養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)的影響

楊樹(shù)元 竇艷君 陳書(shū)奇 孫學(xué)亮

摘?要：為了解養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)的影響，設(shè)置三個(gè)養(yǎng)殖密度梯度組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：低密度組（5.04 kg/m3）、中密度組（10.12 kg/m3）、高密度組（15.35 kg/m3），每組設(shè)3個(gè)平行，實(shí)驗(yàn)魚(yú)投喂56 d后測(cè)定其生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)。結(jié)果表明，中密度組鸚鵡魚(yú)末體重顯著高于高密度組（P<0.05），與低密度組無(wú)顯著差異（P>0.05）;低密度組鸚鵡魚(yú)增重率顯著高于中密度和高密度組（P<0.05）;低密度組鸚鵡魚(yú)血清和肝臟中SOD、GSH-PX、GPT和GOT顯著高于其他組（P<0.05）;中密度組鸚鵡魚(yú)血清和肝臟中的MDA顯著高于高密度組（P<0.05），與低密度組無(wú)顯著差異（P>0.05）。由此表明，當(dāng)養(yǎng)殖密度達(dá)到較高密度（15.35±0.25）kg/m3時(shí)，會(huì)顯著影響鸚鵡魚(yú)的健康，產(chǎn)生較為嚴(yán)重的負(fù)面影響。

關(guān)鍵詞：鸚鵡魚(yú);養(yǎng)殖密度;生長(zhǎng)指標(biāo);生理生化指標(biāo)

鸚鵡魚(yú)是很受大眾喜愛(ài)的一種熱帶觀賞魚(yú)，其體色絢麗多彩，嘴巴的形狀很像鸚鵡的喙，故而得名。鸚鵡魚(yú)是由母本紅頭麗體魚(yú)（Vieja synspila）與父本橘色雙冠麗魚(yú)（Amphilophus citrinellus）繁殖所得的屬間雜交種，身體為紅色，也被稱(chēng)為血鸚鵡[1]。

有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，養(yǎng)殖密度是一個(gè)影響?zhàn)B殖魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)和發(fā)育的重要因素[2]。高密度養(yǎng)殖是工廠化流水養(yǎng)殖的主要特點(diǎn)之一，鑒于工廠化養(yǎng)殖系統(tǒng)中水溫、溶解氧、水質(zhì)等環(huán)境因子具有較強(qiáng)的可控性，因此，如何在養(yǎng)殖過(guò)程中選擇合適的養(yǎng)殖密度顯得尤為重要。不適宜的養(yǎng)殖密度對(duì)魚(yú)類(lèi)是一種慢性脅迫，影響?hù)~(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)、攝食、免疫等指標(biāo)[3-4]。養(yǎng)殖密度已被普遍認(rèn)為是集約化養(yǎng)殖過(guò)程中魚(yú)類(lèi)潛在的慢性應(yīng)激源，其可對(duì)魚(yú)類(lèi)的生理狀態(tài)、健康狀況以及行為產(chǎn)生負(fù)面影響。養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究不同養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)及生理生化指標(biāo)的影響，旨在為鸚鵡魚(yú)的養(yǎng)殖提供參考。

1?材料與方法

1.1?實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1?實(shí)驗(yàn)魚(yú)?實(shí)驗(yàn)用鸚鵡魚(yú)購(gòu)自天津市金海馬水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，平均體長(zhǎng)為（9.38±0.28）cm，平均體重為（60.80±4.26）g。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前在天津農(nóng)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室的臨時(shí)水箱中暫養(yǎng)7 d適應(yīng)環(huán)境，這期間如有魚(yú)不適應(yīng)環(huán)境死亡或者生病則及時(shí)撈出換上新魚(yú)。在實(shí)驗(yàn)期間每天都需要換水，換水的量大概是三分之一的水缸便可。

1.1.2?實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備?托盤(pán)、剪刀、鑷子、電子天秤（FA2104）、注射器、離心機(jī)（Thermo-40951012）、離心管、移液槍、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心管架、燒瓶、漩渦混勻器、電爐、冰箱、水浴鍋、超聲波清洗器等。

1.1.3?實(shí)驗(yàn)試劑?考馬斯亮藍(lán)貯備液;蛋白標(biāo)準(zhǔn)品;谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）測(cè)試盒;丙二醛（MDA）測(cè)試盒;超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒;過(guò)氧化氫酶（CAT）測(cè)試盒;總抗氧化能力（T-AOC）試劑盒;谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）測(cè)試盒;谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）測(cè)試盒;冰醋酸;雙蒸水;無(wú)水乙醇等。

1.2?實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1?實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)?設(shè)置三個(gè)養(yǎng)殖密度梯度組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每組設(shè)3個(gè)平行：低密度組A1、A2、A3每缸10條魚(yú);中密度組B1、B2、B3每缸20條魚(yú);高密度組C1、C2、C3每缸40條魚(yú)。養(yǎng)殖密度分別為：低密度組（5.04±0.21 ）kg/m3 、中密度組（10.12±0.33）kg/m3、高密度組 （15.35±0.25 ）kg/m3。

1.2.2?血清采集?準(zhǔn)備好5 mL離心管接取血液，血液約占2/3管，事先在離心管中加入抗凝劑，以防血液凝固，血液采集好后，置于4 ℃冰箱中進(jìn)行短期保存，盡快進(jìn)行血液離心，4 000 r/min，離心20 min的條件下，溫度為4 ℃，吸取上清液后放置在管內(nèi)，貼上標(biāo)簽放在-80 ℃冰箱保存。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始之前3～4 h將血液上清液從-80 ℃條件下取出置于4 ℃的水浴中，以防止樣品變質(zhì)。

1.2.3?生長(zhǎng)指標(biāo)的測(cè)定

上式中的W1，W2為鸚鵡魚(yú)的初始體重和末體重;L1，L2為鸚鵡魚(yú)的初始體長(zhǎng)和終末體長(zhǎng);n1，n2分別為實(shí)驗(yàn)初始尾數(shù)和終末尾數(shù);d為飼養(yǎng)天數(shù);W為鸚鵡魚(yú)終末肝臟重量;F為鸚鵡魚(yú)的總投餌量。

1.2.4?生理指標(biāo)的測(cè)定?本實(shí)驗(yàn)共測(cè)定8個(gè)指標(biāo)：SOD、MDA、CAT、T-AOC、GSH-PX、總蛋白含量、GPT及GOT。實(shí)驗(yàn)所用的試劑盒均購(gòu)買(mǎi)自南京建成生物工程研究所。

1.2.5?數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析?實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS 18.0軟件中的獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2?結(jié)果與分析

2.1?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表1，養(yǎng)殖56 d后，中密度組終末體重顯著高于高密度組（P<0.05），與低密度組無(wú)顯著差異（P>0.05）;低密度組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著高于中密度組和高密度組（P<0.05）;其他生長(zhǎng)指標(biāo)無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)抗氧化指標(biāo)的影響

2.2.1?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的影響?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)的影響見(jiàn)表2，養(yǎng)殖56 d后，低密度組血清中SOD、GSH-PX顯著高于中密度組和高密度組（P<0.05）;中密度組CAT顯著高于高密度組（P<0.05），與低密度組無(wú)顯著差異（P>0.05）;其他各組的MDA、T-AOC無(wú)顯著差異（P>0.05）。

2.2.2?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)肝臟抗氧化指標(biāo)的影響見(jiàn)表3，養(yǎng)殖56 d后，低密度組肝臟中SOD、GSH-PX顯著高于中密度組和高密度組（P<0.05）;中密度組CAT顯著高于高密度組（P<0.05），與低密度組無(wú)顯著差異（P>0.05）;各組肝臟中MDA和T-AOC無(wú)顯著差異（P>0.05）

2.3?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)肝功能的影響

養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)肝功能的影響見(jiàn)表4，養(yǎng)殖56 d后，低密度組的GPT和GOT顯著高于中密度組和高密度組（P<0.05）。

3?討論

3.1?養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)指標(biāo)的影響

通常隨著養(yǎng)殖密度的增加，魚(yú)類(lèi)的生存空間，食物來(lái)源受到限制，種內(nèi)競(jìng)爭(zhēng)加劇，水體理化因子發(fā)生改變，水質(zhì)惡化，從而引起魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)率、存活率及對(duì)食物轉(zhuǎn)化利用效率等的降低，密度的增加會(huì)對(duì)魚(yú)類(lèi)個(gè)體的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用[5]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖56 d后，各處理之間存活率無(wú)顯著差異，所設(shè)置的養(yǎng)殖密度尚未對(duì)鸚鵡魚(yú)的死亡率造成負(fù)面影響。中密度組末體重顯著高于高密度組，低密度組的增重率顯著高于中高密度組。說(shuō)明密度在（10.12±0.33）kg/m3時(shí)已經(jīng)對(duì)鸚鵡魚(yú)的生長(zhǎng)產(chǎn)生了影響，之后隨著養(yǎng)殖密度越來(lái)越大，特定生長(zhǎng)率越低，鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)越緩慢。本實(shí)驗(yàn)中，養(yǎng)殖水質(zhì)一直保持較為良好的狀態(tài)，說(shuō)明影響鸚鵡魚(yú)生長(zhǎng)性能的不是水質(zhì)指標(biāo)。在較高的密度條件下，鸚鵡魚(yú)攝食、活動(dòng)空間受限制，競(jìng)爭(zhēng)加劇，從而產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)，使魚(yú)體的代謝等受到了影響，進(jìn)而影響?hù)~(yú)體的生長(zhǎng)。

3.2?不同養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)抗氧化指標(biāo)的影響

3.2.1?不同養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)血液和肝臟中SOD的影響?生物在受到逆境的肋迫時(shí)，就能促使機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的內(nèi)線粒體、微粒體和胞漿的酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)反應(yīng)，通過(guò)還原產(chǎn)生活性氧和氧自由基，打破了生物體內(nèi)的活性氧代謝的平衡，如不及時(shí)消除就會(huì)造成生物體活性氧傷害[6]。SOD（超氧化物歧化酶）是一種源于生命體的活性物質(zhì)，能消除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)[7]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)殖56 d后，低密度組的SOD活性在血液和肝臟中均顯著高于中密度組和高密度組。說(shuō)明養(yǎng)殖密度對(duì)SOD酶有嚴(yán)重影響，養(yǎng)殖密度越大，SOD酶活性越低。說(shuō)明養(yǎng)殖密度的增大會(huì)降低鸚鵡魚(yú)的抗氧化酶活力，高密度養(yǎng)殖會(huì)加強(qiáng)機(jī)體氧化應(yīng)激的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)也側(cè)面體現(xiàn)了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的加強(qiáng)。因此，機(jī)體對(duì)高密度養(yǎng)殖表現(xiàn)的不適性，其結(jié)果是抗氧化酶活性的降低。

3.2.2?不同養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)血液和肝臟中CAT的影響?本實(shí)驗(yàn)血液和肝臟中，低密度組和中密度組的CAT活性顯著高于高密度組，而低密度組和中密度組之間無(wú)顯著差異，說(shuō)明CAT活性在中密度開(kāi)始顯著受養(yǎng)殖密度的影響，養(yǎng)殖密度越大，CAT活性越小。CAT活力的下降，有可能提高機(jī)體氧化應(yīng)激的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)也側(cè)面體現(xiàn)了脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的升高。

3.2.3?不同養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)血液和肝臟中GSH的影響?GSH屬于一種低分子量的抗氧化劑，體內(nèi)GSH量的多少是衡量機(jī)體抗過(guò)氧化能力大小的重要因素[8]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，血液和肝臟中的低密度組GSH-PX活性顯著高于中密度組和高密度組，中密度組顯著高于高密度組，說(shuō)明養(yǎng)殖密度對(duì)GSH-PX活性有顯著影響。高密度養(yǎng)殖環(huán)境下的GSH的含量的下降，說(shuō)明了機(jī)體清除自由基能力的下降。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果和劉松巖研究的環(huán)境脅迫對(duì)中華鱘體內(nèi)自由基水平和抗氧化酶活力的影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同[9]。

3.2.4?不同養(yǎng)殖密度對(duì)鸚鵡魚(yú)血液和肝臟中T-AOC、MDA的影響?T-AOC是反映機(jī)體內(nèi)總的抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，是酶性和非酶性抗氧化物的總體水平。T-AOC的水平隨年齡逐漸增大而明顯下降，致使機(jī)體內(nèi)抗氧化酶合成減少或利用非酶性抗氧化物質(zhì)能力減弱，即可出現(xiàn)氧化應(yīng)激而引起自由基損傷[10]。MDA是一種從脂質(zhì)過(guò)氧化作用中衍生的代謝產(chǎn)物，它己經(jīng)被用作一種細(xì)胞膜氧化損傷的指示物。 MDA的高低可以代表機(jī)體或組織氧化水平的高低，它的高低也間接反映了機(jī)體細(xì)胞受損傷的嚴(yán)重程度[9]。

三個(gè)密度組血液和肝臟中的T-AOC活性、MDA活性均無(wú)顯著差異，說(shuō)明在本實(shí)驗(yàn)中養(yǎng)殖密度對(duì)T-AOC活性和MDA活性無(wú)顯著影響。

3.3?不同養(yǎng)殖密度對(duì)肝功能的影響

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（GPT）和天門(mén)冬氨基轉(zhuǎn)移酶（GOT）這兩種酶在糖、蛋白質(zhì)和脂肪三大物質(zhì)代謝過(guò)程中起著十分重要的作用，是正常生命活動(dòng)不可缺少的酶類(lèi)之一[11-12]。正常狀態(tài)下，該酶主要存在于肝細(xì)胞的可溶性部分，而且血液含量很低。血清GOT的升高意味著肝臟的組織受到了破壞。本實(shí)驗(yàn)中，血清中GOT和GPT隨養(yǎng)殖密度的增大而逐漸升高，推測(cè)可能是長(zhǎng)時(shí)間的脅迫導(dǎo)致肝細(xì)胞受損，這兩種酶從肝細(xì)胞中釋放到血液中，導(dǎo)致其含量升高。這與TEJPAL等[13]研究發(fā)現(xiàn)麥瑞加拉鯪（Cirrhinus mrigala）血清中GOT和GPT活性隨養(yǎng)殖密度的增大而顯著升高相一致。

4?結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提高養(yǎng)殖密度，一定程度上會(huì)影響鸚鵡魚(yú)的生長(zhǎng)及血液肝臟的生理生化指標(biāo)，中密度組在增重率、GSH-PX、GOT和GPT指標(biāo)上顯著低于低密度組，它對(duì)鸚鵡魚(yú)的負(fù)面影響較小，當(dāng)養(yǎng)殖密度達(dá)到（15.35±0.25）kg/m3時(shí)，會(huì)顯著影響鸚鵡魚(yú)的健康，產(chǎn)生較為嚴(yán)重的負(fù)面影響。

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（收稿日期：2019-08-08）