• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紅曲黃酒釀造過程中紅曲霉生長抑制因素初探

    2019-11-12 11:31:46蔡琪琪周康熙劉志彬
    中國食品學(xué)報 2019年10期
    關(guān)鍵詞:紅曲平湖曲霉菌

    蔡琪琪 周康熙 劉志彬 張 晨 張 雯 倪 莉

    (福州大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)研究所 福建省食品生物技術(shù)創(chuàng)新工程技術(shù)研究中心 福州 350108)

    紅曲黃酒是中國黃酒的典型代表,因添加了紅曲釀造,增加了酒體中的活性組分而備受推崇[1-2]。紅曲霉是紅曲的優(yōu)勢菌,在紅曲黃酒的釀造過程中發(fā)揮著重要作用。其一,紅曲霉作為紅曲黃酒釀造體系中的主要產(chǎn)色菌,其發(fā)酵產(chǎn)生的紅曲色素(包括黃色素、橙色素、紅色素3大類)可以賦予紅曲黃酒特征的外觀顏色[3];其二,紅曲霉的次級代謝產(chǎn)物(紅曲色素、莫納克林K、γ-氨基丁酸、麥角固醇等)豐富了酒體的活性成分,增加了紅曲黃酒的保健功能[4];其三,紅曲霉強(qiáng)大的酶系能夠催化底物生成醇類、酯類、有機(jī)酸等風(fēng)味物質(zhì),豐富了酒體的口感和芳香[5]。

    由于紅曲霉對紅曲黃酒的色、香、味及保健功能等品質(zhì)做出了較為突出的貢獻(xiàn),因此探明傳統(tǒng)釀造過程中紅曲霉的動態(tài)變化和生長機(jī)制尤為重要。黃志清等[6]、蔡琪琪等[7]的研究發(fā)現(xiàn)紅曲霉在紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過程中的菌量呈不斷下降的趨勢,對其原因并未深入探究。針對紅曲霉生長的抑制因素,除了營養(yǎng)物質(zhì)的消耗之外,其它微生物的生長代謝也可能會對紅曲霉的生長產(chǎn)生影響。賈瑞博等[8]通過變性凝膠電泳技術(shù)揭示了紅曲黃酒釀造過程中的優(yōu)勢細(xì)菌為乳桿菌,發(fā)酵液酸度的增加可能會抑制紅曲霉的生長[9];牟穰等[10]通過宏基因組學(xué)技術(shù)對海派黃酒釀造過程中真菌菌群動態(tài)進(jìn)行跟蹤測定,試驗(yàn)結(jié)果表明曲霉屬的相對豐度隨釀造時間的延長有所下降,并指出影響其變化的原因可能與酸度、酒精度的增加有關(guān)。有學(xué)者表明,紅曲黃酒釀造過程中pH值的變化在3.5~5.5范圍內(nèi)[11],此酸度適宜紅曲霉的生長繁殖[12],且適宜濃度的酸、醇能夠促進(jìn)高溫型紅曲霉的生長[13]。此外,釀造過程中的其它因素亦可能對紅曲霉產(chǎn)生影響,這使得紅曲霉與其生長抑制因素之間的關(guān)系變得復(fù)雜。

    為探明紅曲黃酒釀造過程中紅曲霉的主要抑制因素,本研究將采用分子生態(tài)學(xué)PCR-DGGE技術(shù)及實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)相結(jié)合的方法,對平湖紅曲黃酒釀造過程中的真菌菌群動態(tài)進(jìn)行定性、定量分析,并根據(jù)紅曲霉菌量不斷減少的趨勢推測其中可能的原因,同時構(gòu)造相應(yīng)的體系進(jìn)行驗(yàn)證,尋找影響紅曲霉生長的關(guān)鍵因子,為探究紅曲霉在發(fā)酵過程中的作用機(jī)制以及改善紅曲黃酒的品質(zhì)提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    平湖紅曲(Q01),福建省古田縣平湖紅酒曲有限公司;紅曲霉C1,由平湖紅曲中分離純化而得,編號C1,由福州大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)研究所保藏[14]。圓糯米,福州市閩侯縣上街鎮(zhèn)糧油站;真菌基因組提取所需試劑、引物、PCR試劑盒、DNA Maker,上海生物工程有限公司;其它試劑均為分析純級。

    糯米培養(yǎng)基:用于液化液的制備;糯米和水按質(zhì)量比1∶1.5的比例混合,在室溫下浸泡8 h,121℃蒸煮20 min。

    1.2 儀器與設(shè)備

    SW-CJ-IFD型超凈工作臺,上海博訊實(shí)業(yè);GNP-9080型恒溫培養(yǎng)箱,上海精宏;BIO-RAD DcodeTM型梯度變性凝膠電泳,美國伯樂公司;瓊脂糖水平板電泳儀,北京六一公司;JS-380C型凝膠成像分析儀,上海培清;7890A氣相色譜儀,安捷倫。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 平湖紅曲黃酒釀造及取樣過程 將糯米浸泡蒸熟攤涼后,與研磨浸泡后的平湖紅曲(Q01)攪拌均勻,放入滅菌后的酒壇中,25℃糖化5 d,再調(diào)整溫度為18℃,密封發(fā)酵25 d。紅曲與糯米按質(zhì)量比1∶10添加,糯米與水添加比例為質(zhì)量比1∶1.5。取樣時間點(diǎn)設(shè)置為發(fā)酵前期(第1~7天)、中期(第 10 天)、后期(第 20、30 天)。

    1.3.2 發(fā)酵樣品預(yù)處理 發(fā)酵樣品攪拌均勻后,取2.00 g,稱于20 mL無菌生理鹽水中,振蕩均勻后分裝于2 mL離心管中,12 000 r/min離心10 min,棄上清后,沉淀放置-20℃冰箱中凍存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.3 孢子懸浮液的制備 紅曲霉C1活化結(jié)束后,用孢子洗脫液洗下孢子,轉(zhuǎn)入帶有玻璃珠的三角瓶中,振蕩,充分打散孢子,用4層無菌擦鏡紙過濾去除菌絲,利用血球計(jì)數(shù)板在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù),制成終濃度為106個/mL的均一孢子懸液,備用。

    1.3.4 各體系紅曲霉菌量變化的跟蹤方法 樣品真菌基因組DNA的提取及實(shí)時熒光定量PCR分析詳見參考文獻(xiàn)[14]。

    1.3.5 發(fā)酵體系的構(gòu)建 模擬傳統(tǒng):30 g蒸熟糯米、3 g紅曲和45 mL無菌水,三者的質(zhì)量比與酒壇釀造一致。

    純菌發(fā)酵:30 g蒸熟糯米、3 mL純菌紅曲霉(C1)菌液,補(bǔ)水至與模擬傳統(tǒng)體系同體積。

    體系1(除去曲米):30 g蒸熟糯米、紅曲處理上清液(3 g紅曲研磨后加生理鹽水充分振蕩,靜置分層,取上清液加入),補(bǔ)水至與模擬傳統(tǒng)體系同體積。

    體系2(抑制因子):30 g蒸熟糯米、無菌的紅曲處理上清液(3 g紅曲研磨后加生理鹽水充分振蕩,靜置分層,取上清液用0.22 μm的無菌濾膜過濾)、3 mL純菌紅曲霉(C1)菌液,補(bǔ)水至與模擬傳統(tǒng)體系同體積。

    體系3(不同酒精度):30 g蒸熟糯米、3 mL純菌紅曲霉(C1)菌液、不同體積的乙醇,補(bǔ)水至與模擬傳統(tǒng)體系同體積,最終乙醇的體積分?jǐn)?shù)分別為0,4%,13%,16%,25%,50%。

    以上均在100 mL的錐形瓶中30℃下培養(yǎng)。

    1.3.6 酒精度的測定 采用填充柱氣相色譜法[15]。

    (1)色譜條件 色譜柱:10%PEG填充柱;載氣:N2;進(jìn)樣量:1 μL;空氣流速:0.2 MPa;H2流速:0.05 MPa;載氣流速:0.3 MPa;氣化室溫度:230℃;柱溫:80℃;檢測器溫度:250℃。

    (2)標(biāo)曲的繪制 吸取無水乙醇配制成質(zhì)量濃度分別為0,1.0000,1.5000,2.0000,2.5000,3.0000,4.0000 g/L的乙醇工作液,同時配制2.0000 g/L的正丙醇標(biāo)準(zhǔn)液,分別將各質(zhì)量濃度的乙醇工作液與正丙醇標(biāo)準(zhǔn)液等體積混合后進(jìn)樣,每個樣品重復(fù)2次,得到各質(zhì)量濃度的乙醇工作液與正丙醇標(biāo)準(zhǔn)液的峰面積比Ai/As,以標(biāo)樣的峰面積比值的平均值為橫坐標(biāo),乙醇的質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 平湖紅曲黃酒釀造過程中優(yōu)勢真菌菌群的變化

    2.1.1 優(yōu)勢真菌菌群結(jié)構(gòu)分析 以NS1/GCFung作為引物擴(kuò)增平湖紅曲黃酒各個釀造時間點(diǎn)所提真菌基因組的18S rDNA序列可變區(qū),所得PCR產(chǎn)物進(jìn)行變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析。

    在DGGE圖譜(圖2)中,平湖紅曲(泳道Q01)檢測到一條高亮條帶(Band 2),而平湖紅曲黃酒釀造過程中具有處于不同位置的2個高亮條帶(Band 1和Band 2),說明Band 2對應(yīng)的菌株在平湖紅曲中屬于優(yōu)勢菌,并且Band 1對應(yīng)的菌株也存在于平湖紅曲中,并非優(yōu)勢菌,其提取效率低,因此Band 1在Q01泳道中條帶不明顯。

    以純菌釀酒酵母NY02(Saccharomyces cere-visiae)及純菌紅曲霉 B1(Monascus sp.)的DGGE條帶作為參照,發(fā)現(xiàn)Band 1和Band 2分別與兩純菌條帶處于同一位置,結(jié)合前期對平湖紅曲的真菌菌群結(jié)構(gòu)分析[21],可以確定平湖紅曲黃酒釀造過程中的優(yōu)勢真菌主要是釀酒酵母和紅曲霉,說明平湖紅曲在進(jìn)行傳統(tǒng)釀造過程中,與其它黃酒體系相比,真菌體系較為簡單[16]。

    圖1 乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of ethanol content

    此外,觀察釀造過程中的菌群動態(tài)變化,發(fā)酵前3 d,紅曲霉為絕對優(yōu)勢菌,至發(fā)酵第4天后,酵母菌對應(yīng)的條帶逐漸變亮,紅曲霉對應(yīng)的條帶逐漸變暗,甚至幾乎消失,酵母逐漸取代紅曲霉作為釀酒的優(yōu)勢菌,可能與釀造過程中的環(huán)境變化有關(guān),也可能與兩者生長周期和生長能力不同有關(guān)[17]。

    通過DGGE的定性分析可知,平湖紅曲黃酒釀造過程中的優(yōu)勢菌為紅曲霉和釀酒酵母,欲探知兩種優(yōu)勢菌的菌群數(shù)量變化,還需結(jié)合實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)對其進(jìn)行定量追蹤。

    2.1.2 優(yōu)勢真菌菌群數(shù)量變化 采用特異性引物Mp-F/Mp-R和SC1d/SC1r分別對平湖紅曲黃酒各個釀造時間點(diǎn)的紅曲霉和釀酒酵母菌量進(jìn)行檢測,結(jié)果如圖3所示:兩種優(yōu)勢菌的變化趨勢與DGGE結(jié)果相符,釀酒酵母在發(fā)酵前期基本檢測不到,到第2天之后迅速增加,至發(fā)酵第5天達(dá)到5.51log10CFU/g,之后呈現(xiàn)緩慢增加的趨勢。紅曲霉的數(shù)量變化則與之相反,發(fā)酵第一天則迅速下降至4.62log10CFU/g,之后在整個發(fā)酵過程中呈現(xiàn)緩慢下降趨勢,在發(fā)酵第10天后下降明顯。

    圖2 平湖紅曲黃酒傳統(tǒng)釀造過程中真菌菌群結(jié)構(gòu)PCR-DGGE圖譜Fig.2 PCR-DGGE profiles of fungal community during the traditional brewing of Pinghu Hongqu glutinous rice wine

    由于第0天和發(fā)酵過程中的取樣方法的差異可能導(dǎo)致發(fā)酵第1天的菌量迅速下降。第0天是對紅曲進(jìn)行直接取樣處理,而整個發(fā)酵過程的取樣是對酒壇里的酒醅(曲米混合樣)進(jìn)行取樣處理,樣品狀態(tài)不一致,對菌量測定結(jié)果有一定差異。然而,在發(fā)酵過程中,操作一致的情況下,紅曲霉的菌量仍然緩慢下降,釀酒酵母則穩(wěn)步上升。針對紅曲霉菌量下降的可能原因有:(1)紅曲霉與釀酒酵母之間存在拮抗作用,釀酒酵母的生長抑制了紅曲霉菌量的增加。然而,有部分學(xué)者研究表明,上述兩種菌可以互利共棲,產(chǎn)生協(xié)同作用。Shin等[18]研究表明紅曲霉與釀酒酵母純菌株混合培養(yǎng)時,紅曲霉的生物量會增加至原來的兩倍左右。周學(xué)勤等[19]研究發(fā)現(xiàn)酵母菌的添加并不會影響紅曲霉生長曲線的基本模式,酵母菌及其細(xì)胞破碎液還可以提高紅曲霉的色素產(chǎn)量,因此二者相互抑制的可能性不大。(2)紅曲霉為好氧菌,由于傳統(tǒng)釀造過程中,從發(fā)酵第6天開始封罐壇,溶氧量的減少抑制了紅曲霉的生長。(3)紅曲米對紅曲霉的物理性束縛阻礙了紅曲霉的生長和釋放。紅曲本身是在蒸熟的大米上接種紅曲霉發(fā)酵制備而得,紅曲霉菌絲深入到曲米中,生長空間有限,則在發(fā)酵過程不易被釋放出來。(4)紅曲浸泡液中可能存在某些生長抑制因子,抑制了紅曲霉的生長。(5)發(fā)酵過程中乙醇含量迅速增加,超過了紅曲霉的耐受能力,導(dǎo)致紅曲霉的生長受到抑制。

    基于此,試驗(yàn)將采用小體系的研究方法對紅曲霉菌量減少的原因進(jìn)行細(xì)化探究。在進(jìn)行小體系探究時,除了發(fā)酵條件應(yīng)與傳統(tǒng)釀造保持一致,還需要通過試驗(yàn)說明紅曲霉能夠在小體系的糯米基質(zhì)上生長,且小體系對于傳統(tǒng)發(fā)酵的模擬能夠重現(xiàn)紅曲霉的生長變化規(guī)律,這樣小體系的構(gòu)建才有意義。

    2.2.1 模擬體系的構(gòu)建 采用小體系研究方法,利用三角瓶替代傳統(tǒng)酒壇進(jìn)行發(fā)酵,發(fā)酵過程中紅曲、糯米及水的比例均與酒壇釀造一致,糖化時間、密封時間、發(fā)酵溫度等均嚴(yán)格模擬傳統(tǒng)發(fā)酵。

    模擬傳統(tǒng)體系與傳統(tǒng)發(fā)酵體系相比,雖然在物質(zhì)傳遞、群體感應(yīng)、菌株拮抗、容器滲氧效果等方面可能有所不同[20],但結(jié)合圖3、圖4可以發(fā)現(xiàn),模擬傳統(tǒng)的紅曲霉菌量緩慢下降,與酒壇釀造的變化趨勢頗為相似,說明模擬傳統(tǒng)體系中紅曲霉的變化趨勢重現(xiàn)性較好,體系構(gòu)建較為合理,便于后續(xù)研究。

    2.2 紅曲霉的生長抑制因素探究

    圖3 釀造過程優(yōu)勢真菌的動態(tài)變化Fig.3 Dynamic changes of dominant fungal species during fermentation process

    另外,在純菌發(fā)酵體系中,紅曲霉的菌量逐步增加,說明紅曲霉可以依附于糯米基質(zhì)上生長,并且第6、7天的封壇發(fā)酵對紅曲霉的生長抑制并不顯著,可見在封壇前期溶氧量的暫時減少并不是影響紅曲霉生長的關(guān)鍵因子,發(fā)酵體系內(nèi)殘余的氧氣仍能促進(jìn)紅曲霉的生長繁殖。

    針對模擬傳統(tǒng)(混菌發(fā)酵)和純菌發(fā)酵體系中紅曲霉菌量變化的差異,以下將在小體系的基礎(chǔ)之上分別構(gòu)造體系以尋找影響紅曲霉生長的關(guān)鍵因子。

    圖4 模擬傳統(tǒng)與純菌發(fā)酵體系中紅曲霉菌量變化Fig.4 Dynamic changes of Monascus in two systems(simulation tradition system and pure fungus fermentation system)

    2.2.2 曲米的物理束縛對紅曲霉生長的影響 體系1是在模擬傳統(tǒng)的基礎(chǔ)之上,將紅曲米進(jìn)行破碎,提取紅曲米中的菌株進(jìn)行混菌發(fā)酵。解除了曲米的物理束縛后,紅曲霉的菌量仍然逐漸減少(圖5),說明曲米的物理狀態(tài)并不會對紅曲霉的生長起到明顯的抑制作用。這可能由于紅曲米在制備過程中,將糯米進(jìn)行蒸煮后,有利于米粒中的游離水與淀粉發(fā)生反應(yīng),使其糊化,而在糊化過程中,水分子進(jìn)入微晶結(jié)構(gòu),打破了淀粉分子之間的聯(lián)系,使淀粉分子通過水合過程形成膠體體系[21],該體系的硬度明顯降低,減少了曲米中微生物生長的機(jī)械阻礙。而曲米中的微生物在生長繁殖過程中,會降解糊化體系中的淀粉,拓寬了微生物的生長空間,干燥后使曲米形成多孔結(jié)構(gòu),減少了曲米的物理束縛,因而對紅曲霉生長的影響較不顯著。

    2.2.3 曲米浸泡液對紅曲霉生長的影響 在紅曲米的制備及貯存過程中,曲米內(nèi)部和表面微生物分泌的代謝產(chǎn)物可能會對紅曲霉的生長產(chǎn)生影響,為探究此影響,構(gòu)建了體系2。該體系在純菌發(fā)酵的基礎(chǔ)上加入了無菌紅曲處理液,如圖6所示。結(jié)果表明,體系2的生長曲線與圖4中的純菌發(fā)酵體系類似,紅曲霉的菌量穩(wěn)步增加,可見曲米浸泡液中的物質(zhì)在發(fā)酵過程中對紅曲霉的生長抑制并不顯著,可能由于微生物在生長過程中會通過代謝作用來改變生長環(huán)境,從而利于它自身的生長,而DEEG和qPCR的結(jié)果均顯示紅曲霉為紅曲米中的優(yōu)勢菌,曲米中積累的物質(zhì)難以對紅曲霉產(chǎn)生明顯的負(fù)面影響。

    圖5 體系1中紅曲霉的菌量變化Fig.5 Dynamic changes of Monascus in system one

    2.2.4 酒精度對紅曲霉生長的影響 構(gòu)建體系3,研究酒精度對紅曲霉生長的影響。如圖7所示,空白組(KB)和4%酒精度樣品組①的糯米上都能布滿菌絲,而隨著乙醇濃度的增加,糯米培養(yǎng)基上的紅色菌絲逐漸減少,表明酒精度的增加對紅曲霉的生長有明顯的抑制作用。

    圖6 體系2中紅曲霉的菌量變化Fig.6 Dynamic changes of Monascus in system two

    圖7 體系3中不同酒精度下紅曲霉的生長情況Fig.7 The growth of Monascus under different alcohol content

    試驗(yàn)進(jìn)一步對傳統(tǒng)釀造過程中酒精度的變化與紅曲霉生長的關(guān)系進(jìn)行細(xì)化研究。根據(jù)傳統(tǒng)酒壇釀造過程中酒精的變化情況(圖8),將各個取樣時間點(diǎn)對應(yīng)體積分?jǐn)?shù)的乙醇加入帶有紅曲霉C1孢子液的糯米培養(yǎng)基中,單獨(dú)發(fā)酵3 d,結(jié)果如圖9所示。

    由圖9可知,單獨(dú)發(fā)酵第1天紅曲霉的菌量就出現(xiàn)明顯差異,分別聚集在3個位置:(1)KB和傳統(tǒng)發(fā)酵第1~3天的酒精度對應(yīng)的紅曲霉菌量最多,且在后續(xù)發(fā)酵中基本持平,說明酒精度低于4%時,對紅曲霉的生長無影響;(2)傳統(tǒng)發(fā)酵第4~5天的酒精度(9%,12%)對應(yīng)的紅曲霉菌量居中,且在后續(xù)發(fā)酵中持續(xù)上升至與KB相當(dāng),有研究表明紅曲霉可以耐受10%左右的乙醇[22],說明此時的酒精度已臨近紅曲霉的耐受范圍,紅曲霉的生長開始受到抑制;(3)傳統(tǒng)發(fā)酵第6~30天的酒精度,這些酒精度下對應(yīng)的紅曲霉菌量最少,且在后續(xù)發(fā)酵中,第6~10天的酒精度下紅曲霉菌量迅速增加,而發(fā)酵第20~30天的酒精度下紅曲霉的菌量則增加緩慢,抑制作用更明顯,該結(jié)果與DGGE圖譜的菌量變化相一致,即紅曲霉的條帶在發(fā)酵第20天明顯變淡。

    圖8 發(fā)酵過程中乙醇的含量變化Fig.8 Changes of ethanol content during the fermentation process

    圖9 傳統(tǒng)釀造中的酒精度變化對紅曲霉生長的影響Fig.9 Effect of alcohol content during traditional brewing on the growth of Monascus

    3 結(jié)論

    試驗(yàn)結(jié)果表明傳統(tǒng)釀造體系的優(yōu)勢真菌為釀酒酵母和紅曲霉,其中紅曲霉在發(fā)酵前3 d占優(yōu)勢,之后其菌量逐漸下降,而釀酒酵母在發(fā)酵第3天后逐漸增加,并隨著發(fā)酵時間的延長逐步取代紅曲霉成為釀造中后期的優(yōu)勢菌。在模擬傳統(tǒng)和純菌發(fā)酵過程中,模擬傳統(tǒng)體系可以重現(xiàn)紅曲霉的生長趨勢,而純菌發(fā)酵體系說明了封壇前期溶氧量的暫時減少并不能顯著抑制紅曲霉的生長。根據(jù)前期的對比研究,初步推測紅曲米的物理束縛、紅曲浸泡液中的物質(zhì)以及酒精度的增加可能會抑制紅曲霉生長,針對這3個可能的影響因素構(gòu)造3種體系,結(jié)果發(fā)現(xiàn),前兩者對于紅曲霉的生長并不會起到顯著的抑制作用,而酒精度的增加是影響紅曲霉生長的關(guān)鍵因子。試驗(yàn)進(jìn)一步對傳統(tǒng)釀造過程中酒精度的變化與紅曲霉生長的關(guān)系進(jìn)行深入研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),發(fā)酵初期的酒精度(體積分?jǐn)?shù)0~4%)對紅曲霉無影響,而隨著酒精度的增加,紅曲霉的生長逐漸受到抑制,至發(fā)酵后期的酒精度(體積分?jǐn)?shù)17%)對紅曲霉的抑制作用顯著,因而導(dǎo)致紅曲霉在DGGE上的條帶在發(fā)酵第20天明顯變淡。

    猜你喜歡
    紅曲平湖曲霉菌
    紅曲黃色素的研究進(jìn)展
    雞曲霉菌病的發(fā)病特點(diǎn)、臨床癥狀、鑒別與防治
    藥食兩用話紅曲
    中老年保健(2020年5期)2020-12-11 01:16:06
    吟荷
    肺曲霉菌合并肺放線菌感染一例
    紅曲黃色素的多樣性及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的討論
    佩特曲霉菌次生代謝產(chǎn)物的研究
    中成藥(2017年7期)2017-11-22 07:33:13
    平湖“三制三線”防范處置企業(yè)欠薪
    工會信息(2016年1期)2016-04-16 02:38:46
    平湖秋月
    小說月刊(2015年4期)2015-04-18 13:55:17
    白藜蘆醇對紅色毛癬菌和煙曲霉菌抑菌作用比較
    婷婷色av中文字幕| 中文字幕亚洲精品专区| 日本wwww免费看| 国产黄频视频在线观看| 午夜福利,免费看| 热re99久久精品国产66热6| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产69精品久久久久777片| 日本欧美国产在线视频| 曰老女人黄片| 人妻系列 视频| 国产亚洲一区二区精品| 99热全是精品| 精品久久久久久久久av| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲精品一二三| 免费大片黄手机在线观看| 黄色一级大片看看| 色网站视频免费| 日本黄大片高清| 美女大奶头黄色视频| 亚洲精品自拍成人| 久久99蜜桃精品久久| 午夜av观看不卡| 精品国产乱码久久久久久小说| 五月伊人婷婷丁香| 精品午夜福利在线看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲av成人精品一区久久| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 嫩草影院新地址| 免费看av在线观看网站| 黄色配什么色好看| 极品人妻少妇av视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| 91精品国产九色| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲精品一区蜜桃| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产精品免费大片| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产永久视频网站| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 水蜜桃什么品种好| 麻豆成人av视频| 最新的欧美精品一区二区| 成人特级av手机在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 一级,二级,三级黄色视频| 男女边吃奶边做爰视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 免费看不卡的av| 国产成人精品无人区| 日本av免费视频播放| 精品国产一区二区久久| 综合色丁香网| 在线免费观看不下载黄p国产| 一级爰片在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 22中文网久久字幕| 桃花免费在线播放| 91久久精品国产一区二区成人| 在线观看www视频免费| 少妇精品久久久久久久| 在线观看人妻少妇| 亚洲av综合色区一区| 在线观看人妻少妇| 国产又色又爽无遮挡免| 国产一区二区三区综合在线观看 | 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 最近中文字幕2019免费版| 亚洲成人av在线免费| 精品熟女少妇av免费看| 免费观看av网站的网址| 精品人妻偷拍中文字幕| 男女边摸边吃奶| 黄片无遮挡物在线观看| 女人精品久久久久毛片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲av国产av综合av卡| 综合色丁香网| 中文在线观看免费www的网站| 熟女电影av网| 国产亚洲91精品色在线| 国产视频内射| av福利片在线观看| 女人精品久久久久毛片| 久久精品夜色国产| 亚洲中文av在线| 国产一区二区在线观看av| 高清不卡的av网站| 国产色爽女视频免费观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 日韩av免费高清视频| 国产精品一区www在线观看| 午夜视频国产福利| 观看av在线不卡| 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久久国产欧美日韩av| 最近中文字幕2019免费版| 女人精品久久久久毛片| 国产精品一区www在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 只有这里有精品99| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 精品亚洲成国产av| 伦精品一区二区三区| 欧美日韩综合久久久久久| 青春草亚洲视频在线观看| 国模一区二区三区四区视频| 51国产日韩欧美| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产伦理片在线播放av一区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 日韩大片免费观看网站| 国产精品三级大全| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产av国产精品国产| 老司机影院成人| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 七月丁香在线播放| 亚洲情色 制服丝袜| 久久国内精品自在自线图片| 免费看日本二区| 久久这里有精品视频免费| 亚洲国产精品999| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产一区二区在线观看日韩| 我要看黄色一级片免费的| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 乱码一卡2卡4卡精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 精品久久久久久久久av| 欧美丝袜亚洲另类| 插逼视频在线观看| 精品一区在线观看国产| 欧美成人午夜免费资源| 22中文网久久字幕| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 午夜免费鲁丝| 99热这里只有是精品50| 国产精品成人在线| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 国产色婷婷99| 深夜a级毛片| 嫩草影院入口| 一级av片app| 女性被躁到高潮视频| 午夜日本视频在线| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲美女视频黄频| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美少妇被猛烈插入视频| 老司机亚洲免费影院| 中文字幕亚洲精品专区| av在线老鸭窝| 九九在线视频观看精品| 中文欧美无线码| 亚洲精品国产成人久久av| 下体分泌物呈黄色| 青春草视频在线免费观看| 国产永久视频网站| 国产亚洲5aaaaa淫片| 少妇的逼好多水| 日本爱情动作片www.在线观看| 一本久久精品| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲电影在线观看av| 七月丁香在线播放| 老司机影院成人| 久久久久久久亚洲中文字幕| 熟女电影av网| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲精品日本国产第一区| 国产日韩欧美在线精品| 欧美日韩综合久久久久久| 日本wwww免费看| 在线观看免费高清a一片| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美老熟妇乱子伦牲交| freevideosex欧美| 久久韩国三级中文字幕| 在线播放无遮挡| 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲性久久影院| 色吧在线观看| 超碰97精品在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 日本爱情动作片www.在线观看| tube8黄色片| 2022亚洲国产成人精品| 老司机亚洲免费影院| 日本黄色日本黄色录像| 丰满乱子伦码专区| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲美女视频黄频| 超碰97精品在线观看| 免费观看av网站的网址| 在线观看免费高清a一片| 国产伦精品一区二区三区四那| 看非洲黑人一级黄片| 老司机亚洲免费影院| 不卡视频在线观看欧美| 黑人猛操日本美女一级片| 成年av动漫网址| 伊人亚洲综合成人网| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产精品人妻久久久久久| 国产成人91sexporn| 人妻系列 视频| 最近中文字幕2019免费版| 欧美性感艳星| 秋霞伦理黄片| 国产成人免费观看mmmm| 18禁动态无遮挡网站| 日韩欧美 国产精品| 久久6这里有精品| 黄色欧美视频在线观看| 99久久精品热视频| 日本黄色片子视频| 欧美xxⅹ黑人| 亚洲精品自拍成人| 国产精品欧美亚洲77777| 国产精品伦人一区二区| 久久久久久久久久久久大奶| 精品久久久精品久久久| 国产黄片美女视频| 色视频在线一区二区三区| 精品一区二区三卡| 亚洲av男天堂| 国内精品宾馆在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产乱人偷精品视频| 秋霞伦理黄片| 天天操日日干夜夜撸| 午夜久久久在线观看| 国产 精品1| 国产淫语在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日韩中字成人| 韩国av在线不卡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人精品一,二区| 日本午夜av视频| 欧美日韩av久久| 成人免费观看视频高清| 搡老乐熟女国产| av在线app专区| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲综合精品二区| 成人免费观看视频高清| av在线播放精品| 午夜视频国产福利| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产深夜福利视频在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 婷婷色麻豆天堂久久| 最近手机中文字幕大全| 亚洲中文av在线| 久久午夜综合久久蜜桃| 一个人免费看片子| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产真实伦视频高清在线观看| 曰老女人黄片| 久久人妻熟女aⅴ| 一二三四中文在线观看免费高清| 内射极品少妇av片p| 各种免费的搞黄视频| 午夜精品国产一区二区电影| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲经典国产精华液单| 91精品国产国语对白视频| 国产精品人妻久久久久久| 黑人高潮一二区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久精品夜色国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 精品久久久精品久久久| av福利片在线观看| 午夜福利视频精品| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一级毛片久久久久久久久女| 在线播放无遮挡| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 一区二区三区精品91| 日本欧美国产在线视频| av.在线天堂| 午夜福利视频精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av视频免费观看在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲av.av天堂| 国产91av在线免费观看| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品福利在线免费观看| 国产视频内射| 国产黄频视频在线观看| 韩国av在线不卡| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久国产精品麻豆| 色视频在线一区二区三区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 激情五月婷婷亚洲| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲综合色惰| 高清在线视频一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 国产淫片久久久久久久久| 日本免费在线观看一区| 99九九在线精品视频 | 国产淫片久久久久久久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 性色avwww在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 一二三四中文在线观看免费高清| 五月开心婷婷网| 校园人妻丝袜中文字幕| 不卡视频在线观看欧美| av国产精品久久久久影院| 国产伦在线观看视频一区| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品国产av在线观看| 亚洲精品色激情综合| 精品亚洲成a人片在线观看| 少妇丰满av| 香蕉精品网在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 韩国av在线不卡| 久久热精品热| 国产 精品1| 午夜福利网站1000一区二区三区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产探花极品一区二区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成人黄色视频免费在线看| 在线观看免费高清a一片| 日本欧美视频一区| 欧美xxⅹ黑人| 一级毛片久久久久久久久女| av线在线观看网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一级毛片电影观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 男女啪啪激烈高潮av片| 日日爽夜夜爽网站| 国产色婷婷99| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 91精品国产国语对白视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲国产最新在线播放| 国产又色又爽无遮挡免| 桃花免费在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 不卡视频在线观看欧美| 久久久久久伊人网av| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲国产日韩一区二区| 一级片'在线观看视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 六月丁香七月| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 美女cb高潮喷水在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 边亲边吃奶的免费视频| 人妻少妇偷人精品九色| 国产亚洲5aaaaa淫片| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲美女黄色视频免费看| 成人二区视频| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲精品aⅴ在线观看| 少妇的逼好多水| 精华霜和精华液先用哪个| 一本久久精品| 日韩电影二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 少妇被粗大猛烈的视频| 日日撸夜夜添| 国产亚洲一区二区精品| 在线观看免费视频网站a站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日本av免费视频播放| 美女视频免费永久观看网站| 久久久久精品久久久久真实原创| 国产乱人偷精品视频| 99热国产这里只有精品6| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久精品国产自在天天线| av线在线观看网站| 大码成人一级视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产视频首页在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 十八禁网站网址无遮挡 | 国产av一区二区精品久久| 国产精品一区二区在线不卡| 亚洲国产日韩一区二区| 午夜老司机福利剧场| 亚洲欧美精品自产自拍| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久99精品国语久久久| 纯流量卡能插随身wifi吗| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 丝袜喷水一区| 亚洲欧洲日产国产| 久久av网站| av国产精品久久久久影院| 亚洲成色77777| 日韩免费高清中文字幕av| 天堂中文最新版在线下载| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 丁香六月天网| 成人特级av手机在线观看| 人妻一区二区av| 国产成人免费无遮挡视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜日本视频在线| 18禁动态无遮挡网站| 国产成人免费观看mmmm| 另类亚洲欧美激情| 久久青草综合色| .国产精品久久| 日本欧美国产在线视频| 最新的欧美精品一区二区| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲av成人精品一二三区| 乱码一卡2卡4卡精品| 老女人水多毛片| 人人妻人人澡人人看| 中文在线观看免费www的网站| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产伦理片在线播放av一区| 99久久综合免费| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产中年淑女户外野战色| 日韩中字成人| 99热这里只有是精品50| 国产精品一区二区在线不卡| 女人久久www免费人成看片| 我要看黄色一级片免费的| 22中文网久久字幕| 欧美 日韩 精品 国产| 十分钟在线观看高清视频www | 日韩大片免费观看网站| 国产又色又爽无遮挡免| 美女福利国产在线| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲成人一二三区av| 草草在线视频免费看| 黄色欧美视频在线观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲不卡免费看| 亚洲自偷自拍三级| 日韩成人伦理影院| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲av福利一区| 亚洲国产精品999| 嫩草影院入口| 精品人妻偷拍中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久av网站| 成人无遮挡网站| 男的添女的下面高潮视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 成人国产av品久久久| 久久久久久久亚洲中文字幕| 在线观看国产h片| 精品酒店卫生间| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 晚上一个人看的免费电影| 草草在线视频免费看| 国产深夜福利视频在线观看| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产av一区二区精品久久| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品人妻久久久影院| 久久av网站| 性色avwww在线观看| 日日啪夜夜撸| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品免费大片| 欧美激情极品国产一区二区三区 | av国产久精品久网站免费入址| 男女边摸边吃奶| 亚洲美女搞黄在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 精品酒店卫生间| 麻豆成人午夜福利视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲人成网站在线播| 国产亚洲欧美精品永久| 九草在线视频观看| 下体分泌物呈黄色| 最新中文字幕久久久久| a级一级毛片免费在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 日韩人妻高清精品专区| 99久久人妻综合| av天堂久久9| 99精国产麻豆久久婷婷| 青春草国产在线视频| 亚洲综合色惰| 日韩成人伦理影院| 99久久精品国产国产毛片| 哪个播放器可以免费观看大片| 青春草视频在线免费观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲av综合色区一区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲在久久综合| 亚洲精品日本国产第一区| 精华霜和精华液先用哪个| 在线观看免费视频网站a站| 99久久综合免费| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久久国产欧美日韩av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 观看美女的网站| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 香蕉精品网在线| 男女边吃奶边做爰视频| 大陆偷拍与自拍| 免费看日本二区| 精品久久久久久久久av| 看十八女毛片水多多多| 99热6这里只有精品| 国产成人免费观看mmmm| 内射极品少妇av片p| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产伦精品一区二区三区视频9| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产亚洲精品久久久com| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 国产精品女同一区二区软件| 午夜日本视频在线| 日本91视频免费播放| 视频中文字幕在线观看| 欧美精品一区二区大全| 99热这里只有精品一区| a级毛片免费高清观看在线播放| 老司机影院毛片| 亚洲av综合色区一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久久久久久亚洲中文字幕| 日韩强制内射视频| 亚洲性久久影院| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 99热国产这里只有精品6| 如何舔出高潮| 七月丁香在线播放| h视频一区二区三区| 偷拍熟女少妇极品色| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲人与动物交配视频| 国产黄色免费在线视频| 国产精品久久久久久久久免| 精品国产一区二区久久|