白及與2種混偽品的對比鑒別研究

朱新焰，張彬若，楊竹雅，張智慧，叢 琨，孫信梅，曾 彪，石亞娜，錢均祥，王家金，季鵬章,*

(1.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院藥用植物研究所，云南 昆明 650205；2.云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650500；3.彝良縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，云南 昭通 657600；4.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，云南 昆明 650205)

【研究意義】白及是蘭科白及屬植物白及[Bletillastriata( Thunb. ) Reichb. f. ]的干燥假鱗莖，是2015版《中華人民共和國藥典》(一部)收載的名貴中藥。白及主要具有補肺、收斂止血、消腫及生肌等功效，用于治療肺結(jié)核咳血、潰瘍病出血、外傷出血、瘡瘍出血等出血癥狀及外用于皮膚皴裂、肌肉腫脹等癥[1]。云南省為白及的重要產(chǎn)區(qū)之一，白及已列為云南省重要瀕危、特色中藥材品種[2]。白及因其確切的功效，其市場需求及價格曾一度持續(xù)攀升。截至2018年底，通過對白及的主要集散市場進行調(diào)查，其市場需求仍有較大缺口，導(dǎo)致近年來不斷出現(xiàn)新的混偽品[3]，偽品大量混入正品藥材之中，造成白及混偽品充斥市場的局面。近期，國家食藥監(jiān)局發(fā)布的不合格的云南白及飲片批次中，就有多批是因為摻雜了混偽品的緣故。白及偽品的不斷出現(xiàn)，嚴重影響了白及飲片及以白及為原料的制劑和中成藥的質(zhì)量，有必要對混偽品進行整理和比對鑒定，確保藥材質(zhì)量。【前人研究進展】目前，對白及混偽品的研究具有一定的局限性。有的研究只是明確了真?zhèn)纹分g的形態(tài)差異，并沒有鑒定出混偽品的基源[4]；有的研究則具有一定的區(qū)域局限性，其混偽品的出現(xiàn)具有一定的偶然性等[5]?！颈狙芯壳腥朦c】通過第四次全國中藥資源普查(云南省試點工作)及筆者近期對云南官渡、文山及貴州等地主要藥材市場的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，市場上出現(xiàn)了2種普遍的混偽品藥材和飲片。它們的干藥材及飲片的外觀性狀與正品白及較為相似。因此，為了安全、有效用藥、保護藥用植物資源，筆者從性狀、顯微特征等方面對白及與其混偽品進行了對比鑒別研究。本研究在對市售白及混偽品進行鑒定后，又采集了同類偽品鮮樣，進行比對鑒定研究，確保鑒定結(jié)果的真實性和有效性，此種系統(tǒng)比對鑒定方法尚鮮見報道。【擬解決的關(guān)鍵問題】通過調(diào)查并收集重點混偽品，在傳統(tǒng)的鑒定技術(shù)基礎(chǔ)上，采集混偽品的基源樣品進行對比鑒別，使鑒定結(jié)果具有一致性，從而揭示白及及其混偽品的形態(tài)學(xué)和顯微特征等方面的區(qū)別；建立系統(tǒng)鑒別白及及其混偽品的方法，保證藥材品質(zhì)，為市場、藥房的監(jiān)督管理提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

通過對云南主要藥材市場及白及藥材集散地進行反復(fù)調(diào)查，收集白及與充斥其中的混偽品，整理出2種普遍的混偽品。經(jīng)鑒定混偽品1為蘭科獨蒜蘭屬植物云南獨蒜蘭(PleioneyunnanensisRolfe)的干燥假鱗莖及切片，混偽品2為百合科黃精屬植物滇黃精(PolygonatumkingianumColl. etHemsl)的干燥根莖及切片。

正品與混偽品植物樣品采自紅河州蒙自市新安所鎮(zhèn)及昆明市團結(jié)鄉(xiāng)、白邑鄉(xiāng)，樣品鑒定結(jié)果及來源信息見表 1。

1.2 試劑與儀器

稀甘油、鹽酸、碘試液、水合氯醛及甲醛、冰醋酸、乙醇、甘油(FAA液)等試劑均為分析純，水為純化水。 主要設(shè)備和儀器：Nikon 80i顯微鏡，ES-300生物組織冷凍包埋機，HS-2026型生物組織切片機，F(xiàn)A1004電子分析天平，DHG-9023A電熱恒溫鼓風干燥箱等。

1.3 方法

1.3.1 性狀鑒別 以市售及所采集標本的真?zhèn)纹匪幉牡男螒B(tài)、性狀特征和感官特征觀察等方法進行鑒別[6-9]。

1.3.2 顯微鑒定 樣品橫切面特征：將采集的真、偽品樣品作凈選處理后，用FAA液進行軟化及固定，再使用切片機對各真、偽品樣品進行切片，切片厚度20～30 μm，經(jīng)染色、定型及透化后裝片，在顯微鏡下觀察樣品的組織結(jié)構(gòu)，并照片記錄。樣品粉末特征鑒別：挑選無蟲蛀無霉變的藥材樣品烘箱干燥后粉碎，過120目篩[10-12]。分別對樣品粉末用醋酸甘油及水合氯醛進行裝片，在顯微鏡下觀察樣品粉末的各組織、細胞結(jié)構(gòu)[13]。分別用碘試液、稀鹽酸及墨汁加亞甲藍試液鑒定淀粉、草酸鈣結(jié)晶及黏液細胞等組織和物質(zhì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 外觀性狀鑒別

2.1.1 白及 假鱗莖呈不規(guī)則扁圓形或菱形，有2～4個爪狀分枝。長2～8 cm，厚0.5～2 cm。表面類白色至淺黃白色，有數(shù)圈荸薺環(huán)帶狀的同心環(huán)節(jié)和棕色點狀須根痕，可見突起的莖痕，其下有連接另一假鱗莖的痕跡。藥材質(zhì)地堅硬，不易折斷。斷面灰白色或淺白色，呈角質(zhì)狀，有較多的散在點狀維管束。氣微:味略苦，嚼之有黏性。

飲片為不規(guī)則的薄片，有的可見爪狀分枝，多數(shù)為2～3個分枝。長1～6 cm，厚0.1～0.3 cm。邊緣表面黃白色至灰褐色，有稀疏環(huán)節(jié)紋點，可見須根痕。切面類白色至黃白色，角質(zhì)樣，半透明，散生維管束小點。質(zhì)脆、味微苦，嚼之有黏性(圖1，表2)。

表1 不同來源真?zhèn)伟准暗蔫b定結(jié)果

注：以上樣品均由云南中醫(yī)藥大學(xué)楊竹雅副教授鑒定。

Note: The above samples were identified by the associate professor of Yang Zhuya, Yunnan University of Traditional Chinese Medicine.

2.1.2 混偽品 混偽品1：本種混偽品以蘭科獨蒜蘭屬植物云南獨蒜蘭的干燥假鱗莖及切片冒充。假鱗莖多呈圓錐形瓶頸狀，或不規(guī)則團塊，無分枝，直徑0.8～2.5 cm，高1.5～4 cm。頂端漸尖，尖端斷頭處呈盤狀。基部膨大且圓平，有1～2條環(huán)節(jié)，多偏向一側(cè)，中央凹陷，可見須根痕，有的連有頭年萎縮的假鱗莖。撞去外皮者表面黃白色，帶表皮者粉紅色或淺棕色，光滑，有不規(guī)則皺紋或皺縮。斷面淺黃色，角質(zhì)半透明。氣微，味辛、麻；略帶黏性。

飲片多為圓錐形、梨形或近圓形的薄片，無分枝。長1～3.5 cm，厚0.1～0.3 cm。切面淺白色至黃白色，可見須根痕；角質(zhì)樣，散生維管束小點。質(zhì)脆、易折斷；味微苦、嚼之略有黏性(圖2，表2)。

混偽品2：本種混偽品以百合科黃精屬植物滇黃精的干燥短細根莖及切片冒充。根狀莖多呈肥厚肉質(zhì)的結(jié)節(jié)塊狀，結(jié)節(jié)縊縮成不規(guī)則管狀、扁球狀或近連珠狀；有時呈不規(guī)則菱形。結(jié)節(jié)長可達10 cm 以上，膨大部分直徑2～7 cm，結(jié)節(jié)處直徑1～3 cm。表面淡黃色至黃棕色，木栓化，有不規(guī)則皺紋及須根痕，具環(huán)節(jié)。每一結(jié)節(jié)上具有側(cè)莖痕，呈圓盤狀，圓盤中部突出，周圍凹陷。質(zhì)硬而韌，不易折斷，斷面淡黃色至黃棕色，可見眾多深色維管束小點；氣微，味甜、麻；嚼之有黏性。須根細長且均勻，長可達30 cm以上。

飲片為不規(guī)則薄片或小段，無爪狀分枝，長2.5～7 cm，厚0.1～0.4 cm。切面類白色至黃白色，散生維管束小點；可見盤狀莖痕。厚的質(zhì)硬而韌，較薄的質(zhì)脆，略透明。氣香，味甜，嚼之有黏性(圖3，表2)。

a：新鮮藥材;b：干藥材及飲片a: Fresh herbs; b: Dry herbs and decoction pieces

a：新鮮藥材;b：干藥材及飲片a: Fresh herbs; b: Dry herbs and decoction pieces

2.2 顯微鑒別

2.2.1 橫切面特征 白及:①表皮細胞多為1列，細胞多呈類橢圓形或類方形，波狀排列，外被角質(zhì)層。②草酸鈣針晶成束存在于黏液細胞中，偶見散在針晶束。③黏液細胞較大，呈橢圓形或不規(guī)則圓形，散在于皮層中，多數(shù)內(nèi)含草酸鈣針晶束。④薄壁細胞大小不一，多呈類圓形、類橢圓形或不規(guī)則形，其內(nèi)可見淀粉粒。⑤維管束外韌型，散在分布，外側(cè)具環(huán)狀排列的木化纖維束環(huán)(圖4，表3)。

混偽品1云南獨蒜蘭:①表皮細胞1列，類長圓形或類長方形，外被角質(zhì)層。②草酸鈣針晶多呈束，散在或存在于黏液細胞中。③黏液細胞較小，類圓形或橢圓形。④基本薄壁細胞排列疏松。⑤維管束較多，外韌型，散在(圖5，表3)。

混偽品2滇黃精:①表皮細胞 1 列，細胞類圓形或長圓形，波狀排列，外被角質(zhì)層；皮層較寬，細胞排列疏松，有黏液細胞散在；內(nèi)皮層細胞 1 列，細胞凱氏點可見。②黏液細胞與草酸鈣針晶束多數(shù)甚大，散在分布于皮層中。③基本薄壁組織細胞大小不一，不規(guī)則形。④維管束散列，周木型，近內(nèi)皮層處維管束外韌型(圖6，表3)。

a：新鮮藥材;b：干藥材及飲片a: Fresh herbs; b: Dry herbs and decoction pieces

表2 3種藥材性狀特征比較

2.2.2 粉末特征 白及：①粉末淺白色至淺黃色，表皮細胞垂周壁略呈波狀彎曲，增厚且木化，可見孔溝。其平周壁具裂隙狀紋孔，外被角質(zhì)層。細胞斷面觀近方形或長方形，表面觀多呈不規(guī)則多邊形。下皮細胞不規(guī)則多邊形，細胞壁略增厚。②黏液細胞較多，類圓形或類橢圓形；細胞多數(shù)較大，直徑約262～385 μm，多數(shù)細胞內(nèi)含成束的草酸鈣針晶。③草酸鈣針晶散在或成束分布于黏液細胞中；長10～112 μm。④螺紋及梯紋導(dǎo)管較多，可見網(wǎng)紋導(dǎo)管；直徑13～48 μm。⑤纖維多呈長梭形，具裂縫狀或人字形紋孔，壁木化，直徑22～67 μm。⑥單粒淀粉粒類橢圓形或類圓形，臍點多呈裂隙狀，少數(shù)為點狀；直徑 4～22 μm。復(fù)粒多為2 分粒，少數(shù)為3～4分粒，可見團塊狀糊化淀粉粒(圖7，表3)。

1：表皮細胞； 2：黏液細胞； 3：基本薄壁細胞； 4：維管束1: Epidermal cells;2: Mucous cells; 3: Basic parenchyma cells; 4: Vascular bundle

混偽品1云南獨蒜蘭:①粉末淺白色至淡黃色，表皮細胞多呈不規(guī)則形，垂周壁略增厚、木化、略波狀彎曲，孔溝清晰。②草酸鈣針晶散在，或存在于黏液細胞中，針晶較短，長35～88 μm。③黏液細胞較小，類圓形或橢圓形，直徑195～268 μm，有的內(nèi)含草酸鈣針晶束。④導(dǎo)管主要為梯紋導(dǎo)管和具緣紋孔導(dǎo)管，可見螺紋導(dǎo)管，直徑8～35 μm。⑤纖維多成束，壁木化，具人字形或扁橢圓形紋孔，直徑10～40 μm；有的含硅質(zhì)塊，于纖維周圍排成縱行。⑥淀粉粒單粒類圓形或橢圓形，直徑3～7 μm，臍點點狀、飛鳥狀；復(fù)粒多由2～3分粒組成，有的復(fù)粒多達6～8分粒；糊化淀粉粒成團塊，無色(圖8，表3)。

1：表皮細胞； 2：草酸鈣針晶； 3：黏液細胞； 4：基本薄壁組織細胞； 5：維管束1: Epidermal cells; 2: Needle-like calcium oxalate crystals; 3: Mucous cells; 4: Basic parenchyma cells; 5:Vascular bundle

1：表皮細胞； 2：草酸鈣針晶； 3：黏液細胞； 4：內(nèi)皮層細胞； 5：維管束1: Epidermal cells; 2: Needle-like calcium oxalate crystals; 3: Mucous cells; 4: Endothelial cells; 5:Vascular bundle

1：表皮細胞；2：草酸鈣針晶；3：黏液細胞；4：導(dǎo)管； 5：纖維；6：淀粉粒1: Epidermal cells; 2: Needle-like calcium oxalate crystals; 3: Mucous cells; 4:Vessels; 5: Fiber; 6: Starch grains

1：表皮細胞； 2：草酸鈣針晶； 3：纖維及硅質(zhì)塊；4：導(dǎo)管； 5：黏液細胞； 6：淀粉粒1: Epidermal cells; 2: Needle-like calcium oxalate crystals; 3: Fiber and siliceous block; 4:Vessels; 5:Mucous cells; 6: Starch grains

1：表皮細胞；2：草酸鈣針晶；3：黏液細胞；4：導(dǎo)管； 5：淀粉粒1:Epidermal cells; 2:Needle-like calcium oxalate crystals; 3:Mucous cells; 4:Vessels; 5:Starch grains

表3 3種藥材的顯微特征比較

混偽品2滇黃精：①粉末灰白色，表皮細胞表面觀性狀不規(guī)則多角形，排列緊密，細胞壁連珠狀增厚；內(nèi)皮層細胞類長方形、類方形，壁薄，微波狀彎曲。②草酸鈣針晶束甚大、甚長，散在或存在于黏液細胞中，長 60～210 μm。③黏液細胞較巨大，多呈類橢圓形或不規(guī)則形，直徑約 205～433 μm，內(nèi)含草酸鈣針晶。④梯紋及螺紋導(dǎo)管呈多數(shù)，少數(shù)為網(wǎng)紋導(dǎo)管，直徑10～67 μm。⑤淀粉粒多為單粒類，圓形或類圓形，直徑6～17 μm，臍點點狀、裂隙狀；復(fù)粒多由2～3分粒組成，糊化淀粉粒成團塊，無色(圖9，表3)。

3 討 論

通對滇產(chǎn)市售白及與其2種混偽品進行對比鑒別，白及與混偽品在性狀和顯微特征上的主要區(qū)別：①藥材形態(tài)及性狀方面，從外觀形狀、顏色、質(zhì)地和有無黏性、爪狀分支、同心環(huán)紋等形態(tài)指標進行區(qū)別。②顯微特征方面，從表皮細胞結(jié)構(gòu)特點、針晶束長短、黏液細胞及淀粉粒大小、導(dǎo)管類型及大小、纖維的有無以及維管束類型等特征進行區(qū)別。利用以上藥材形態(tài)及顯微特征的明顯區(qū)別，可以將白及與混偽品進行鑒別。

由于白及藥用及工業(yè)價值均較高, 并且目前商品白及市場價格穩(wěn)定，白及的藥用價值和工業(yè)價值得到持續(xù)開發(fā)。因此，市場上人為摻假嚴重，消費者通常難于識別。目前，關(guān)于白及混偽品的研究報道較多[3-4]，主要是對市售混偽品與正品進行了相關(guān)對比鑒別，指出了相關(guān)混偽品與正品的鑒別要點，但多數(shù)沒有明確混偽品的基源，其中一些混偽品的出現(xiàn)具有一定的偶然性[12]。本研究將白及與其偽品個體及飲片等藥材形態(tài)進行了一一比對鑒別，明確了市場上出現(xiàn)的幾種常見偽品的基源。云南獨蒜蘭及滇黃精均為它種中藥，研究結(jié)果不僅可以提供真?zhèn)纹返蔫b別依據(jù)，保證藥材質(zhì)量及安全有效；同時對保護中藥資源也具有重要的實際意義。后期筆者將會繼續(xù)進行調(diào)查研究，以期減少白及藥材市場中偽品的混入。

4 結(jié) 論

通過性狀與顯微鑒定研究，高清了白及與其常見偽品在藥材形態(tài)、飲片性狀及顯微特征等方面的區(qū)別和差異，明確了2種混偽品基源分別為云南獨蒜蘭和滇黃精。利用本套方法能有效的將白及與普遍的混偽品藥材、飲片進行鑒別。實驗結(jié)果可為當前中藥材市場中白及的真?zhèn)舞b別提供科學(xué)的參考依據(jù)；也為相關(guān)藥材的品質(zhì)評價、質(zhì)量標準的研究和建立提供了科學(xué)基礎(chǔ)。