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    葵花籽油的酶輔助壓榨制備工藝優(yōu)化

    2019-11-15 08:05:34郭紫婧趙修華祖元?jiǎng)?/span>王思瑩劉佩巖
    植物研究 2019年6期
    關(guān)鍵詞:出油率葵花籽果膠酶

    郭紫婧 趙修華 祖元?jiǎng)?王思瑩 劉佩巖

    (東北林業(yè)大學(xué)森林植物生態(tài)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,哈爾濱 150040)

    葵花籽是世界重要油料資源之一,且其種植地在我國(guó)分布廣泛,是我國(guó)主要的油料作物之一??ㄗ延鸵云洫?dú)特的營(yíng)養(yǎng)保健作用成為人們最喜愛(ài)的食用油??ㄗ延椭詡涫芮嗖A,主要在于它含油量高,籽仁含油平均高達(dá)50%[1],其味道芳香可口;并且含有90%的不飽和脂肪酸,其中亞油酸占66%,還含有VE、植物固醇磷脂、胡蘿卜素等營(yíng)養(yǎng)成分,具有調(diào)節(jié)新陳代謝、維持血壓平衡、降低血液中膽固醇含量等作用[2]。

    在《花生油、葵花籽油系列國(guó)標(biāo)研討會(huì)》中指出:花生、葵花籽是我國(guó)百姓喜愛(ài)的干果型食品,花生油、葵花籽油是消費(fèi)者公認(rèn)的高端食用油脂,在制修訂標(biāo)準(zhǔn)時(shí),一定要認(rèn)真貫徹“適度加工”的原則,為最大程度保存油料固有的營(yíng)養(yǎng)成分和最大限度地防范因過(guò)度加工而導(dǎo)致有害有毒物質(zhì)的產(chǎn)生。

    目前提取葵花籽油的主要方法有壓榨法、有機(jī)溶劑法和水酶法[3]。壓榨法榨出的油可以保留葵花籽油的特有風(fēng)味,但出油率普遍較低。壓榨法分為冷榨法和熱榨法,冷榨葵花籽油的顏色較淺,澄清透明,整體的外觀(guān)表現(xiàn)較好但出油率較低;熱榨葵花籽出油率較高,但油顏色深,不飽和脂肪酸受熱易氧化。有機(jī)溶劑法提油效率高,過(guò)氧化值低,但存在溶劑殘留問(wèn)題,導(dǎo)致食用安全性較差并造成環(huán)境污染。酶具有改善食品品質(zhì)和加工性能,在食品工業(yè)中應(yīng)用日益深入和廣泛。酶可以作為降解植物細(xì)胞壁和油體蛋白的手段,進(jìn)而釋放油脂[4]。已有水酶法提取葵花籽油的工藝報(bào)道,雖然獲得油脂的品質(zhì)較好,但在酶解過(guò)程中加水量較大,使后續(xù)油水分離困難;冷榨法油脂雖然品質(zhì)好,但出油率偏低。

    理論上講,酶輔助壓榨法制得的葵花籽油,既可以降低榨油溫度來(lái)保持葵花籽的特殊風(fēng)味,又可以避免過(guò)度加工所造成的食品安全問(wèn)題,還可以更充分地利用原料,避免資源浪費(fèi)和環(huán)境污染。本文擬采用酶輔助壓榨法制備葵花籽油,優(yōu)化其最優(yōu)制備條件,以期為實(shí)際生產(chǎn)提供理論指導(dǎo)。

    1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    (1)葵花籽:市售脫殼葵花籽(含水量約為8%,含油量約為54.93%),產(chǎn)地為內(nèi)蒙古巴彥淖爾。

    (2)纖維素酶(50 μ·mg-1)、α-淀粉酶(50 μ·mg-1)和酸性蛋白酶(50 μ·mg-1)由上海源葉生物科技有限公司提供;果膠酶(50 μ·mg-1)、堿性蛋白酶(50 μ·mg-1)和中性蛋白酶(50 μ·mg-1)均由西安隆茂生物科技有限公司提供。

    1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備

    粉碎機(jī):CRC公司;AB204-S/FACT電子天平:METTLER TOLEDO股份有限公司;PE 1600電子稱(chēng):METTLER TOLEDO股份有限公司;B-491熱水浴鍋:BUCHI實(shí)驗(yàn)室技術(shù)服務(wù)有限公司;鼓風(fēng)干燥式烘箱:THERMO FISHER SCIENTIFIC股份有限公司;榨油機(jī):六木牌SG30-2D小型家用榨油機(jī);cu-5000離心機(jī):DAMON公司;索氏提取器:KIMAX玻璃器皿。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 葵花籽油制取的實(shí)驗(yàn)步驟

    (1)將去殼葵花籽稍微粉碎,過(guò)10目篩,稱(chēng)取適量葵花籽粉末備用;

    (2)稱(chēng)取適量超純水,調(diào)至適宜pH值;

    (3)稱(chēng)取適量酶,加入適宜pH值的超純水中,混勻,制成酶液;

    (4)將酶液噴灑至備用的葵花籽粉末中,攪拌均勻;

    (5)將灑入酶液的葵花籽放入適溫的恒溫水浴鍋中反應(yīng)若干小時(shí),每30 min攪拌1次;

    (6)將酶解后的葵花籽60℃烘干2 h至含水量低于5%;

    (7)將烘干的葵花籽榨油,榨油溫度控制在35℃(±5℃),壓榨3遍;

    (8)將毛油進(jìn)行離心(5 000 r·min-1,10 min),得到清油,稱(chēng)重并計(jì)算出油率。

    (9)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,以平均數(shù)作為某一條件下出油率結(jié)果。

    1.2.2 葵花籽含油率測(cè)定方法

    在酶輔助榨油單因素實(shí)驗(yàn)之前,采用索氏提取法[5]對(duì)葵花籽原料的含油率進(jìn)行了測(cè)定。稱(chēng)取粉碎后的葵花籽原料5 g,并包裹入濾紙筒內(nèi),將濾紙筒放入抽提筒內(nèi),連接脂肪燒瓶,加入石油醚至瓶?jī)?nèi)容積的2/3處,通入冷凝水,將底瓶浸沒(méi)在恒溫水浴鍋中75℃加熱,回流提取6 h,提取完畢后將脂肪瓶旋蒸至恒重,稱(chēng)重,計(jì)算葵花籽含油率。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次,取平均值。算公式:

    (1)

    式中:X為葵花籽原料的含油率(%);m為投入的葵花籽原料質(zhì)量(g);m0為脂肪燒瓶的質(zhì)量(g);m1為葵花籽油和脂肪燒瓶的質(zhì)量(g)。

    1.2.3 葵花籽冷榨法出油率測(cè)定方法

    為了更好地體現(xiàn)酶輔助榨油法對(duì)提油率的影響,在實(shí)驗(yàn)之前進(jìn)行了葵花籽原料冷榨出油率測(cè)定。將葵花籽烘干至含水率低于5%,稱(chēng)取200 g烘干后的葵花籽放入榨油機(jī)中榨油,反復(fù)榨取3次,將榨出的毛油離心,并將離心后的清油稱(chēng)重,計(jì)算出油率。將實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取平均值。計(jì)算公式:

    (2)

    式中:X為出油率(%);m為投入的葵花籽原料質(zhì)量(g);m1為葵花籽清油質(zhì)量(g)。

    1.2.4 酶輔助壓榨法對(duì)葵花籽出油率的影響

    實(shí)驗(yàn)采用單因素實(shí)驗(yàn)方法,從酶的種類(lèi)、酶的添加量、pH值、液料比、酶解溫度和酶輔助壓榨法時(shí)間六個(gè)方面考察了不同的酶反應(yīng)條件對(duì)葵花籽出油率的影響,最后得到提油效率最高的工藝條件。

    1.2.4.1 酶種類(lèi)對(duì)葵花籽出油率的影響

    油料作物中含有多種成分,由于酶在酶解過(guò)程中的專(zhuān)一性[6],所以需要確定不同種類(lèi)的酶對(duì)油提取效率的影響。劉媛媛[7]采用水酶法提取葵花籽油的研究中,測(cè)試了不同酶對(duì)葵花籽油提取效率的影響,其中果膠酶、α-淀粉酶、纖維素酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶對(duì)提油效率有較大提高。本實(shí)驗(yàn)將采用果膠酶、α-淀粉酶、纖維素酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶和中性蛋白酶進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),最后確定對(duì)提油效率影響最大的酶的種類(lèi)。

    1.2.4.2 酶添加量對(duì)葵花籽出油率的影響

    在不考慮底物數(shù)量的條件下,反應(yīng)的速率和酶的添加量成正相關(guān),然而,酶具有高效性,即在底物數(shù)量一定的情況下,由于酶的催化活性很高,當(dāng)酶添加到一定量的時(shí)候,反應(yīng)速率達(dá)到飽和點(diǎn)時(shí),繼續(xù)添加酶也不會(huì)使反應(yīng)速率增加。相反,繼續(xù)增大酶量很可能會(huì)導(dǎo)致酶相互附著,降低酶與底物的傳質(zhì)效率,反而降低反應(yīng)效率[8]。從反應(yīng)效率和生產(chǎn)成本方面考慮,本實(shí)驗(yàn)將酶與原料的質(zhì)量比設(shè)置為0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%和1%,最后確定最佳酶添加量。

    1.2.4.3 pH值對(duì)葵花籽出油率的影響

    pH是酶解工藝中的一個(gè)重要參數(shù),對(duì)酶的活性和油與蛋白質(zhì)的分離、提取具有一定影響。不同種類(lèi)的酶對(duì)pH條件的要求也不同,在最適pH時(shí),酶分子才能發(fā)揮最大活性和最佳效率。經(jīng)查閱資料[9~13]得,果膠酶的適宜pH條件為3.0~5.0;α-淀粉酶的適宜pH條件為5.0~7.0;纖維素酶的適宜pH條件為3.5~6.5;酸性蛋白酶的適宜pH條件為2.5~5.0;堿性蛋白酶的適宜pH條件為9.0~11.0;中性蛋白酶的適宜pH條件為7.0~8.0。本實(shí)驗(yàn)將先確定最佳酶種類(lèi),再根據(jù)實(shí)際使用的酶進(jìn)行pH條件的篩選,最后確定最佳pH值。

    1.2.4.4 液固比對(duì)葵花籽出油率的影響

    水可以促使酶更好地溶解,從而使酶更好地與底物接觸,增加酶解的效率[14]。但加水量過(guò)多會(huì)影響油料作物的天然香味,并且增加后續(xù)榨油的操作難度。加水量過(guò)少則會(huì)致使酶無(wú)法與底物均勻接觸,進(jìn)而降低酶解效率,造成油的提取率增加不明顯的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)將液固比條件梯度設(shè)置為15%、20%、25%、30%和35%,最后確定最佳的液固比。

    1.2.4.5 酶解溫度對(duì)葵花籽出油率的影響

    在酶解過(guò)程中溫度對(duì)提油率的影響也很重要,溫度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)使酶失去活性,降低反應(yīng)速率,油和蛋白質(zhì)的品質(zhì)也會(huì)受到影響。和pH條件一樣,每一種酶都有自己的適宜溫度。經(jīng)查閱資料[15~18]得,果膠酶的適宜反應(yīng)溫度為15~55℃;α-淀粉酶的適宜酶解溫度為60~90℃;纖維素酶的適宜酶解溫度為40~60℃;酸性蛋白酶的適宜酶解溫度為30~50℃;堿性蛋白酶的適宜酶解溫度為25~70℃;中性蛋白酶的適宜酶解溫度為40~50℃。本實(shí)驗(yàn)將在確定最佳酶種類(lèi)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行溫度條件的篩選,最后確定最佳酶解溫度。

    1.2.4.6 酶解時(shí)間對(duì)葵花籽出油率的影響

    酶解時(shí)間也會(huì)影響油料作物的提油率。酶解時(shí)間過(guò)短會(huì)使油料不能夠有效地酶解,造成提取率低;時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則會(huì)導(dǎo)致油品質(zhì)下降,且在酶解一定時(shí)間后對(duì)提取率的增加不明顯,造成能源浪費(fèi)。本實(shí)驗(yàn)將時(shí)間條件梯度設(shè)置為:1.5、2、2.5、3和3.5 h,最后確定最佳反應(yīng)時(shí)間。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

    2.1 葵花籽含油率

    采用索氏提取法提取對(duì)葵花籽原料的含油率進(jìn)行了測(cè)定。經(jīng)過(guò)3次反復(fù)實(shí)驗(yàn),得到葵花籽原料的含油率是54.93%。

    2.2 葵花籽冷榨法出油率

    采用冷榨法對(duì)葵花籽原料的出油率進(jìn)行了測(cè)定。經(jīng)過(guò)3次反復(fù)實(shí)驗(yàn),最后得到葵花籽冷榨出油率為13.41%。

    2.3 酶輔助壓榨法工藝條件的確定

    2.3.1 酶的確定

    不同酶的適宜溫度和適宜pH不同,每一種酶的溫度條件和pH條件也有所區(qū)別。果膠酶:50℃,pH=3.0;α-淀粉酶:70℃,pH=6.0;纖維素酶:55℃,pH=4.5;酸性蛋白酶:40℃,pH=4.0;堿性蛋白酶:50℃,pH=10.0;中性蛋白酶:45℃,pH=7.5。在各種酶適宜的溫度和pH、酶添加量為0.5%、液固比30%、酶解時(shí)間3 h條件下,各種酶對(duì)葵花籽出油率的影響見(jiàn)圖1。

    圖1 酶篩選實(shí)驗(yàn)Fig.1 The experiment of enzyme screening

    由圖1可知,使用酶輔助壓榨法可以大大提高冷榨葵花籽的出油率。其中,纖維素酶對(duì)出油率的提高最為明顯,比傳統(tǒng)冷榨法的出油率提高了2倍以上。而使用果膠酶反應(yīng)的樣品,在烘干后出現(xiàn)發(fā)粘的現(xiàn)象,使油脂不容易壓榨出來(lái),導(dǎo)致果膠酶樣品的出油率與其他樣品的出油率有較大差距。根據(jù)酶種類(lèi)篩選的單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)所選用的酶為纖維素酶。

    2.3.2 酶添加量的確定

    在使用纖維素酶、pH=4.5、液固比30%、酶解溫度55℃、酶解時(shí)間3 h的條件下,酶添加量與原料的質(zhì)量比分別設(shè)置為0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%和1%。不同酶添加量對(duì)葵花籽出油率的影響見(jiàn)圖2。

    由圖2可知,隨著酶添加量的增加,出油率也在不斷上升,在0.7%時(shí)達(dá)到最高水平,保持一段平穩(wěn)之后大幅度下降。查閱資料得知,當(dāng)酶添加到一定量的時(shí)候,反應(yīng)速率達(dá)到飽和點(diǎn)時(shí),繼續(xù)添加酶也不會(huì)使反應(yīng)速率增加。但酶添加量過(guò)多,即0.9%、1%時(shí),樣品出現(xiàn)黏著現(xiàn)象,阻礙了榨油時(shí)油脂的釋放,故導(dǎo)致出油率大幅下降。根據(jù)酶添加量單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)所選用的酶添加量為0.7%。

    2.3.3 pH值的確定

    在使用纖維素酶、酶添加量0.7%、液固比30%、酶解溫度55℃、酶解時(shí)間3 h的條件下,根據(jù)纖維素酶反應(yīng)時(shí)適宜的pH區(qū)間,將pH值分別設(shè)置為3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0和6.5。不同pH值對(duì)葵花籽出油率的影響見(jiàn)圖3。

    圖2 酶添加量對(duì)出油率的影響Fig.2 The effects of enzyme dose on oil yield

    圖3 pH值對(duì)出油率的影響Fig.3 The effects of pH on oil yield

    圖4 液固比對(duì)出油率的影響Fig.4 The effects of liquid-solid ratio on oil yield

    由圖3可知,在纖維素酶反應(yīng)時(shí)適宜的pH區(qū)間中,pH條件對(duì)葵花籽出油率影響不大。在pH值為4.5時(shí),出油率最高。根據(jù)pH值單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)將纖維素酶的最適pH確定為4.5。

    2.3.4 液固比的確定

    在使用纖維素酶、酶添加量0.7%、pH=4.5、酶解溫度55℃、酶解時(shí)間3 h的條件下,將水與原料的質(zhì)量比,即液固比分別設(shè)置為15%、20%、25%、30%和35%。不同液固比對(duì)葵花籽油的出油率的影響見(jiàn)圖4。

    由圖4可知,液固比對(duì)葵花籽出油率的影響較大。隨著液固比的增加,出油率呈上升狀態(tài),在25%時(shí)到達(dá)最高值,在30%~35%區(qū)間大幅度下降。液固比較小時(shí),體系粘度較大,不利于酶分子與原料充分接觸,而液固比較大時(shí),加速了油脂與原料的分離,使樣品在烘干后損失了部分油脂,導(dǎo)致榨油時(shí)出油率較低。根據(jù)液固比單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)確定的液固比為25%。

    2.3.5 酶解溫度的確定

    在使用纖維素酶、酶添加量0.7%、pH=4.5、液固比25%和酶解時(shí)間3 h的條件下,根據(jù)纖維素酶解的適宜溫度區(qū)間,將溫度條件設(shè)置為40、45、50、55和60℃。不同溫度對(duì)葵花籽出油率的影響見(jiàn)圖5。

    圖5 溫度對(duì)出油率的影響Fig.5 The effects of temperature on oil yield

    圖6 時(shí)間對(duì)葵花籽出油率的影響Fig.6 The effects of time on oil yield

    由圖5可知,溫度是影響酶解的一個(gè)重要條件。在纖維素酶酶解適宜的溫度區(qū)間中,隨著溫度的升高,葵花籽的出油率呈大幅度增長(zhǎng)趨勢(shì),在溫度為55℃時(shí)到達(dá)頂峰。根據(jù)溫度條件單因素試驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)確定的酶解溫度為55℃。

    2.3.6 酶解時(shí)間的確定

    在使用纖維素酶、酶添加量0.7%、pH=4.5、液固比25%和酶解溫度55℃的條件下,將酶解時(shí)間設(shè)置為1.5、2、2.5、3和3.5 h。溫度條件對(duì)葵花籽油出油率的影響見(jiàn)圖6。

    由圖6可知,酶解達(dá)到一定時(shí)間后,葵花籽出油率到達(dá)了較高水平,之后趨于平穩(wěn),稍有降低,但長(zhǎng)時(shí)間的酶解對(duì)生產(chǎn)成本和油的品質(zhì)都不利。根據(jù)時(shí)間條件單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)確定的酶解時(shí)間為2.5 h。

    3 結(jié)論

    (1)通過(guò)上述單因素實(shí)驗(yàn)分析,得到酶輔助壓榨法制備葵花籽油的最佳工藝條件為:選用纖維素酶,酶添加量為原料質(zhì)量的0.7%,pH=4.5,液固比為25%,酶解溫度為55℃,酶解時(shí)間為2.5 h。在最優(yōu)條件下,葵花籽的出油率為46.72%,葵花籽油提取率為85%。

    (2)在相同榨油溫度(35℃±5℃)和含水率(≤5%)條件下,傳統(tǒng)冷榨法得到的葵花籽出油率為13.41%,酶輔助壓榨法葵花籽油的出油率是傳統(tǒng)冷榨法的3.48倍。

    (3)在覃建龍[19]等人對(duì)葵花籽油提取的研究中所提到的冷榨法葵花籽油提取率為53.69%,在王旭[20]等人對(duì)葵花籽油酶法提取的研究中,最佳工藝條件下的葵花籽油提取率為80.94%。本實(shí)驗(yàn)用酶輔助壓榨的方法,經(jīng)過(guò)工藝條件優(yōu)化,所得到的葵花籽油提取率為85%。而且酶輔助壓榨法制備葵花籽油,不但保留了傳統(tǒng)壓榨法油脂氣味香濃的特點(diǎn),還很大程度改善了傳統(tǒng)壓榨法出油率低的問(wèn)題,更避免了浸提法帶來(lái)的食品安全問(wèn)題,充分體現(xiàn)了健康、味美、綠色、環(huán)保的植物油發(fā)展理念。

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