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    不同貯存方法對(duì)紫花苜蓿種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量變化的影響

    2019-11-14 05:14:24金曉玲
    甘肅畜牧獸醫(yī) 2019年10期
    關(guān)鍵詞:根瘤菌鋁箔包裝材料

    金曉玲

    (慶陽(yáng)市畜牧技術(shù)推廣中心,甘肅 慶陽(yáng) 745000)

    紫花苜蓿屬豆科植物,根瘤菌可與其共生形成根瘤,這一共生體系的共生固氮作用不僅具有巨大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益,同時(shí)在改善生態(tài)環(huán)境等方面具有重要意義。苜蓿多采用種子繁殖,種子用量很大但不耐貯藏(Lopez et al,2001)。已報(bào)道苜蓿種子內(nèi)攜帶根瘤菌,但由于儲(chǔ)藏時(shí)溫度及儲(chǔ)藏方式等,常常會(huì)影響到種帶根瘤菌數(shù)量。因此,適應(yīng)的貯藏溫度利于體內(nèi)根瘤菌的繁殖。此外,種子含水量也會(huì)影響種子活力?;羝交鄣龋?011)采用硅膠室溫干燥法對(duì)隴東紫花苜蓿進(jìn)行了超干處理,使種子含水量由9.03%(CK)分別降至7.09%、6.93%、6.36%、5.72%、5.46%、5.18%、4.97%和4.59%,4.59%;之后將種子用雙層鋁箔紙密封,置于盛滿硅膠的干燥皿中,室溫(23~26℃)下貯藏一年,結(jié)果顯示不同程度的干燥脫水對(duì)種子活力有顯著影響。雖然國(guó)內(nèi)外對(duì)溫度或者含水量對(duì)種子生長(zhǎng)影響有所研究,但是對(duì)于溫度和含水量?jī)烧呦嗷ソ徊孀饔脤?duì)種子根瘤菌影響的研究報(bào)道目前尚少。

    因此,本試驗(yàn)以含根瘤菌的紫花苜蓿種子為試驗(yàn)材料,分別用不同溫度和包裝條件貯存,研究種子內(nèi)根瘤菌存活和增殖的適宜條件,通過(guò)不同保存方式對(duì)含根瘤菌種子內(nèi)根瘤菌增殖的影響,繼而篩選出最適保存條件,為獲得含有大量根瘤菌的苜蓿種子奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    甘農(nóng)5號(hào)紫花苜蓿(medicago sativa L.Gannong No.5) 在結(jié)莢期以切主根澆灌、根部直接澆灌、加入600 mg/ml苦參堿(濃度1.3%)澆灌三種接種方法接種兩種熒光標(biāo)記根瘤菌(Sinorhizobium meliloti.12531f(S.12531f)和 Rhiz obium meliloti.GN5f(R.GN5f)。結(jié)莢期收獲種子,未進(jìn)行標(biāo)記根瘤菌接種的處理為對(duì)照。室內(nèi)風(fēng)干2個(gè)月進(jìn)行不同方法的貯存。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 含熒光標(biāo)記根瘤菌種子的貯存 根瘤菌生長(zhǎng)的臨界低溫值為-10℃(祁娟,2006),最高適應(yīng)生長(zhǎng)溫度為28℃,因此本次設(shè)定25℃(室溫),4℃(低溫),-4℃(超低溫),采用鋁箔紙(種子用鋁箔紙密封包裝)、信封加布袋(種子裝于布袋內(nèi),外加信封袋)、信封袋3種包裝方式貯存處理;以用紙質(zhì)信封袋包裝后置于有干燥硅膠的干燥器內(nèi)在室溫下貯存處理為對(duì)照,貯藏6個(gè)月后測(cè)定種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量。

    1.2.2 種子內(nèi)根瘤菌數(shù)量的檢測(cè) 貯存6個(gè)月后隨機(jī)挑選各處理種子25粒,重復(fù)4次,放入50 ml無(wú)菌三角瓶?jī)?nèi),加入碘伏消毒液(有效碘濃度為2500 mg/L)淹沒(méi)浸泡消毒3 min后無(wú)菌水沖洗5次,至三角瓶?jī)?nèi)無(wú)泡沫狀液體出現(xiàn)。以上均在無(wú)菌環(huán)境內(nèi)進(jìn)行。表面消毒后,將最后一次消毒的植物器官各面在培養(yǎng)基平板上印一下,28℃條件下培養(yǎng)24 h,觀察有無(wú)菌落產(chǎn)生,以驗(yàn)證消毒是否徹底。若有菌落長(zhǎng)出則再次消毒(遲峰,2006)。消毒后的種子各部位置于無(wú)菌研缽中,加入2 ml無(wú)菌水研磨,研磨液離心(4 000 rpm/min,2 min)后依次吸取0.2 ml上清液均勻涂布于含剛果紅YMA固體培養(yǎng)中,28℃培養(yǎng)24 h后黑暗中記錄每培養(yǎng)皿中根瘤菌單菌落數(shù)量。(剛果紅YMA培養(yǎng)基中,根瘤菌形態(tài)為含有粘質(zhì)胞外多糖且不吸附色素的白色半透明菌落,形態(tài)為平坦凸起或半透明凸起,邊緣光滑)(霍平慧,2014)。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    用Excel2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,SPSS20.0.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和顯著性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 常溫(25℃)不同貯存方法對(duì)不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量的影響

    如圖1所示,常溫信封貯存條件下,G切種子的保存效果最好,根瘤菌數(shù)量數(shù)量最多,達(dá)到380.0/cfu·25粒-1,與鋁箔和信封+布袋的貯存條件相比,差異顯著;G澆處理鋁箔貯存條件下內(nèi)生根瘤菌數(shù)量顯著高于其他兩種包裝材料,數(shù)量為197.5/cfu·25粒-1;1澆在信封和鋁箔貯存條件下數(shù)量顯著高于信封+布袋處理,但二者之間差異不顯著;CK種子在鋁箔包裝條件下效果好,達(dá)260.5/cfu·25粒-1,顯著高于其他兩種處理。其余不同處理不同包裝材料間種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量無(wú)顯著性差異。

    圖1 常溫(25℃)不同貯存方法下不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量變化

    2.2 常溫(25℃)干燥不同貯存方法對(duì)不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量的影響

    如圖2所示,常溫(25℃)干燥信封+布袋保存條件下,1澆種子保存效果最好,內(nèi)生根瘤菌數(shù)量顯著高于其他處理,數(shù)量達(dá)1021/cfu·25粒-1。G切在鋁箔貯存條件下根瘤菌數(shù)量顯著高于其他兩種包裝方法,達(dá)332.0/cfu·25粒-1;G澆處理內(nèi)生根瘤菌數(shù)量在信封包裝條件下顯著高于其他處理,達(dá)552/cfu·25粒-1;G+苦在信封包裝條件下內(nèi)生根瘤菌數(shù)量顯著高于其他兩種處理,數(shù)量為385.0/cfu·25粒-1;CK種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量最少,僅為58.5/cfu·25粒-1,且三種包裝材料間無(wú)顯著性差異。

    圖2 常溫(25℃)干燥不同貯存方法下不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量變化

    2.3 4℃不同貯存方法對(duì)不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量的影響

    如圖3所示,在4℃鋁箔包裝條件下1澆種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量顯著高于其他處理,數(shù)量達(dá)259.5/ cfu·25粒-1。G切處理各包裝材料間無(wú)顯著性差異;G澆在信封貯存條件下內(nèi)生根瘤菌數(shù)量顯著高于另兩種材料,為136.0/cfu·25粒-1;其余四種處理不同包裝材料間差異不顯著。

    圖3 4℃不同貯存方法下不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量變化

    2.4 -4℃不同貯存方法對(duì)不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量的影響

    如圖4所示,-4℃下,G切種子在信封貯存條件下根瘤菌數(shù)量最多達(dá)638.5/cfu·25粒-1,顯著高于其它兩種包裝材料;G+苦鋁箔保存條件下根瘤菌數(shù)量達(dá)625.0/cfu·25粒-1,顯著高于其他兩種包裝處理;1切和1澆在鋁箔包裝條件下數(shù)量最高分別為374.5/cfu·25粒-1和312.0/cfu·25粒-1,但與信封+布袋無(wú)顯著性差異;G澆/1+苦和CK各包裝材料間差異不顯著,最多分別為305.5/cfu·25粒-1、213.5/cfu·粒-1和73.5/cfu·25粒-1。

    圖4 -4℃不同貯存方法下不同處理種子內(nèi)生根瘤菌數(shù)量變化

    3 討論

    適宜的貯藏溫度和良好的貯藏條件是種子內(nèi)生根瘤菌繁殖的關(guān)鍵因素。每種微生物都有其適宜的生長(zhǎng)溫度范圍。本試驗(yàn)在4℃貯存時(shí)各處理種子內(nèi)生根瘤菌最高數(shù)量均低于其他三個(gè)溫度的貯存數(shù)量,以25℃干燥信封+布袋貯存1澆種子內(nèi)根瘤菌數(shù)量最多,由此說(shuō)明選取的三種溫度均未達(dá)到根瘤菌生長(zhǎng)最低限,但因種子外包裝材料及菌種特性從而影響種子內(nèi)生根瘤菌的繁殖。

    含水量是保持種子活力和生活力的關(guān)鍵因素之一。已有研究認(rèn)為貯藏種子含水量低于5%,將導(dǎo)致種子活力下降(Buitinket al,1999;McDonald ,1999)。本研究發(fā)現(xiàn)25℃貯存時(shí),干燥條件除G切和對(duì)照外,各處理種子內(nèi)根瘤菌數(shù)量均高于未干燥處理,由此表明水分同樣影響種子內(nèi)根瘤菌的繁殖。

    相同溫度貯存條件下,不同包裝材料對(duì)不同處理種子內(nèi)根瘤菌數(shù)量影響不同。常溫時(shí),信封貯存G切種子效果明顯優(yōu)于其他兩種包裝材料,鋁箔貯存G澆和CK種子效果明顯優(yōu)于其他兩種包裝材料,其余處理不因包裝材料不同而不同;25℃干燥時(shí),鋁箔貯存G切,信封貯存G澆、G+苦種子,信+布貯存1澆種子時(shí)效果明顯優(yōu)于其他兩種包裝材料,4℃鋁箔貯存1澆種子時(shí)效果明顯優(yōu)于其他兩種包裝材料,-4℃時(shí)鋁箔貯存G切和G+苦種子時(shí)效果明顯優(yōu)于其他兩種包裝材料,其余各包裝材料在相同溫度下并未影響種子內(nèi)根瘤菌數(shù)量。由此表明包裝材料對(duì)內(nèi)生根瘤菌數(shù)量的影響因溫度不同而不同,進(jìn)而表明溫度和含水量是共同影響種子內(nèi)根瘤菌存活的因素。

    本試驗(yàn)中,適宜種子內(nèi)生根瘤菌增殖的溫度為25℃干燥或-4℃,表明接種根瘤菌后苜蓿種子適宜在常溫干燥或低溫環(huán)境下貯存,但由于種子貯存過(guò)程中含水量較難控制,環(huán)境會(huì)影響含水量的變化,因此,生產(chǎn)實(shí)踐中-4℃更利于種子的貯存,而該溫度下,鋁箔包裝材料下種子內(nèi)根瘤菌數(shù)量較多。

    因此,從生產(chǎn)實(shí)踐及種子貯存的方便性考慮,-4℃鋁箔紙密封保存更利于種子內(nèi)根瘤菌的增長(zhǎng)和繁殖,但利于更多根瘤菌在種子內(nèi)繁殖并獲得穩(wěn)定高產(chǎn)植株的種子貯存條件仍有待于進(jìn)一步研究。

    4 結(jié)論

    溫度和水分共同影響紫花苜蓿種子內(nèi)根瘤菌的繁殖,綜合生產(chǎn)實(shí)踐條件,得出-4℃更利于根瘤菌在種子內(nèi)繁殖;鋁箔保存效果優(yōu)于信封和信封+布袋。

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