血小板抗體產(chǎn)生的影響因素分析

馮紅梅，蔡祥勝，楊兆收，鐘惠英，湯穎思，王若帆，林翠瓊，郭煜

(廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院輸血科，廣東 廣州 510080)

輸注血小板作為臨床治療和預(yù)防血小板減少或血小板功能缺陷所致的出血的重要支持手段，有不可替代的臨床作用[1]。但是在血小板輸注的過程中，反復(fù)的輸血也可能埋下一定的安全隱患，比如可能導(dǎo)致患者形成血小板抗體，對輸注的效果產(chǎn)生不良影響，進而影響治療的效果[2]。血小板抗體主要包括白細胞(HLA)抗體和血小板特異性抗體(HPA)。為了預(yù)防血小板輸注無效，保證患者的輸血安全，節(jié)約寶貴的血液資源，指導(dǎo)臨床合理用血，本文采用固相法對本院2018年8月—2019年5月收住的有過輸血史的患者和產(chǎn)婦進行血小板抗體檢測，以分析影響血小板抗體產(chǎn)生的主要因素，情況如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2018年8月—2019年5月在我院接受輸血治療的934例患者進行研究，其中待產(chǎn)婦190例，有輸血史的患者744例。有輸血史的患者中，男393例，女351例；年齡1～94歲；其中血液病181例，腫瘤患者223例，急性出血74例，腎病5期56例，其他疾病210例。無輸血史妊娠史的對照組22例。

1.2 檢測試劑

固體凝集法血小板抗體檢測試劑盒(MASPAT kit)由北京漢泰旭和生物科技有限公司提供(注冊證編號：國械注進 20153401537，生產(chǎn)批號：8000255611)。

1.3 實驗方法

1.3.1 準(zhǔn)備工作 使用前將所有試劑恢復(fù)至室溫(18～25 ℃)，配制洗滌液(用蒸餾水1∶24稀釋)，標(biāo)本離心(1 500g，10 min)。

1.3.2 操作步驟 ① 標(biāo)記反應(yīng)板，每孔加入50 μL篩選血小板抗原，輕搖反應(yīng)板10 s后，用平板離心機650 r/min離心5 min，甩干后洗滌3次；②每孔加低離子溶液2滴(100 μL)，再分別加待檢者樣本、陽性對照及陰性對照各1滴(50 μL)，輕輕振蕩后封孔，放置37 ℃水浴孵育30 min，甩干后洗滌5次；③每孔加入1滴MASPAT抗IgG試劑后，再加MASPAT指示細胞1滴，輕搖反應(yīng)板10 s，平板離心機200g離心5 min后判讀結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定

① 陽性或弱陽性結(jié)果：指示細胞散開在反應(yīng)孔底部平鋪為陽性；若指示細胞只結(jié)合到部分孔底，并且結(jié)合的區(qū)域比陰性對照大為弱陽性。表明待檢者血清或血漿中含有血小板抗體。 ②陰性結(jié)果：指示細胞在反應(yīng)孔底部中央形成細胞聚集。表明待檢者血清或血漿中不含血小板抗體。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0 進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以頻率及百分率表示，組間比較采用卡方檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 被檢者總陽性率

934例被檢者血小板抗體陽性有141例，陽性率為15.10%(141/934)。

2.2 不同病種間血小板抗體陽性率比較

按患者臨床診斷分組，產(chǎn)婦組陽性例數(shù)37例，陽性率19.47%(37/190)；血液病組陽性例數(shù)31例，陽性率為17.13%(31/181)；腫瘤病組陽性例數(shù)37例，陽性率為16.59%(37/223)；急性出血病組陽性例數(shù)8例，陽性率10.81%(8/74)；腎病5期病組陽性例數(shù)9例，陽性率16.07%(9/56)；其他病組陽性例數(shù)19例，陽性率9.05%(19/210)；對照組陽性例數(shù)1例，陽性率為4.55%(1/22)。產(chǎn)婦組、血液病組、腫瘤病組與其他病組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1和表2。

2.3 男女間血小板抗體陽性率比較

男性患者血小板抗體陽性率13.49%(53/393)、女性患者陽性率14.53%(51/351)，各組男女間陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

2.4 有輸血史患者不同年齡段組間的血小板抗體陽性率比較

744例有輸血史的患者按年齡分組，不同年齡段組間的血小板抗體陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表1 不同病種間的血小板抗體陽性率比較

Table1Comparison of platelet antibody positive rates among different diseases

組別N陽性數(shù)/例 陽性率/% 對照組2214.55 產(chǎn)婦組1903719.47 血液病組1813117.13 腫瘤病組2143717.29 急性出血病組74810.81 慢性腎病組56916.07 其他病組210199.05 χ2 值13.299 P值0.039<0.05

表2 不同病種兩組間的血小板抗體陽性率比較的P值Table 2 Comparison of positive rate of platelet antibody between two groups of different diseases

兩組間比較：*P<0.05。

表3 各組男女間血小板抗體陽性率比較Table 3 Comparison of the positive rate of platelet antibody between men and women in each group

表4 744例有輸血史患者不同年齡段組間的血小板抗體陽性率比較

Table4Comparison of platelet antibody positive rates among 744 patients with transfusion history in different age groups

組別N陽性數(shù)/例 陽性率/% 1-20歲1101614.55 21-50歲2113818.02 51-80歲3113812.22 81-100歲1121210. 71 χ2值 5.634 P值0.131>0.05

2.5 不同輸血次數(shù)組間的血小板抗體陽性率比較

744例有輸血史的患者按輸血次數(shù)分組，輸血≥5次的組別陽性病例56例，陽性率20.97%(56/267)，2≤輸血≤4次的組別陽性病例23例，陽性率13.29%(23/173)，輸血1次的組別陽性病例25例，陽性率8.22%(25/304)。輸血≥5次的組別陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表5 不同輸血次數(shù)組間的血小板抗體陽性率的多組間比較

Table5Multigroup comparison of platelet antibody positive rates among different transfusion frequency groups

組別N陽性數(shù)/例 陽性率/% 對照組2214.55 輸血1次304258.22 2≤輸血≤4次1732313.29 輸血≥5次2675620.97?# χ2 值21.233 P值﹤0.001

與輸血1次組比較：*P<0.001；與2≤輸血≤4次組比較：

#P<0.05。

3 討論

血小板血型抗原主要分為兩類：一類是為非特異性抗原，與ABO血型系統(tǒng)和HLA有關(guān)，另一類是血小板特異的抗原(HPA)[3]。血小板血型抗原不合是導(dǎo)致機體產(chǎn)生血小板抗體的主要原因，機體被HPA或HLA抗原免疫獲得血小板抗體，這種免疫可由輸血、妊娠而獲得[4-5]。

徐學(xué)新[6]認為血小板抗體的產(chǎn)生與妊娠、輸血與移植等帶入患者體內(nèi)的同種抗原提呈細胞(APCs)有關(guān)。本文研究顯示，輸血次數(shù)越多，產(chǎn)生血小板抗體的機會就越高，輸血≥5次的組別與輸血小于5次的組別比較抗體陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義；產(chǎn)婦、經(jīng)常需要反復(fù)輸血治療的病種比如血液病、腫瘤患者的血小板抗體陽性率明顯高于其他病種，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；而有輸血史的病例中不同性別、不同年齡之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，說明多次反復(fù)輸血和妊娠是產(chǎn)生血小板抗體的主要因素。與杜振軍[7]報道的一致，血小板抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫因素產(chǎn)生。

血小板抗體引起的臨床問題和疾病越來越受到關(guān)注。本研究所檢測的血小板抗體包括了HLA和/或HPA抗體。引起血小板輸注無效的抗體中HLA抗體占90%，HLA+HPA抗體占8%，HPA抗體占2%。HLA抗原在人群中高度多態(tài)性，輸入異體血小板或者帶有白細胞的其他血液制品均可能誘發(fā)同種免疫，導(dǎo)致血小板抗體的產(chǎn)生。在臨床上，有些疾病比如血液病和腫瘤，必須要反復(fù)輸注紅細胞或/和血小板作為支持治療的重要手段，而輸血是一種血液成分的移植，如果供受者血型抗原不合，容易刺激機體的免疫系統(tǒng)引起反應(yīng)，輸血后患者同種異型白細胞與血小板抗原將會對機體產(chǎn)生刺激，使其產(chǎn)生抗體，血小板抗體陽性率也就增大[8]?；颊唧w內(nèi)產(chǎn)生血小板抗體后，對患者產(chǎn)生很大的困擾和危害，造成血小板輸注無效，影響到患者的治療效果，如果造成大出血，甚至危及生命。在年齡分組中，雖然各組之間無統(tǒng)計學(xué)上的差異，但21～50歲的陽性率18.02%明顯比其他組高，可能與這個階段機體的免疫系統(tǒng)功能處于最佳狀態(tài)，更易發(fā)揮作用有關(guān)。

血小板抗體與妊娠密切相關(guān)，其產(chǎn)生機制可能是由于胎母血小板抗原不相容引起，即胎兒血小板表面帶有特異的父源性抗原成分，這些抗原可以通過胎盤進人母體循環(huán)使母體致敏，從而產(chǎn)生特異性的血小板同種抗體。妊娠婦女的血小板抗體危害也很大，既可以引起新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAIT)；如果作為獻血者，其血液中的血小板抗體也會破壞受血者體內(nèi)的血小板，引起血小板輸注無效、輸血后紫癜和非溶血性發(fā)熱反應(yīng)等輸血不良反應(yīng)[9]，導(dǎo)致寶貴的血液資源浪費，給患者造成傷害，甚至危害患者的生命安全。免疫性血小板減少性紫癜(ITP)是孕期比較常見的合并癥，患該病的孕婦因其體內(nèi)的血小板抗體可通過母嬰垂直傳播進入新生兒血液循環(huán)導(dǎo)致新生兒血小板減少，發(fā)病較急，如果缺乏有效的診斷和治療會導(dǎo)致嬰兒血小板迅速減少，造成嬰兒出現(xiàn)出血傾向，甚至出現(xiàn)嬰兒顱內(nèi)出血、死亡等嚴重并發(fā)癥[10]。

由于血小板抗體在有妊娠史女性獻血者中陽性率比較高，國外也很重視這個問題，在日本、加拿大等一些歐美經(jīng)濟發(fā)達國家已經(jīng)禁止女性有妊娠史獻血者捐獻機采血小板，而其所獻全血的血漿成分不可供應(yīng)臨床，僅供制作生物制品，但我國血小板不能滿足臨床需求是常態(tài)，剔除有妊娠史的婦女獻血不現(xiàn)實，為了保證臨床用血安全，對有妊娠史的獻血婦女進行血小板抗體篩查很有必要。

綜上所述，為了輸血安全，減少無效輸血，以免浪費寶貴的血液資源，建議臨床醫(yī)生要嚴格控制輸血指征，能不輸盡量不輸血。對需要反復(fù)輸血的患者最好進行濾除白細胞或輻照處理血液后再輸注；對有過輸血史的患者常規(guī)進行血小板抗體篩選，對血小板抗體篩選陽性或陰性但輸注無效的患者進行配型；對有妊娠史的獻血婦女進行血小板抗體篩查，以免將含有抗體的血液成分輸給患者。