不同配伍比例梔子-肉桂水提物改善小鼠睡眠作用及相關(guān)機(jī)制研究

杜正彩，齊彪，張明哲，韋燕霞，李麗潔，郝二偉，侯小濤，胡小勤，鄧家剛，*

（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，廣西南寧530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530001；3.廣西中藥藥效研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧530001）

失眠屬于中醫(yī)“不寐”、“不得眠”、“不得臥”、“目不瞑”等范疇，其病因病機(jī)多與心腎陰陽(yáng)失調(diào)有關(guān)[1-2]，《辨證錄》中記載：“人有晝夜不能寐，心甚煩躁，此心腎不交也........心腎之所以不交者，心過(guò)于熱，而腎過(guò)于寒也”。交泰丸是治療心腎不交所致失眠的經(jīng)典名方，現(xiàn)代藥理表明交泰丸鎮(zhèn)靜、催眠藥效以原方黃連-肉桂10 ∶1 效果最佳[3-5]。第六批全國(guó)老中醫(yī)藥專家學(xué)術(shù)繼承指導(dǎo)老師鄧家剛教授根據(jù)長(zhǎng)期從事臨床和中藥研究的實(shí)踐，并結(jié)合經(jīng)典名方“交泰丸”的立意，選用肉桂、梔子兩味藥食兩用的藥材，組成“桂梔助眠方”，用于輔助治療心腎不交，心火偏亢所致的失眠癥。梔子具有清心除煩之功效[6]，其有效成分梔子黃色素或藏紅花酸具有改善睡眠的作用，且高劑量的梔子苷具有縮短小鼠入睡時(shí)間，提高小鼠入睡率[7-10]。肉桂具有補(bǔ)火助陽(yáng)，引火歸元之功效[6]，肉桂揮發(fā)油中桂皮醛具有鎮(zhèn)靜作用[11]。本文通過(guò)觀察不同質(zhì)量比例梔子-肉桂水提物對(duì)小鼠改善睡眠作用，篩選最佳質(zhì)量比例，通過(guò)檢測(cè)最佳質(zhì)量比例小鼠腦內(nèi)γ-氨基丁酸（γ－aminobutyric acid，GABA）及 5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）的含量，探討相關(guān)作用機(jī)制，為后期開(kāi)發(fā)桂梔助眠膠囊保健食品提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF 級(jí)昆明種小鼠：湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，體重（20±2）g，雄性 150 只，許可證號(hào) SCXK（湘）2016-0002。

1.2 試材與試劑

梔子：南寧市京昌中藥飲片有限公司，批號(hào)：20170701；黃連：廣東匯群中藥飲片股份有限公司，批號(hào)：20170902；肉桂：南寧生源中藥飲片有限責(zé)任公司，批號(hào)：20170901；地西泮片：上海上藥信誼藥廠有限公司，批號(hào)14170401W；生理鹽水：辰欣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：170829072；巴比妥鈉、戊巴比妥鈉：Sigma 公司；GABA：武漢華聯(lián)科生物科技有限公司，批號(hào)201804；5-HT：武漢華美生物工程有限公司，批號(hào)：V24010401。

1.3 儀器

HDM-500 恒溫電熱套：江蘇天由有限公司；HH-S8數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市醫(yī)療儀器廠；FD56 恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海合測(cè)實(shí)業(yè)有限公司；Infinite M200 Pro 多功能酶標(biāo)儀：上海道尚生物科技有限公司；TGL-16M型醫(yī)用離心機(jī)：湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限；METTLER TOLEDO ME204 萬(wàn)分之一電子分析天平：武漢宏錦科技有限公司。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)藥物制備

2.1.1 梔子-肉桂水提物（10 ∶1，質(zhì)量比）制備

取肉桂粗粉40 g，加8 倍水浸泡1 h，蒸餾5 h，收集揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液濾過(guò)另器收集；取梔子粗粉400 g，用10 倍量的水浸泡1 h，再加入肉桂殘?jiān)逯? 次，每次0.5 h。濾過(guò)，合并濾液與上述蒸餾水溶液，常壓濃縮至1 mL 藥液相當(dāng)于原藥材1 g，60 ℃水浴蒸發(fā)水分，常壓60 ℃干燥至恒重，置干燥器冷卻1 h。干膏研成粉末狀，使用前將肉桂揮發(fā)油混入藥粉，置4 ℃冰箱備用。

2.1.2 梔子-肉桂水提物（5 ∶1，質(zhì)量比）制備

稱取肉桂80 g，梔子400 g，其他條件均同2.1.1。

2.1.3 梔子-肉桂水提物（1 ∶1，質(zhì)量比）制備

稱取肉桂200 g，梔子200 g，其他條件均同2.1.1。

2.2 改善睡眠功能評(píng)價(jià)方法

2.2.1 直接睡眠實(shí)驗(yàn)與延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)

參照文獻(xiàn)[12]方法，選取昆明種小鼠50 只，隨機(jī)分為5 組：設(shè)陰性對(duì)照組（生理鹽水）、西藥陽(yáng)性對(duì)照組（地西泮 1.51 mg/kg）、10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1（質(zhì)量比）梔子-肉桂水提物組（0.59 g/kg 相當(dāng)于成人劑量的20 倍），每組10 只，各組小鼠每天經(jīng)口灌胃10 mL/（kg·d），連續(xù)30 d。第29 天給小鼠灌胃60 min 后，以動(dòng)物的翻正反射消失超過(guò)30 s～60 s 判為進(jìn)入睡眠，翻正反射恢復(fù)即為動(dòng)物覺(jué)醒，觀察各組小鼠給予受試物入睡動(dòng)物數(shù)；第30 天，灌胃15 min 后，給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉44 mg/kg，注射量為10 mL/kg，以翻正反射消失1 min 為指標(biāo)，觀察受試樣品能否延長(zhǎng)戊巴比妥能否延長(zhǎng)睡眠。

2.2.2 戊巴比妥鈉閥下劑量催眠實(shí)驗(yàn)

受試樣品給予時(shí)間設(shè)計(jì)同“2.2.1”，小鼠末次灌胃15 min 后，給各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉最大閥下劑量32 mg/kg，注射量10 mL/kg，記錄30 min 內(nèi)各組入睡動(dòng)物數(shù)（翻正反射消失達(dá)1 min 以上者）。

2.2.3 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)

劑量分組及受試樣品給予時(shí)間設(shè)計(jì)同“2.2.1”，小鼠末次灌胃15 min 后，給各組小鼠腹腔注射巴比妥鈉劑量280 mg/kg，注射量10 mL/kg，以翻正反射消失1 min 為指標(biāo)，觀察受試樣品對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的結(jié)果。

2.3 對(duì)小鼠腦內(nèi)GAGA、5-HT含量的影響

根據(jù)延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選取梔子-肉桂 10 ∶1 組、5 ∶1 組、1 ∶1 組（質(zhì)量比）、陰性對(duì)照組（生理鹽水）小鼠，按0.59 g/kg 繼續(xù)灌胃14 d 后，脫頸椎處死小鼠，冰浴開(kāi)顱取全腦后，在冰平皿上分離大腦后，用冰生理鹽水沖洗血液，濾紙拭干，大腦稱重后，將9 倍量的冰生理鹽水手動(dòng)均漿，取漿液至2 mL離心管中離心（3 000 r/min，15 min，4 ℃），取上清液，按照試劑盒相關(guān)操作步驟測(cè)定樣品中GAGA、5-HT 的OD 值，并帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程式，計(jì)算樣品中GAGA、5-HT 的濃度[13]。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，直接睡眠小鼠入睡率和戊巴比妥鈉閥下劑量入睡率為計(jì)數(shù)資料，采用卡方檢驗(yàn)；其余指標(biāo)為計(jì)量資料，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用表示，組間采用單因素方差分析，方差齊性組間進(jìn)行最小顯著性差異法（least significant difference，LSD）檢驗(yàn)，方差不齊者采用Tamhane's T2 檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 各實(shí)驗(yàn)組對(duì)小鼠體重的影響

各實(shí)驗(yàn)組梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響見(jiàn)表1～表3。

表1 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響（延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間組，n=10）Table 1 The Effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the weight of mice（The case on extending the sleep time of pentobarbital sodium，，n=10）

表1 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響（延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間組，n=10）Table 1 The Effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the weight of mice（The case on extending the sleep time of pentobarbital sodium，，n=10）

組別 劑量/[g/（kg·bw）]初期體重/g 中期體重/g 末期體重/g陰性對(duì)照 0 18.25±1.23 36.26±2.79 42.42±2.12梔子-肉 10∶1 0.59 18.05±1.23 36.79±2.70 42.16±3.57梔子-肉桂 5∶1 0.59 18.30±1.10 37.54±3.12 42.45±4.14梔子-肉桂 1∶1 0.59 18.12±1.06 35.05±2.43 41.49±2.60地西泮片 0.001 5 18.09±1.31 37.17±2.62 43.75±4.44

表2 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響（戊巴比妥鈉閥下劑量組，，n=10）Table 2 The Effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the weight of mice（The case on sodium pentobarbital（subthreshold doses），，n=10）

表2 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響（戊巴比妥鈉閥下劑量組，，n=10）Table 2 The Effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the weight of mice（The case on sodium pentobarbital（subthreshold doses），，n=10）

組別 劑量/[g/（kg·bw）]初期體重/g 中期體重/g 終體重/g陰性對(duì)照 0 18.22±1.24 35.40±2.76 42.70±2.86梔子-肉桂 10∶1 0.59 18.13±0.89 36.08±3.30 40.11±3.87梔子-肉桂 5∶1 0.59 18.23±1.34 34.91±3.91 40.20±4.37梔子-肉桂 1∶1 0.59 18.21±0.85 34.95±3.61 40.11±2.91地西泮片 0.001 5 18.43±1.05 35.82±3.96 42.65±4.65

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間組、戊巴比妥鈉閥下劑量組、巴比妥鈉睡眠潛伏期組中，各組小鼠體重與陰性對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05），表明梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠的體重?zé)o明顯影響。

表3 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響（巴比妥鈉睡眠潛伏期組，，n=10）Table 3 The Effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the weight of mice（The case on sleeping incubation period induced by barbital sodium，，n=10）

表3 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠體重的影響（巴比妥鈉睡眠潛伏期組，，n=10）Table 3 The Effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the weight of mice（The case on sleeping incubation period induced by barbital sodium，，n=10）

組別 劑量/[g/（kg·bw）]初期體重/g 中期體重/g 終體重/g陰性對(duì)照 0 18.19±1.20 33.66±2.51 43.48±3.24梔子-肉桂 10∶1 0.59 18.31±1.36 34.11±4.73 41.21±4.86梔子-肉桂 5∶1 0.59 18.06±1.21 35.67±2.70 40.64±2.35梔子-肉桂 1∶1 0.59 17.95±1.05 36.73±2.88 42.00±4.01地西泮片 0.001 5 18.08±1.19 34.40±2.36 41.12±4.43

3.2 各實(shí)驗(yàn)組對(duì)小鼠直接睡眠的影響

梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠直接睡眠的影響見(jiàn)表4。

表4 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠直接睡眠的影響（，n=10）Table 4 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on immediate sleep of mice（，n=10）

表4 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠直接睡眠的影響（，n=10）Table 4 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on immediate sleep of mice（，n=10）

組別 劑量/[g/（kg·bw）]動(dòng)物數(shù) 入睡動(dòng)物數(shù) 入睡率/%陰性對(duì)照 0 10 0 0梔子-肉桂 10∶1 0.59 10 0 0梔子-肉桂 5∶1 0.59 10 0 0梔子-肉桂 1∶1 0.59 10 0 0地西泮片 0.001 5 10 0 0

結(jié)果表明，各組動(dòng)物在1 h 內(nèi)均未出現(xiàn)睡眠現(xiàn)象，表明梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠無(wú)明顯直接催眠作用，可通過(guò)其他3 項(xiàng)實(shí)驗(yàn)確定配方篩選。

3.3 延長(zhǎng)戊巴比妥鈉睡眠實(shí)驗(yàn)影響

梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響見(jiàn)表5。

表5 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響（，n=10）Table 5 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on sleep time of pentobarbital sodium（，n=10）

表5 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響（，n=10）Table 5 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on sleep time of pentobarbital sodium（，n=10）

注：與陰性對(duì)照組比較，2）P＜0.01，差異極顯著。

組別 劑量/[g/（kg·bw）]戊巴比妥鈉劑量/[mg/（kg·bw）]睡眠時(shí)間/min陰性對(duì)照 0 44 37.05±20.64梔子-肉桂 10∶1 0.59 44 50.45±26.89梔子-肉桂 5∶1 0.59 44 56.10±23.002）梔子-肉桂 1∶1 0.59 44 42.10±25.63地西泮片 0.001 5 44 91.20±25.572）

結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組相比，梔子-肉桂質(zhì)量比5 ∶1 組、地西泮組能延長(zhǎng)戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間（P＜0.01）；其余各組結(jié)果無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；梔子-肉桂不同質(zhì)量比例組延長(zhǎng)小鼠睡眠時(shí)間作用趨勢(shì)為 5 ∶1 組＞10 ∶1 組＞1 ∶1 組。

3.4 戊巴比妥鈉閥下劑量催眠實(shí)驗(yàn)影響

梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)戊巴比妥鈉閥下劑量入睡率的影響見(jiàn)表6。

表6 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)戊巴比妥鈉閥下劑量入睡率的影響（，n=10）Table 6 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on sleep rate of sodium pentobarbital（subthreshold doses）（，n=10）

表6 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)戊巴比妥鈉閥下劑量入睡率的影響（，n=10）Table 6 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on sleep rate of sodium pentobarbital（subthreshold doses）（，n=10）

注：與陰性對(duì)照組比較，1）P＜0.05，差異顯著；2）P＜0.01，差異極顯著。

入睡動(dòng)物數(shù)組別 劑量/[g/（kg·bw）]戊巴比妥鈉劑量/[mg/（kg·bw）]動(dòng)物數(shù)入睡率/%陰性對(duì)照 0 32 10 2 20梔子-肉桂10∶1 0.59 32 10 6 60梔子-肉桂5∶1 0.59 32 10 8 801）梔子-肉桂1∶1 0.59 32 10 5 50地西泮片 0.0015 32 10 9 902）

結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組相比，梔子-肉桂質(zhì)量比5 ∶1 組、地西泮組能增加戊巴比妥鈉域下劑量小鼠入睡率（P＜0.05，P＜0.01），梔子-肉桂不同質(zhì)量比例組增加小鼠入睡率作用趨勢(shì)為質(zhì)量比 5 ∶1 組＞10 ∶1 組＞1 ∶1 組。

3.5 巴比妥鈉睡眠潛伏期實(shí)驗(yàn)影響

梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響見(jiàn)表7。

表7 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（，n=10）Table 7 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the sleeping incubation period induced by barbital sodium（，n=10）

表7 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)巴比妥鈉睡眠潛伏期的影響（，n=10）Table 7 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on the sleeping incubation period induced by barbital sodium（，n=10）

注：與陰性對(duì)照組比較，2）P＜0.01，差異極顯著。

睡眠潛伏期時(shí)間/min陰性對(duì)照 0 280 29.50±4.20梔子-肉桂 10∶1 0.59 280 23.40±4.222）梔子-肉桂 5∶1 0.59 280 26.30±3.40梔子-肉桂 1∶1 0.59 280 27.70±5.06地西泮片 0.001 5 280 15.80±2.822）組別 劑量/[g/（kg·bw）]巴比妥鈉劑量/[mg/（kg·bw）]

結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組相比，梔子-肉桂質(zhì)量比10 ∶1 組、地西泮組均能縮短巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期（P＜0.01）；梔子-肉桂不同質(zhì)量比例組縮短巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期作用趨勢(shì)為質(zhì)量比 10 ∶1 組＞5 ∶1 組＞1 ∶1 組。

3.6 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠腦內(nèi)GABA及5-HT含量的影響

3.6.1 GABA、5-HT 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立

將濃度分別為 32、16、8、4、2、0 nmol/L 的 GABA 標(biāo)準(zhǔn)品按照試劑盒操作步驟，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式：y=0.028 1x＋0.027 1（R2=0.989 83），結(jié)果見(jiàn)圖1；將濃度分別為 4 000、2 000、1 000、500、250、0 pg/mL 的5-HT 標(biāo)準(zhǔn)品按照試劑盒操作步驟，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD 值為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的對(duì)數(shù)回歸方程式y(tǒng)=377.37-434.445In（x＋7.265×10-5）（R2=0.984 6），結(jié)果見(jiàn)圖2。將樣本 OD值帶入以上標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程式，計(jì)算樣品濃度。

圖1 GABA 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 GABA standard curve

圖2 5-HT 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2 5-HT Standard Curve

3.6.2 對(duì)小鼠腦內(nèi)GABA 及5-HT 含量的影響

梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠腦內(nèi)GABA 和5-HT 的影響見(jiàn)表8。

結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組相比，梔子-肉桂質(zhì)量比5 ∶1 組能增加小鼠腦內(nèi)的 GABA 含量（P＜0.05），梔子-肉桂不同質(zhì)量比例各組對(duì)小鼠腦內(nèi)5-HT 含量無(wú)明顯影響（P＞0.05）。

表8 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠腦內(nèi)GABA 和5-HT 的影響（，n=10）Table 8 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on GABA and 5-HT in mouse brain（，n=10）

表8 梔子-肉桂不同質(zhì)量比例對(duì)小鼠腦內(nèi)GABA 和5-HT 的影響（，n=10）Table 8 The effects of varied compatibility proportion of gardenia and Cinnamon cassia on GABA and 5-HT in mouse brain（，n=10）

注：×20：此樣品檢測(cè)前稀釋 20 倍；與陰性對(duì)照組比較，1）P＜0.05，差異顯著。

5-HT（×20）/（pg/mL）陰性對(duì)照 0 0.54±0.45 39 298.21±5 157.04梔子-肉桂 10∶1 0.59 0.82±0.47 38 963.88±2 720.95梔子-肉桂 5∶1 0.59 0.94±0.401） 36 606.72±2 445.51梔子-肉桂 1∶1 0.59 0.87±0.26 36 832.73±3 657.80組別 劑量/[g/（kg·bw）]GABA/（nmol/L）

4 結(jié)論與討論

交泰丸源自《韓氏醫(yī)通》，原書中提到“黃連......為君，佐官桂少許，煎百費(fèi)，入蜜，空心服，能心腎交于頃刻”，至清代《四科簡(jiǎn)效方》記載“生川連五錢，肉桂心五分，研細(xì)，白蜜丸，空心淡鹽湯下，治心腎不交、怔忡無(wú)寐，名交泰丸”。明確說(shuō)明交泰丸用藥組成為生川連與肉桂，其用藥比例為10 ∶1。擬開(kāi)發(fā)產(chǎn)品桂梔助眠膠囊是對(duì)經(jīng)典名方交泰丸改良而研制的國(guó)產(chǎn)保健食品，是針對(duì)心火獨(dú)亢，兼腎陽(yáng)不足所致的失眠，由梔子、肉桂組成，梔子清心除煩，與黃連藥效相似，因保健食品的原料藥不允許使用黃連，故本產(chǎn)品采用藥食兩用的梔子代替黃連，故本課題組在借鑒古方用藥比例的基礎(chǔ)上設(shè)置梔子-肉桂質(zhì)量比 10 ∶1、5 ∶1、1 ∶1 組。

本文研究結(jié)果表明梔子-肉桂質(zhì)量比5 ∶1 組時(shí)，改善睡眠效果最好，分析原因如下：其一，在相同劑量情況下，隨著處方中梔子所占比例越高，其活性成分梔子黃色素（藏紅花酸）或梔子苷含量逐漸增加，藥效越明顯，其二，臨床上對(duì)于心腎不交（心火亢盛、腎陽(yáng)不足）所致的失眠癥重在用梔子清心瀉火，符合中醫(yī)治療原則。其三，梔子藥性偏于苦寒，處方中梔子所占比重過(guò)大會(huì)傷及脾胃，從而影響有效成分在體內(nèi)的生物利用度。提示梔子在處方的比重控制在合理的范圍內(nèi)。

γ-氨基丁酸（GABA）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，能夠抑制興奮的神經(jīng)元，對(duì)神經(jīng)元有保護(hù)性作用，GABA 的異常與睡眠有密切的聯(lián)系[14-15]。5-羥色胺（5-HT）是腦內(nèi)一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，對(duì)睡眠的調(diào)節(jié)起到關(guān)鍵作用，動(dòng)物腦內(nèi)5-HT 水平的減少可引起失眠，腦內(nèi)5-HT 濃度升高，會(huì)產(chǎn)生睡意[16-17]。綜上所述，5-HT 和GABA 是睡眠調(diào)控兩類重要的神經(jīng)遞質(zhì)，故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)5-HT和GABA 的含量，探討最佳質(zhì)量比例改善睡眠的作用機(jī)制。

本研究表明，經(jīng)口給予小鼠不同受試物30 d，梔子-肉桂不同質(zhì)量比例組在60 min 內(nèi)，均未有直接睡眠現(xiàn)象；與陰性對(duì)照組相比，梔子-肉桂質(zhì)量比5 ∶1 組能延長(zhǎng)戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間（P＜0.05），且能增加戊巴比妥鈉閥下劑量小鼠入睡率（P＜0.05）；梔子-肉桂質(zhì)量比10 ∶1 組均能縮短巴比妥鈉小鼠睡眠潛伏期（P＜0.05）；梔子-肉桂質(zhì)量比 5 ∶1 組能增加小鼠腦內(nèi)的GABA 含量（P＜0.05），梔子-肉桂不同質(zhì)量比例組對(duì)小鼠腦內(nèi)5-HT 含量無(wú)明顯影響（P＞0.05）。本實(shí)驗(yàn)從整體和分子機(jī)制探討了桂梔助眠方的最佳質(zhì)量比例，通過(guò)對(duì)上述結(jié)果分析，梔子-肉桂質(zhì)量比5 ∶1 組改善睡眠效果最佳，其作用機(jī)制可能與增加小鼠腦內(nèi)GABA含量有關(guān)。