with swelling of small intestine，7 and 10.Vas deferens and vas deferens wall in May of healthy Gloydius ussuriensis，8 and 11.The vas deferens and the wall of the vas deferens of Gloydius ussuriensis with lump，9 and 12.The vas deferens and the wall of the vas deferens in small intestine swelling of Gloydius ussuriensis；a.Rupture of pipe wall，b.Fasciculate spermatogenic cells，c.Vacuolar cell，d.A filamentous substance in a lumen，e.Cell rupture，f.“drawing” structure，g.Rupture of mucous layer and muscle layer，h.Mucosal cell defect，i.Epithelial cells with pseudo-lamellar structure；L.Lumen，leyd.Leydig cells，SPG.Spermatogonia，SPC.Spermatocytes，SPT.Spermatids，Sert.Sertoli cells，SPZ.Spermatozoa，Ec.Exfoliative cell

表3 烏蘇里蝮精巢和輸精管形態(tài)學(xué)測量

Tab.3 Morphological measurements of the testis and vas deferens of male Gloydius ussuriensis

注：*表示呈顯著性差異(P<0.05)；**表示呈極顯著性差異(P<0.01)

Note：*Indicates correlations between date(P<0.05).**Indicates extermely significant correlations between date(P<0.01)

小腸腫脹烏蘇里蝮精巢中曲細(xì)精管排列出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，一般為6—9個曲細(xì)精管聚集在一起，其間間質(zhì)成分較少。精巢的生精上皮未見束狀排列以及有序的生精過程，僅可見極少的分裂相，其結(jié)構(gòu)更加松散和雜亂(圖2 3)。有更多生精上皮細(xì)胞出現(xiàn)了水樣變性或脂肪樣變性，使得生精上皮整體染色較健康蛇和具腫塊蛇的更淺(圖2 6e)。管腔較小，其中絲狀物稀疏，還可觀察到圓形核的游離細(xì)胞和極少量的具桿狀核的變態(tài)精子細(xì)胞(圖2 3d)。

表3顯示，曲細(xì)精管直徑依大小順序?yàn)椋壕吣[塊蛇>健康蛇>小腸腫脹蛇，具腫塊蛇和小腸腫脹蛇的曲細(xì)精管直徑與健康蛇之間分別呈顯著性差異(P<0.05)和極顯著性差異(P<0.01)。生精上皮厚度，具腫塊蛇與健康蛇較接近，而小腸腫脹蛇與健康蛇之間呈極顯著性差異(P<0.01)。

2.2.2 輸精管

健康烏蘇里蝮輸精管壁由內(nèi)向外依次為黏膜層、肌層和漿膜(圖2 10)。黏膜層為矮柱狀上皮細(xì)胞，細(xì)胞排列整齊，胞核圓形或橢圓形，深染，位于細(xì)胞基底部。胞質(zhì)均勻，游離緣可見微弱的微絨毛。在黏膜層細(xì)胞中，可見個別細(xì)胞有脫離基膜的趨勢，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。同時，在管腔精子中也觀察到圓形非精子細(xì)胞的存在，故將這些細(xì)胞暫稱為“脫落細(xì)胞”，大多輸精管橫切面中均可見3個左右脫落細(xì)胞。肌層由4—6層平滑肌構(gòu)成，細(xì)胞飽滿，胞核梭形，深染；漿膜層為結(jié)締組織，含有豐富血管和神經(jīng)。輸精管管腔內(nèi)含有大量精子聚合在一起形成的精子團(tuán)(圖2 7)，精子團(tuán)占據(jù)了輸精管的絕大部分空間，其與管壁分離之處均可見由稀薄的分泌物形成的“拉絲”狀結(jié)構(gòu)(圖2 10f)。精子團(tuán)結(jié)構(gòu)密集，其所占面積是管腔總面積的79%。

具腫塊烏蘇里蝮輸精管管壁黏膜上皮細(xì)胞由1—2層立方上皮細(xì)胞構(gòu)成，細(xì)胞排列出現(xiàn)松散跡象，細(xì)胞中可見大量的空泡狀結(jié)構(gòu)，即水樣變性或脂肪樣變性?？梢姸嗵庰つぜ?xì)胞出現(xiàn)破損現(xiàn)象(圖2 11h)，且細(xì)胞間的連接有明顯的損傷，使胞間出現(xiàn)了較大的空隙(圖2 8g)。肌層有增厚的趨勢，大多數(shù)區(qū)域可分辨出9層平滑肌細(xì)胞。另外，構(gòu)成漿膜的結(jié)締組織明顯較健康蛇增厚，但結(jié)構(gòu)較稀疏。輸精管中精子團(tuán)與管壁完全分離，“拉絲”狀結(jié)構(gòu)消失；精子團(tuán)中脫落細(xì)胞數(shù)增多，平均達(dá)到8個。精子團(tuán)面積明顯縮小，僅占管腔總面積的70%。

小腸腫脹烏蘇里蝮輸精管管壁黏膜層明顯增厚，黏膜上皮細(xì)胞形似假復(fù)層上皮結(jié)構(gòu)，可分辨出2—4層細(xì)胞核(圖2 12i)。胞核大小不一，圓形或橢圓形；胞質(zhì)呈絮狀，很多區(qū)域均呈空腔狀，個別區(qū)域有明顯的缺損現(xiàn)象。肌層厚度小于健康蛇和具腫塊蛇，細(xì)胞排列緊密，由2—3層平滑肌細(xì)胞構(gòu)成。漿膜完整。精子團(tuán)進(jìn)一步縮小，其密度也有明顯降低。但其中的脫落細(xì)胞數(shù)明顯增加，均數(shù)達(dá)到了15個。精子團(tuán)面積僅占管腔總面積的49%。

表3顯示，具腫塊蛇輸精管黏膜上皮厚度雖略大于健康蛇，但兩者間無顯著性差異，而小腸腫脹蛇的輸精管黏膜上皮厚度幾乎是健康蛇的2倍，它們之間呈極顯著性差異(P<0.01)。2條患病蛇輸精管橫切面積以及精子團(tuán)面積均小于健康蛇，并與健康蛇之間均具有顯著性差異，患病蛇的輸精管面積與精子團(tuán)面積的比值均小于健康蛇，且與健康蛇之間呈極顯著性差異(P<0.01)。

2.2.3 消化道旁腫塊

對消化道旁腫塊的組織學(xué)觀察可知，腫塊有橫切面完整的被膜，并有向內(nèi)突起的嵴(圖3 1a)，被膜中有豐富的毛細(xì)血管分布，且在血管周圍可見較多的嗜酸性顆粒細(xì)胞的分布(圖3 2c)；被膜內(nèi)物質(zhì)可分為內(nèi)外2層結(jié)構(gòu)，外層嗜酸性，呈淡粉紅色，質(zhì)地均勻呈蠟樣，其間有不規(guī)則的裂隙部分(圖3 1d)；內(nèi)層弱嗜堿性，均勻度略差，有空泡樣結(jié)果存在(圖3 1b)。

2.2.4 小腸腫脹

正常烏蘇里蝮小腸絨毛主要由黏膜層和少量的黏膜下層構(gòu)成，黏膜層的固有層中未見腺體分布(圖3 3、4)。但在小腸腫脹蛇的小腸黏膜層中，可見發(fā)育程度極好的腺體，并可清晰分辨腺體近腸腔處為黏液腺細(xì)胞構(gòu)成(圖3 5、6e)，其下方腺細(xì)胞呈典型的分泌蛋白質(zhì)(酶)的染色特征，類似于胃底腺的染色特征。

3 討論

作為真正適應(yīng)陸地生活的爬行類，影響其繁殖活動的環(huán)境因子中最主要的是溫度，其次是濕度[14-15]。因此，在溫帶分布的爬行動物生殖均有著明顯的季節(jié)性[16-17]。Girons[18]認(rèn)為雄性爬行類生殖周期可劃分為交配后型、交配前型、混合型和連續(xù)型等4種類型，其中交配后型適用于分布在溫帶地區(qū)的爬行類。它們的精子發(fā)生于溫暖的季節(jié)，成熟的精子儲存于附睪及輸精管內(nèi)，交配期一般在春天。李建立等[10]研究顯示，東北地區(qū)的烏蘇里蝮交配盛期為6—7月。本研究發(fā)現(xiàn)圈養(yǎng)條件下，5月健康的烏蘇里蝮曲細(xì)精管的組織學(xué)結(jié)構(gòu)特征正處于新一輪生精過程的起始，而大量的成熟精子則集中于輸精管中，這種現(xiàn)象與交配后型生殖周期的特點(diǎn)相符。即可以確定，東北地區(qū)分布的烏蘇里蝮的生殖周期應(yīng)該屬于交配后型。那么被觀察的烏蘇里蝮輸精管中的精子就應(yīng)該是上一年度生精過程產(chǎn)生的，在越冬期儲存于輸精管中，等待進(jìn)行交配[19-23]。這種生殖周期的特性也就解釋了本研究所觀察到的健康蛇、具腫塊蛇和小腸腫脹蛇輸精管中精子形態(tài)和各部分測量數(shù)值上沒有明顯的差異現(xiàn)象。但由于已經(jīng)觀察到2條患病蛇輸精管結(jié)構(gòu)有了明顯的病變特征，由此可以推測輸精管的功能在一定程度上也將有所變化，而在這樣變化了微環(huán)境的輸精管中儲存的精子是否能確保具有良好的精子活力，有待于進(jìn)一步觀察研究。

圖3 烏蘇里蝮健康蛇和患病蛇的消化道結(jié)構(gòu)Fig.3 The schematic diagram of digestive tract structure of healthy and diseased Gloydius ussuriensis 注：1.腫塊整體橫切面，2.被膜，3、4.正常烏蘇里蝮小腸結(jié)構(gòu)，5、6.小腸腫脹區(qū)段小腸結(jié)構(gòu)；a.嵴，b.內(nèi)層弱嗜堿性，c.嗜酸性顆粒細(xì)胞，d.外層嗜酸性，e.黏液腺細(xì)胞 Note：1.The cross section of the lump，2.Capsule，3 and 4.Normal intestinal structure of Gloydius ussuriensis，5 and 6.Small intestine structure in swelling section of small intestine；a.Crest，b.The inner layer is weak basophilic，c.Eosinophils，d.Outer layer eosinophil，e.Mucinous gland cells

動物臟器重量、形態(tài)和色澤是衡量動物健康與否的重要指標(biāo)，也是動物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。依據(jù)這些指標(biāo)可以大體確定內(nèi)臟器官病變的性質(zhì)和程度[24]。另外，在對兩棲類生殖器官的研究中發(fā)現(xiàn)精巢重量可以作為檢測精巢功能的一個適當(dāng)指數(shù)，精巢重量的季節(jié)性變化與精子發(fā)生的進(jìn)程一致[8]。在本研究中也顯示了2條患病蛇精巢在形態(tài)和色澤與健康蛇有明顯的差異，在精巢系數(shù)和精巢長與體長的比值上與健康蛇有顯著差別，這就提示了患病蛇精巢出現(xiàn)了較嚴(yán)重的病變可能。從組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察進(jìn)一步證實(shí)了患病蛇曲細(xì)精管和輸精管的結(jié)構(gòu)以及精子演化進(jìn)程等方面患病蛇與健康蛇之間具有顯著差異，這將嚴(yán)重影響下一年度精子的演化和發(fā)育，進(jìn)而導(dǎo)致繁殖行為的失敗。

在畜禽養(yǎng)殖中，將動物攝入的營養(yǎng)成分劃分為轉(zhuǎn)化營養(yǎng)、免疫營養(yǎng)、生殖營養(yǎng)、生態(tài)營養(yǎng)和水營養(yǎng)等5個方面，其中，生殖營養(yǎng)是指能調(diào)理畜禽內(nèi)分泌機(jī)能，完善生殖器官結(jié)構(gòu)與功能的功能性成分[25]。目前，雖然蛇類疾病已有較廣泛的研究[26-31]，但針對生殖系統(tǒng)疾病以及生殖系統(tǒng)與其他系統(tǒng)疾病的關(guān)系研究均未見報(bào)道。本研究所觀察的2條患病蛇，除消化道有相應(yīng)的病變外，其他器官均未見明顯的形態(tài)學(xué)上的變化。因此，我們推測消化系統(tǒng)疾病導(dǎo)致了動物對食物的消化和吸收功能減弱，進(jìn)而機(jī)體投入繁育的營養(yǎng)和能量出現(xiàn)了調(diào)整，致使生殖腺結(jié)構(gòu)的退行性變化。但這樣的推測還需要積累更多的資料，不過本研究的結(jié)果，也給蛇類養(yǎng)殖業(yè)提供了一個必須重視的問題，即需要時常觀察蛇類的進(jìn)食、活動程度及日常行為變化，便于及時對養(yǎng)殖蛇進(jìn)行篩選，確保種蛇的健康并能進(jìn)行正常繁育，確保商品蛇有較高的轉(zhuǎn)化率，避免養(yǎng)殖過程中不必要的人力和財(cái)力浪費(fèi)。由于對蛇類健康指標(biāo)研究的欠缺，還需要努力積累相關(guān)各項(xiàng)數(shù)據(jù)。

淀粉樣變性是一組由于各種原因引起的蛋白質(zhì)錯誤折疊形成了含有β折疊片結(jié)構(gòu)的淀粉樣物質(zhì)浸潤、沉積在臟器細(xì)胞間導(dǎo)致的組織損傷或進(jìn)行性多器官功能障礙的疾病。可以利用常規(guī)組織學(xué)染色中的HE染色方法做出初步判斷[32]。本研究中消化道旁腫塊的HE染色切片中，可觀察到腫塊中間物質(zhì)呈粉紅色，不定型，蠟樣和有特征性裂紋，這些均為淀粉樣變性的典型診斷指標(biāo)，但大多數(shù)的淀粉樣變性均散布于組織間，少有呈息肉樣病變或者結(jié)節(jié)樣隆起[33]。而本研究中的腫塊獨(dú)立于消化道外，僅由漿膜與小腸連接在一起。因此，烏蘇里蝮的消化道旁腫塊是否屬于特殊類型的淀粉樣變性還需進(jìn)一步研究。

對爬行類消化道研究顯示，僅在十二指腸黏膜層中可見不甚發(fā)達(dá)的十二指腸腺，而小腸黏膜中均未見腸腺的分布[34-36]。但在人類醫(yī)學(xué)研究十二指腸中，有一種來自胚胎期固有層腸腺延伸至黏膜下層而成特化的腺體(Brunne腺)，其腺泡細(xì)胞為漿-黏液細(xì)胞，分泌堿性黏液、碳酸氫鹽等以保護(hù)十二指腸黏膜免受胃液和胰液消化侵蝕。而且，在高胃酸分泌情況下，腺體會出現(xiàn)保護(hù)性的增生，偶爾在胃竇和空腸前端可見，故又稱Brunne腺錯構(gòu)瘤[37-38]。本研究中，烏蘇里蝮小腸腫脹區(qū)段黏膜層出現(xiàn)的極其發(fā)達(dá)的腺體，即由黏液腺細(xì)胞和漿液腺細(xì)胞構(gòu)成。那么，是否與Brunne腺錯構(gòu)瘤有著類似的形成原因，仍需要深入研究。

由于蛇類養(yǎng)殖起步不久，對其生長過程中各方面營養(yǎng)需求和疾病防治遠(yuǎn)不及畜禽研究的全面和深入，還需要不斷探索，揭示蛇類養(yǎng)殖和疾病防御的一系列問題。