HPLC法測定氨糖美辛腸溶片的溶出度

賈亦兵，陳玥昕，孔令洋

(1.濟寧市食品藥品檢驗檢測中心，山東 濟寧 272100 2.長春精誠生物技術(shù)有限公司，吉林 長春 130000)

氨糖美辛腸溶片為非甾體消炎藥，在進入患者體內(nèi)后，通過刺激和恢復(fù)透明質(zhì)酸和蛋白聚糖的生物合成，從而抑制巨噬細胞產(chǎn)生超氧自由基及對關(guān)節(jié)軟骨有破壞作用的酶，能夠防止糖皮質(zhì)激素對軟骨細胞的損害及由某些非甾體類抗炎藥物對前列腺素的合成造成的不好的影響，以及可減少損傷細胞釋放內(nèi)毒性因子。吲哚美辛為消炎鎮(zhèn)痛藥，通過抑制前列腺素合成發(fā)揮解熱、鎮(zhèn)痛和抗炎作用，在體內(nèi)發(fā)揮吲哚美辛和氨基葡萄糖兩種藥物的協(xié)同作用。具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎的作用，適用于強直性脊柱炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、肩關(guān)節(jié)周圍炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎頸椎病、風(fēng)濕免疫科和骨科的對癥治療以及萊特爾綜合征、神經(jīng)痛等[1-2]。

目前，溶出度的測定方法主要有紫外-可見分光光度(UV)法和高效液相色譜(HPLC)法，近年來，HPLC法測定溶出度的品種呈現(xiàn)出越來越多的趨勢。UV法的定量方法有對照品對照法、吸光系數(shù)法和自身對照法等方法。采用UV法測定溶出度，雖然其方法簡單方便，易于操作，但是其也有一定的缺陷，比如專一性不強，靈敏度和準(zhǔn)確度不高?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載的溶出度使用紫外吸收系數(shù)法測定，吸收系數(shù)法的優(yōu)點是簡單方便，常用于制劑的含量測定，無需配置對照品溶液。但是缺點是專屬性不強，準(zhǔn)確度不高，有輔料等干擾[3-5],如果雜質(zhì)或輔料在測定波長處有吸收，則結(jié)果偏高。

根據(jù)試驗的結(jié)果，HPLC法測定溶出度，能避免上述情況的發(fā)生，有利于藥品質(zhì)量的控制。比紫外法能更真實地反映藥品的質(zhì)量。

1 儀器和試劑

1.1 儀器 LOGAN UDT-812A-12全自動溶出度系統(tǒng)；島津UV2550紫外分光光度計；安捷倫1200系列高效液相色譜儀(包含有G1310A 低壓四元泵、G1316A TCC柱溫箱、G1329B自動進樣器、G1314B UWD可變波長紫外檢測器)；Mettlor XS205DU電子分析天平；KQ-500VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲設(shè)備公司)。

1.2 試劑 純化水，冰醋酸(分析純)，乙腈(色譜純)，吲哚美辛對照品(批號：100258-200904，含量：99.9%，中國藥品生物制品檢定所)，氨糖美辛腸溶片(浙江惠松制藥有限公司，批號：171108、180102、180312)。

2 試驗方法

2.1 色譜條件 Agilent C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)， 0.1 mol·L-1的冰醋酸溶液-乙腈(50∶50)為流動相，柱溫：35 ℃，流速：1.00 mL·min-1，檢測波長為320 nm。

2.2 溶出方法 取氨糖美辛腸溶片6片，照溶出度與釋放度測定法(通則0931第一法方法2)[6-7]。以0.1 mol·L-1的鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 rpm，2 h后，立即將轉(zhuǎn)籃升出液面，觀察氨糖美辛腸溶片沒有出現(xiàn)裂縫或者崩解現(xiàn)象。然后再把轉(zhuǎn)籃轉(zhuǎn)移至預(yù)熱至37 ℃的1 000 mL磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中，轉(zhuǎn)速保持100 rpm不變，經(jīng)45 min后，將溶液取出用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 取吲哚美辛對照品0.010 29 g，用流動相溶解并稀釋成0.1 mg·mL-1的溶液，作為對照品儲備液。精密量取1、2、3、5、7.5、10 mL，置100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。分別取20 μL進入色譜儀檢測。以吲哚美辛峰面積為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程為Y= 76 959.7X+2 269.7，r=0.999 9(n=6)。吲哚美辛濃度在1.03～10.3 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4 輔料干擾試驗 取相當(dāng)于一粒樣品的輔料的量的輔料，置100 mL的容量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋到刻度，搖勻。用微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液。照“2.1”項下的色譜條件，在吲哚美辛主峰保留時間±10%處未檢測到干擾峰。說明在該色譜條件下，輔料對其溶出量無影響(見圖1)。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取“2.2”項下的供試品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，每小時進樣1次，測定吲哚美辛的峰面積，共考察12 h，峰面積RSD為0.4%。結(jié)果表明，在12 h內(nèi)供試品溶液的性質(zhì)穩(wěn)定(見圖1)。

圖1 輔料空白色譜圖

2.6 回收率試驗 分別精密稱取樣品與對照品及 3 份處方配比量的輔料，制成相當(dāng)于標(biāo)示量的80%、100%、120% 的模擬片各3份，置于轉(zhuǎn)籃中，轉(zhuǎn)移至預(yù)熱至37 ℃的1 000 mL磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中，轉(zhuǎn)速為100 rpm，經(jīng)過45 min，取溶液濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另精密稱取25 mg吲哚美辛對照品，置100 mL量瓶中，加50 mL甲醇溶解(必要時可加熱促其溶解，放冷后)，加入 pH 6.8 磷酸鹽緩沖液稀釋至刻度，搖勻。量取 5.00 mL，置于 50 mL 量瓶中，加溶出介質(zhì)將其稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品溶液20 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。試驗結(jié)果表明：回收率良好，平均回收率為99.9%(RSD=0.3%，n=9)。

表1 回收率試驗測定結(jié)果

2.7 供試品溶出度測定 紫外分光光度法：取微孔濾膜過濾后的續(xù)濾液作為供試品溶液，在(320±3)nm 的波長下測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的吸收系數(shù)為196，計算氨糖美辛腸溶片中吲哚美辛的溶出量。

高效液相色譜法：取過濾后的續(xù)濾液作為供試品溶液，精密量取20 μL，注入液相色譜儀，照含量測定法進行測定，結(jié)果見圖2、表2。

3 討論

3.1 與原標(biāo)準(zhǔn)相比，新的溶出度測定方法靈敏度高，專屬性高，準(zhǔn)確度高。如表3所示，紫外法的溶出結(jié)果明顯較高，關(guān)鍵因素很可能是輔料在該波長下有吸收度，高效液相色譜法可以很好地避免這一現(xiàn)象，賦形劑的質(zhì)量不同，紫外吸收影響的程度也不同。

3.2 測得3批樣品的含量為97.6%、97.2%、96.8%，用HPLC和紫外法測得的溶出度如上表3，發(fā)現(xiàn)溶出度結(jié)果與自身含量差異過大的情況逐漸增多，尤其是膠囊劑、片劑等劑型的品種。推測為藥品輔料的質(zhì)量參差不齊，從而對藥品檢驗產(chǎn)生一定的干擾，此點應(yīng)當(dāng)給以重視。

3.3 本文對氨糖美辛腸溶片中吲哚美辛的溶出度的進行直接測定，可在同一色譜條件下與含量同時進行測定，準(zhǔn)確簡單，節(jié)省了人力物力，提高了工作效率[8]。

4 結(jié)論

該方法準(zhǔn)確、靈敏，可以為氨糖美辛腸溶片的質(zhì)量控制提供依據(jù)。