流式細(xì)胞術(shù)診斷急性混合細(xì)胞白血病臨床意義探討

劉夫鵬　劉紅黔

[摘要] 目的 對(duì)急性混合細(xì)胞白血病臨床診斷中流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討。 方法 方便選擇該院2014年1月—2017年12月收治的初發(fā)急性白血病患者416例，應(yīng)用流式細(xì)胞儀和三色熒光標(biāo)記抗體檢測(cè)免疫表型。結(jié)果 416例初發(fā)急性白血病患者，28例（6.7%）為混合細(xì)胞白血?。∕AL），其中20例（71.4%）B/髓系表達(dá)，6例（21.4%）T/B共表達(dá)，2例（7.1%）T/髓共表達(dá);FAB分型診斷為急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）142例，62例純淋系抗原表達(dá)，80例（56.3%）淋系伴髓系抗原表達(dá)（My+ALL）;FAB分型診斷為急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）246例，158例純髓系抗原表達(dá)，88例（35.8%）髓系伴淋系抗原表達(dá)（Ly+AML）;MAL28例，cCD3、CD79a、MPO表達(dá)比例分別為100.0%、100.0%、64.3%。MAL28例中表達(dá)CD34患者26例（92.9%）。18例（81.8%）CD117表達(dá)。 結(jié)論 實(shí)際中單純通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)無(wú)法準(zhǔn)確診斷MAL、My+-ALL、Ly+-AML，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型可彌補(bǔ)FAB分型不足，準(zhǔn)確進(jìn)行白血病細(xì)胞的分型診斷，為進(jìn)一步開(kāi)展臨床治療提供有效依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 混合細(xì)胞白血病;流式細(xì)胞儀;免疫分型

[中圖分類號(hào)] R733.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）09（a）-0036-03

[Abstract] Objective To investigate the application value of flow cytometry in the clinical diagnosis of acute mixed cell leukemia. Methods A total of 416 patients with initial acute leukemia admitted to this hospital from January 2014 to December 2017 were convenient selected and enrolled. The immunophenotype was detected by flow cytometry and trichrome fluorescent antibody. Results Of the 416 patients with newly diagnosed acute leukemia， 28 cases（6.7%） were mixed cell leukemia （MAL），in cluding 20 cases（71.4%） were B/medullary， 6 cases（21.4%） were co-expressed， and 2 cases（7.1%） T/myeloid co-expression; FAB typing diagnosis of 142 cases of acute lymphoblastic leukemia （ALL）， 62 cases of pure lymphoid antigen expression， 80 cases （56.3%） of lymphoid system with myeloid antigen expression （My+ALL） FAB classification diagnosis of acute myeloid leukemia （AML） in 246 cases， 158 cases of pure myeloid antigen expression， 88 cases （35.8%） myeloid with lymphoid antigen expression （Ly + AML）; MAL 28 cases， cCD3， CD79a， MPO expression ratios were 100.0%， 100.0%， and 64.3%， respectively. In MAL28 patients， 26 patients （92.9%） expressed CD34， 18 cases（81.8%） had CD117 expression. Conclusion In practice， MAL， My+-ALL and Ly+-AML cannot be accurately diagnosed by cell morphology alone. Flow cytometry immunophenotyping can make up for the deficiency of FAB typing and accurately diagnose the classification of leukemia cells， providing effective basis for further clinical treatment.

[Key words] Mixed cell leukemia; Flow cytometry; Immunophenotyping

近年來(lái)細(xì)胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，MICM分型方案被廣泛應(yīng)用于臨床白血病臨床診斷，其中白血病免疫學(xué)分型發(fā)展最快，作為研究急性白血病的基礎(chǔ)性手段，其有效補(bǔ)充了傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)檢查不足[1-2]。該研究將分析并總結(jié)2014年1月—2017年12月應(yīng)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行急性白血病血細(xì)胞簇分化抗原CD系列檢測(cè)結(jié)果，對(duì)急性混合細(xì)胞白血病診斷中流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行明確，報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選擇該院收治初發(fā)急性白血病患者416例，患者均于流式細(xì)胞室行血細(xì)胞促分化抗原CD系列檢測(cè)。416例患者中，142例為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL），其中包括女54例、男88例;年齡2～65歲，平均（27.8±3.5）歲。246例急性髓細(xì)胞白血病（AML），其中包括女110例、男136例;年齡范圍7～81歲，平均（41.6±3.6）歲。28例混合細(xì)胞白血?。∕AL），其中包括女6例、男22例;年齡范圍7～65歲，平均（33.4±2.8）歲。有BD公司提供所有熒光標(biāo)記單克隆抗體（McAb）及其他試劑;應(yīng)用熒光包括PE（藻紅蛋白熒光素）、FITC（異硫氰酸熒光素）、PerCP（葉綠素蛋白）;胞漿抗體為CD79a、MP0、cCD3;胞膜單克隆抗體為CD33、CD13、CD14、CD15、CD11b、CD117、CD3、CD4、CD5、CD7、CD10、CD8、CD20、CD19、HLA-DR、CD45。

1.2? 儀器和設(shè)備

單激光三色流式細(xì)胞儀由美國(guó)BD公司生產(chǎn);高速低溫離子機(jī)由美國(guó)貝克曼公司生產(chǎn)。

1.3? 試驗(yàn)方法

應(yīng)用直接免疫熒光標(biāo)記法進(jìn)行熒光標(biāo)記染色，治療前為所有病例抽取外周血或抗凝骨髓3～5 mL。標(biāo)本染色前進(jìn)行細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)，應(yīng)用磷酸鹽緩沖液稀釋骨髓標(biāo)本并計(jì)數(shù)，將有核細(xì)胞數(shù)密度調(diào)整為1×106個(gè)/mL，6 h內(nèi)行染色體標(biāo)記。

1.3.1? 胞膜抗原染色過(guò)程? 對(duì)流式專用試管進(jìn)行標(biāo)記，將PE、FITC、PerCP標(biāo)記的抗體加入管中，同時(shí)設(shè)定同型對(duì)照（IgG1和IgG2a），加入抗凝骨髓后避光孵育15 min，溶血素2 mL裂解紅細(xì)胞10 min，離心后去除上清，PBS洗滌，加入300 μLPBS后檢測(cè)。胞漿抗原染色：固定已進(jìn)行膜抗原標(biāo)記的標(biāo)本，加入破膜劑作用10 min，PBS洗滌后加胞漿抗體，避光孵育15 min，進(jìn)行PBS洗滌，加300 μL緩沖液檢測(cè)。

1.3.2? 流式細(xì)胞儀檢測(cè)和分析? 應(yīng)用三色標(biāo)準(zhǔn)熒光微球校準(zhǔn)儀器進(jìn)行儀器流路和光路的檢測(cè)，對(duì)儀器的各種參數(shù)進(jìn)行設(shè)置和調(diào)節(jié)，應(yīng)用Cellquest軟件對(duì)獲取條件進(jìn)行設(shè)置，依次上樣獲得數(shù)據(jù)，然后進(jìn)行幼稚細(xì)胞群中白血病細(xì)胞表面標(biāo)記的計(jì)算。結(jié)果判斷時(shí)按照同型對(duì)照設(shè)置對(duì)抗原表達(dá)強(qiáng)弱進(jìn)行描述。

1.4? 診斷標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、臨床表現(xiàn)、細(xì)胞化學(xué)染色、免疫分型指標(biāo)確診。依據(jù)FAB分型標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷，參照歐洲白血病免疫分型協(xié)作組（EGIL）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行MAL分娩分型診斷。

2? 結(jié)果

2.1? FAB分型

416例急性白血病患者FAB分型結(jié)果，見(jiàn)表1。

2.2? 免疫表型分型結(jié)果

初發(fā)急性白血病FAB分型和免疫分型結(jié)果，見(jiàn)表2。

2.3? 28例混合細(xì)胞白血病免疫分型主要抗原表達(dá)

28例混合細(xì)胞白血病免疫分型主要抗原表達(dá)情況，見(jiàn)表3。

3? 討論

白血病患者的造血細(xì)胞在某分化階段會(huì)大量積累白血病細(xì)胞，臨床中檢驗(yàn)分析這些細(xì)胞可對(duì)患者進(jìn)行正確分型，進(jìn)而為臨床診斷和治療提供有效依據(jù)[3-5]。臨床中存在多種診斷白血病技術(shù)，其中應(yīng)用最廣泛的分型和診斷方法是形態(tài)學(xué)分型，其具有明確的分型標(biāo)準(zhǔn)。但作為經(jīng)典分型標(biāo)準(zhǔn)，F(xiàn)AB具有一定局限，其對(duì)檢驗(yàn)者的經(jīng)驗(yàn)要求較高，同時(shí)存在較強(qiáng)的主觀性，所以臨床診斷符合率不高，形態(tài)學(xué)不足雖然能夠通過(guò)細(xì)胞化學(xué)染色得到一定程度彌補(bǔ)，但細(xì)胞內(nèi)環(huán)境變異性和染色方法的酶學(xué)靈敏性會(huì)形成制約，難以得到較高符合率[6-7]。

當(dāng)前臨床開(kāi)始廣泛認(rèn)識(shí)到白血病免疫學(xué)分型的重要意義，流式細(xì)胞術(shù)是白血病免疫分型的重要方法，其通過(guò)不同熒光標(biāo)記單克隆抗體標(biāo)記細(xì)胞，獲得SSC、FSC、多個(gè)熒光參數(shù)，在此基礎(chǔ)上對(duì)細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜的免疫分型進(jìn)行分析，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)白血病細(xì)胞的有效檢測(cè)，外周血、骨髓、腦脊液是可進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本類型，能夠避免FAB分型方法的不足[8-10]。流式細(xì)胞術(shù)通過(guò)分析細(xì)胞核特定生物大分子，可對(duì)其分類、來(lái)源、分化狀況進(jìn)行精確判定，白血病分型準(zhǔn)確性和診斷靈敏度大大提升，對(duì)于臨床進(jìn)一步開(kāi)展治療具有重要價(jià)值。

該研究中，416例初發(fā)急性白血病患者，28例（6.7%）為混合細(xì)胞白血?。∕AL），其中20例（71.4%）B/髓系表達(dá)，6例（21.4%）T/B共表達(dá)，2例（7.1%）T/髓共表達(dá);FAB分型診斷為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）142例，62例純淋系抗原表達(dá)，80例（56.3%）淋系伴髓系抗原表達(dá)（My+ALL）;FAB分型診斷為急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）246例，158例純髓系抗原表達(dá)，88例（35.8%）髓系伴淋系抗原表達(dá)（Ly+AML）;MAL28例，cCD3、CD79a、MPO表達(dá)比例分別為100.0%、100.0%、64.3%。MAL28例中表達(dá)CD34患者26例（92.9%）。18例（81.8%）CD117表達(dá)。可見(jiàn)，實(shí)際中單純通過(guò)細(xì)胞形態(tài)學(xué)無(wú)法準(zhǔn)確診斷MAL、My+-ALL、Ly+-AML，流式細(xì)胞術(shù)免疫分型可彌補(bǔ)FAB分型不足，準(zhǔn)確進(jìn)行白血病細(xì)胞的分型診斷。王建中[11]研究顯示，F(xiàn)AB分型診斷為急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）36.7%，15.9%純淋系抗原表達(dá)，20.8%淋系伴髓系抗原表達(dá)（My+ALL）;FAB分型診斷為急性髓細(xì)胞白血?。ˋML）63.3%，40.2%純髓系抗原表達(dá)，23.1%髓系伴淋系抗原表達(dá)（Ly+AML）。這進(jìn)一步驗(yàn)證了該研究結(jié)論。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)在急性混合型白血病診斷中具有較大意義，后期有待進(jìn)一步探討其與疾病治療、預(yù)后的關(guān)系。另外該研究樣本容量較小，未來(lái)研究中應(yīng)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本容量，提升研究結(jié)果的科學(xué)性。在急性混合細(xì)胞白血病診斷中流式細(xì)胞術(shù)具有重要價(jià)值，其能夠有效提升白血病細(xì)胞分型診斷效果，對(duì)于患者進(jìn)一步接受有效治療具有重要意義。

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（收稿日期：2019-06-04）