羊肚菌對(duì)體力疲勞小鼠生理學(xué)功效恢復(fù)方法

徐景鋒

（東華理工大學(xué) 體育學(xué)院，江西 南昌 330017）

軀體性疲勞又稱體力疲勞，當(dāng)機(jī)體勞動(dòng)時(shí)間較長(zhǎng)、體力勞動(dòng)過程較復(fù)雜時(shí)，體內(nèi)積累大量代謝物質(zhì)，使機(jī)體組織細(xì)胞和神經(jīng)系統(tǒng)受到刺激，出現(xiàn)疲憊感。從生理學(xué)功效角度恢復(fù)機(jī)體體力疲勞，就要減少感覺疲勞[1]。

野生食用菌是一種藥食兼用真菌，其中羊肚菌具有較為豐富的營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值，包括抗輻射、抗衰老、抗菌、抗病毒和增強(qiáng)機(jī)體免疫力等，被廣泛應(yīng)用在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中[2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，羊肚菌中具有較多功能成分，例如糖類、核苷類、生物堿類和呋喃衍生物等成分，這些成分能夠改善機(jī)體免疫力，促進(jìn)機(jī)體健康[3]。通過研究羊肚菌對(duì)體力疲勞小鼠生理學(xué)功效恢復(fù)方法，為野生食用菌的進(jìn)一步開發(fā)利用提供物質(zhì)保障。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 原料

在貴州偏遠(yuǎn)山區(qū)中采取少量羊肚菌，烘干粉碎，經(jīng)過熱水抽提，在羊肚菌含量2000 mg·kg-1、時(shí)間15 min的環(huán)境下進(jìn)行離心操作。收集羊肚菌上清液，繼續(xù)熬煮剩余羊肚菌液體，不斷提取羊肚菌上清液，合并一起，冷卻。4倍體積預(yù)冷處理95%乙醇，加入羊肚菌上清液中，經(jīng)過24 h離心處理，除去羊肚菌液體中乙醇，對(duì)羊肚菌液體進(jìn)行干燥處理。配制不同劑量的羊肚菌液體，將獲取的羊肚菌液體消毒殺菌、備用[4]。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

在上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購(gòu)買雄性健康小鼠，身體重量在15 g～17 g，可自由攝食飲水，將購(gòu)買的小鼠分成試驗(yàn)組和對(duì)照組，試驗(yàn)組按照羊肚菌劑量大小分為多組，包括400 mg·kg-1、800 mg·kg-1等，每組小鼠數(shù)量為10只。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)前準(zhǔn)備

先訓(xùn)練小鼠2次，使小鼠處于疲憊狀態(tài)，讓小鼠正式游泳，最后1次訓(xùn)練時(shí)喂給小鼠羊肚菌液體，小鼠尾部放置5%體重鉛皮，30 min后，將小鼠放置到購(gòu)買的游泳箱中，此時(shí)游泳箱的水溫應(yīng)在25℃左右，上下浮動(dòng)不超過0.5℃，游泳箱的水深為30 cm，觀察記錄小鼠游泳狀態(tài)[5]。

1.2.2 肝糖原和肌糖原測(cè)定

主要采用蒽酮法測(cè)定小鼠體內(nèi)肝糖原、肌糖原含量，如上文所說訓(xùn)練后，將小鼠解剖取出肝臟，用生理鹽水漂洗干凈，通過濾紙吸取小鼠肝臟表面水分，吸干后，稱量250 mg肝組織，將肝臟搗碎勻漿處理[6]，倒入離心管里，以3500 r·min-1的速度離心處理15 min后，提取450 μ L上清液，采用濃度為95%的乙醇5 mL加入到上清液中，充分混合均勻兩種液體，直至兩種液體間沒有明顯分層，將無明顯分層的液體放置到冰箱中，在5℃的環(huán)境下靜置1 d，第2天將液體以3500 r·min-1的速度離心處理15 min，濾去上清液，將試管倒置晾干，靜置約10 min，肝糖原中加入1 mL純化水。選用另一個(gè)試管，加入100μL純化水，將該試管當(dāng)成試劑空白，在兩個(gè)試管中分別添加10 mL蒽酮試劑，將加入蒽酮試劑后的試管煮沸，大約為15 min，煮沸后將試管取出，冷卻試管中液體溫度到室溫。通過分光光度計(jì)采用640 nm波長(zhǎng)比色測(cè)定試驗(yàn)的小鼠肝糖原和肌糖原。重復(fù)上述步驟，從小鼠肌肉中獲取肌糖原，肝糖原和肌糖原計(jì)算公式為：

式中：YG0為肝糖原樣品管吸光度；BG0為肝糖原標(biāo)準(zhǔn)管吸光度；H為肝組織樣品重量；D為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度；V1為肝糖原提取液體積；V2為肝糖原測(cè)定液體積；V3為葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液體積。YG1為肌糖原樣品管吸光度；BG1為肌糖原標(biāo)準(zhǔn)管吸光度；h為肌肉組織樣品重量；v1為肌糖原提取液體積；v2為原測(cè)定液體積。

1.2.3 血乳酸測(cè)定

如上文所說訓(xùn)練后，在小鼠眼眶處采血20 μ L放入試管中，在試管中滴入破膜液45μ L，振蕩試管，使血液和破膜液混合均勻。將小鼠放置到游泳箱中，讓小鼠在游泳箱中游泳10 min，游泳箱溫度選取為30℃，溫度上下波動(dòng)范圍不超過0.5℃，對(duì)小鼠進(jìn)行采血，采血容量為20 μ L，在試管中滴入破膜液45 μ L，震蕩試管，使血液和破膜液混合均勻。讓小鼠休息20 min后，對(duì)小鼠進(jìn)行采血，采血容量為20 μ L，在試管中滴入破膜液45 μ L，振蕩試管，使血液和破膜液混合均勻。通過手持式乳酸儀檢測(cè)樣品中的乳酸值，血乳酸值是根據(jù)乳酸值乘以3得來的，小鼠內(nèi)血乳酸變化值公式為：

式中：S為血乳酸曲線面積；AX為安靜血乳酸值；YX0為小鼠無運(yùn)動(dòng)狀況下的血乳酸值；YX1為小鼠運(yùn)動(dòng)20 min后的血乳酸值。

統(tǒng)計(jì)所測(cè)量的數(shù)據(jù)，如果試驗(yàn)組小鼠血乳酸曲線面積比對(duì)照組小鼠血乳酸曲線面積小，且數(shù)據(jù)間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，則認(rèn)為羊肚菌液體能抑制小鼠運(yùn)動(dòng)后小鼠體內(nèi)血乳酸生成，羊肚菌具有恢復(fù)體力疲勞小鼠體力的生理學(xué)功效。

2 結(jié)果

2.1 測(cè)定小鼠肝糖原與羊肚菌劑量間的關(guān)系

運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體的重要供能物質(zhì)是肝糖原，通過檢測(cè)機(jī)體中肝糖原含量可知小鼠疲勞程度。檢測(cè)不同劑量羊肚菌對(duì)小鼠肝糖原含量的影響。檢測(cè)結(jié)果如表1所示。

表1 不同劑量羊肚菌對(duì)小鼠肝糖原、肌糖原含量的影響Tab.1 Effect of different doses of Morchella on hepatic glycogen and muscle glycogen content in mice

表1看出，對(duì)照組的肝糖原含量為（19.21±5.12）mg·g-1，肌糖原含量為 （0.58±0.07） mg·g-1。隨著羊肚菌劑量的增加，肝糖原和肌糖原含量逐漸增加，當(dāng)羊肚菌劑量為1600 mg·g-1時(shí)肝糖原和肌糖原含量最多，為（34.98±9.51） mg·g-1和（0.96±0.23） mg·g-1。當(dāng)小鼠處于相同運(yùn)動(dòng)狀況下，攝入羊肚菌的小鼠體內(nèi)的肝糖原和肌糖原儲(chǔ)備含量增加，可增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)能力，降低小鼠疲勞程度。

2.2 測(cè)定小鼠血乳酸與羊肚菌劑量間的關(guān)系

羊肚菌對(duì)小鼠血乳酸測(cè)定結(jié)果，見表2。

表2 不同劑量羊肚菌對(duì)小鼠血乳酸影響Tab.2 Effect of different doses of morel on blood lactate in mice

從表2可以看出，與對(duì)照組小鼠血乳酸含量相比，在喂食小鼠不同劑量羊肚菌情況下，小鼠內(nèi)部血乳酸含量明顯降低，且隨著羊肚菌劑量的不斷增加，血乳酸曲線面積逐漸減少，當(dāng)羊肚菌劑量為1600 mg·kg-1時(shí)，小鼠體內(nèi)血乳酸曲線面積最低，為（94.56±21.68） mm2。綜上所述，不同劑量羊肚菌可有效減少機(jī)體內(nèi)部能量的分解代謝，肌肉的運(yùn)動(dòng)能力得以提升，降低小鼠體力疲勞程度，其中較高劑量的羊肚菌恢復(fù)小鼠體力效果較好。