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    冠心病患者血脂水平檢測(cè)及載脂蛋白E基因多態(tài)性分析的臨床意義

    2019-11-14 10:13:25夏金蘭曾慶宏萬(wàn)紅梅嚴(yán)新美劉大勇王菁胡小武
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2019年25期
    關(guān)鍵詞:基因多態(tài)性冠心病

    夏金蘭 曾慶宏 萬(wàn)紅梅 嚴(yán)新美 劉大勇 王菁 胡小武

    [摘要]目的 探討冠心病患者血脂水平檢測(cè)及載脂蛋白E(ApoE)基因多態(tài)性分析的臨床意義。方法 選取本院2016年10月~2018年3月收治的90例冠心病患者作為實(shí)驗(yàn)組,另選取同期住院的90例非冠心病患者作為對(duì)照組。采用生物化學(xué)的方法分別對(duì)經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影確診的90例實(shí)驗(yàn)組患者和90例對(duì)照組患者進(jìn)行空腹血脂水平檢測(cè),采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析方法對(duì)ApoE基因進(jìn)行多態(tài)性分析。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組的總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、載脂蛋白B及脂蛋白a水平均高于對(duì)照組(P<0.05),載脂蛋白A1水平低于對(duì)照組(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組ApoE等位基因ε2基因型頻率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論 ApoE基因多態(tài)性特征會(huì)明顯影響人群中個(gè)體的血漿脂質(zhì)水平,增加人群中個(gè)體發(fā)生冠心病的危險(xiǎn),為有效預(yù)防冠心病提供有力依據(jù)。

    [關(guān)鍵詞]載脂蛋白E;基因多態(tài)性;危險(xiǎn)因子;冠心病

    [中圖分類(lèi)號(hào)] R541.4? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-4721(2019)9(a)-0039-03

    Clinical significance of blood lipid level detection and apolipoprotein E gene polymorphism analysis in patients with coronary heart disease

    XIA Jin-lan? ?ZENG Qing-hong? ?WAN Hong-mei? ?YAN Xin-mei? ?LIU Da-yong? ?WANG Jing? ?HU Xiao-wu

    Department of Cardiology, Xinyu People′s Hospital, Jiangxi Province, Xinyu? ?338000, China

    [Abstract] Objective To explore the clinical significance of blood lipid level detection and apolipoprotein E gene polymorphism analysis in patients with coronary heart disease. Methods All of 90 patients with coronary heart disease admitted to our hospital from October 2016 to March 2018 were selected as the experimental group, and 90 patients with non-coronary heart disease admitted to the same period were selected as the control group. The fasting lipid levels were detected by biochemical methods in 90 experimental patients who were diagnosed by coronary angiography and 90 control patients. Polymorphism analysis of ApoE gene was performed by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results The levels of total cholesterol, triglyceride, low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C), apolipoprotein B and lipoprotein a in the experimental group were higher than those in control group (P<0.05), while the levels of apolipoprotein A1 was lower than that in the control group (P<0.05). The frequency of ApoE allele ε2 genotype in the experimental group was significantly lower than that in the control group (P<0.05). Conclusion ApoE gene polymorphism can significantly affect the plasmalipid level of individuals in the population, increase the risk of coronary heart disease, and provide a strong basis for effective prevention of coronary heart disease.

    [Key words] Apolipoprotein E; Gene polymorphism; Risk factors; Coronary heart disease

    冠心病是由冠狀動(dòng)脈病變引起的心臟疾病,臨床最常見(jiàn)的病變類(lèi)型是冠狀動(dòng)脈血管發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化,引起管腔狹窄甚至閉塞[1]。冠狀動(dòng)脈在正常情況下有很強(qiáng)的代償能力,可隨心臟活動(dòng)量的變化調(diào)整供血。冠脈管腔內(nèi)脂質(zhì)堆積、冠脈畸形、炎癥、痙攣等均可導(dǎo)致冠脈狹窄,當(dāng)冠脈狹窄程度超過(guò)50%~75%時(shí),機(jī)體在激動(dòng)或勞累時(shí)就會(huì)出現(xiàn)以胸痛為主要表現(xiàn)的臨床癥狀。隨著人們對(duì)醫(yī)學(xué)的深入研究,除了吸煙、高血壓、高血脂、肥胖、過(guò)量飲酒等眾所周知的危險(xiǎn)因子外,新的危險(xiǎn)因子如某些微量元素如鋅、硒缺乏、胰島素抵抗、同型半胱氨酸增高、促凝血因子水平升高也逐漸受到人們關(guān)注。人們逐漸開(kāi)始從微觀角度探索冠心病的危險(xiǎn)因素,從而全面認(rèn)識(shí)冠心病。研究發(fā)現(xiàn)[2],載脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)的多態(tài)性與高血脂癥、主動(dòng)脈狹窄的發(fā)生密切相關(guān),人們?cè)噲D從基因水平了解冠心病,進(jìn)而做到有效預(yù)防和篩查[3]。為此,本研究采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)分析方法檢測(cè)人群中ApoE的多態(tài)性并探討其與冠心病之間的關(guān)系,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    選取本院2016年10月~2018年3月收住院的冠心病患者90例。納入標(biāo)準(zhǔn):①入院經(jīng)冠脈造影檢查確診的冠心病患者;②患者既往無(wú)阿片類(lèi)藥物使用史;③患者知情本研究?jī)?nèi)容并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并嚴(yán)重腦血管疾病以及有肝、腎、內(nèi)分泌等影響脂質(zhì)代謝疾病者;②嚴(yán)重呼吸功能不全以及腫瘤轉(zhuǎn)移的患者。對(duì)照組為同期住院的90例非冠心病患者,納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)冠脈造影檢查未見(jiàn)明顯狹窄者;②無(wú)高血壓、高血脂等影響血脂水平的疾病者;③既往無(wú)阿片類(lèi)藥物使用史者;④患者知情本研究?jī)?nèi)容并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)同上。本研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。將90例冠心病患者作為實(shí)驗(yàn)組,另選取同期住院的90例非冠心病患者作為對(duì)照組。其中,實(shí)驗(yàn)組:男58例,女32例;平均年齡(64.32±3.02)歲;BMI(22.15±3.27)kg/m2。對(duì)照組:男56例,女34例;平均年齡(65.35±2.89)歲;BMI(22.36±3.51)kg/m2。兩組患者的性別組成、年齡一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

    1.2方法

    1.2.1 ApoE基因多態(tài)性分析? 常規(guī)無(wú)菌采集兩組空腹靜脈血4 ml放入含有乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)的樣本管中,并于2 h內(nèi)在4℃下離心分離血漿和細(xì)胞成分,轉(zhuǎn)速1600 r/min,離心后至于-50℃下保存待測(cè)。應(yīng)用PCR技術(shù)限制片長(zhǎng)多態(tài)性分析的方法,對(duì)ApoE基因進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增引物序列:P1為5′-ACAGAATTCGCCGGGGGGCGTCGTAC-3′,P2為5′-TTAGCTTGCAGCGGCTGTACCACCG-3′。

    1.2.2血脂檢測(cè)? 血脂檢測(cè)按照常規(guī)生物化學(xué)檢測(cè)方法進(jìn)行。

    1.3觀察指標(biāo)

    ①兩組患者的總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、載脂蛋白B、脂蛋白a及載脂蛋白A1水平;②兩組患者的ApoE等位基因的頻率分布。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0專(zhuān)業(yè)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行分析,計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn);符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組間比較采用t檢驗(yàn);不符合正態(tài)分布者,轉(zhuǎn)換為正態(tài)分布后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2結(jié)果

    2.1兩組患者血脂水平的比較

    實(shí)驗(yàn)組的總膽固醇、三酰甘油、LDL-C、載脂蛋白B及脂蛋白a水平均高于對(duì)照組,載脂蛋白A1水平明顯低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

    2.2兩組患者ApoE等位基因頻率分布的比較

    酶切后的ApoE基因產(chǎn)生E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4和E4/4六種基因型,分別由等位基因ε2、ε3、ε4決定。實(shí)驗(yàn)組的ApoE等位基因ε2頻率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)(表2)。

    3討論

    據(jù)WHO統(tǒng)計(jì),冠心病仍是目前全球最常見(jiàn)的死亡病因,致死數(shù)已超過(guò)所有腫瘤死亡人數(shù)的總和。近30年來(lái),冠心病的發(fā)病率在我國(guó)逐年增高,引起人們對(duì)冠心病危險(xiǎn)因子愈發(fā)重視[4]。高血脂特別是LDL-C增高是引起動(dòng)脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因子,載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂質(zhì)的主要成分,主要負(fù)責(zé)運(yùn)載脂類(lèi)物質(zhì)及通過(guò)賦予脂類(lèi)以可溶的形式來(lái)穩(wěn)定脂蛋白,對(duì)人體脂質(zhì)代謝起著決定性作用。ApoE是其中的一種載脂蛋白,富含精氨酸的蛋白質(zhì),參與脂蛋白的轉(zhuǎn)化與代謝過(guò)程,其基因可以調(diào)節(jié)許多生物學(xué)功能。其主要存在于血漿乳糜微粒、極低密度脂蛋白及其殘粒、中間密度脂蛋白和部分高密度脂蛋白中。其中,部分ApoE在血液中與ApoAⅡ形成復(fù)合體[6]。研究ApoE基因的多態(tài)性對(duì)深入了解冠心病的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義[5]。ApoE主要的生理功能有:①作為低度脂蛋白受體的配體,參與人體脂蛋白代謝;②ApoE決定個(gè)體血脂水平,與冠心病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān);③參與激活水解脂肪的酶類(lèi),降低血漿脂質(zhì)水平。人ApoE的合成部位主要有肝臟、腦組織、腎上腺、卵巢顆粒細(xì)胞,腦中生成的ApoE的作用是通過(guò)重新分配細(xì)胞內(nèi)的脂類(lèi)達(dá)到腦環(huán)境中膽固醇的平衡[7]。

    基因多態(tài)性(gene polymorphism),也稱(chēng)為遺傳多態(tài)性(genetic polymorphism),是指在一個(gè)生物群體中同時(shí)存在多種變異型或基因型[8]。多態(tài)性的產(chǎn)生是因?yàn)樵谀承┎痪幋a蛋白或沒(méi)有重要調(diào)節(jié)功能的基因序列發(fā)生變異。研究人類(lèi)基因的多態(tài)性有助于解釋人體對(duì)疾病的易感性以及遺傳性疾病的分子機(jī)制。ApoE的異構(gòu)體由ε2、ε3、ε4三個(gè)等位基因編碼,人群中有E2/2、E2/3、E2/4、E3/3、E3/4和E4/4 6種表型[9]。研究顯示,ApoE基因變異可顯著影響人體血脂水平[10]。PCR-RFLP分析是一種常用的DNA分子標(biāo)記[11-12]。當(dāng)目的基因存在多態(tài)性時(shí),通過(guò)PCR擴(kuò)增,就會(huì)產(chǎn)生大小不同的片段,即片段長(zhǎng)度多態(tài)性,再應(yīng)用膠電泳分離,可呈現(xiàn)出多態(tài)性電泳圖譜,可確定是否變異[13-14]?;谏鲜鲅芯坷碚摚狙芯繉?duì)ApoE基因123 bp 及156 bp 位點(diǎn)HhaⅠ 酶切多態(tài)性進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,ApoE基因上述兩位點(diǎn)的多態(tài)性改變和血漿LDL-C水平及載脂蛋白B的功能水平存在相關(guān)性,表明在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的復(fù)雜機(jī)制中,ApoE基因多態(tài)性改變可能也參與其中[15]。載脂蛋白B是LDL-C的載體,它的水平直接影響血漿LDL-C水平,而ApoE的功能狀態(tài)又直接影響載脂蛋白B的功能水平,由此得知,ApoE基因多態(tài)性改變可以間接影響血LDL-C的水平,從而影響冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。因此,ApoE基因的改變必然會(huì)導(dǎo)致其分子結(jié)構(gòu)及其功能狀態(tài)的改變,進(jìn)而控制和影響血中ApoE與LDL-C水平并與其他危險(xiǎn)因子一起協(xié)同參與冠心病的形成與發(fā)展。

    綜上所述,ApoE基因多態(tài)性特征會(huì)明顯影響人群中個(gè)體的血漿脂質(zhì)水平,增加人群中個(gè)體發(fā)生冠心病的危險(xiǎn),為有效預(yù)防冠心病提供可靠依據(jù)。

    [參考文獻(xiàn)]

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    (收稿日期:2019-03-12? 本文編輯:許俊琴)

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