腸道膜菌群檢測(cè)在大腸癌早期診斷篩查中的臨床意義

歐勝峰，馮巨濱，韓釗韻

大腸癌是大腸粘膜上皮和腺體發(fā)生的惡性腫瘤，可分為直腸癌和結(jié)腸癌[1]。有研究表明，大腸癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于肺癌、乳腺癌。目前，該疾病的致病因素尚未完全清楚，大腸癌早期并無(wú)癥狀，而進(jìn)展期的生存率低于10%[2，3]。早期診斷率和預(yù)期生存率低，是導(dǎo)致大腸癌患者死亡的重要原因之一，因此早期篩查診斷尤為重要[4]。近年來(lái)，人們對(duì)腸道菌群的研究逐漸深入，本文通過(guò)比較大腸癌患者與非大腸癌健康體檢者的腸道膜菌群情況，探討腸道膜菌群檢測(cè)在早期診斷篩查大腸癌中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年10月～2018年10月廣州市番禺區(qū)第五人民醫(yī)院和廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院的100例經(jīng)病理檢查確診為大腸癌患者作為觀察組，100例經(jīng)病理檢查確診為非大腸癌的健康體檢者作為正常對(duì)照組。觀察組中，男58例，女42例；年齡40～75(62.7±7.2)歲；經(jīng)病理檢查確定TNM分期：Ⅰ期63例，Ⅱ期37例。對(duì)照組中，男55例，女45例；年齡38～72(63.3±7.8)歲。兩組一般資料具有可比性。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《中國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范》[5]中大腸癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②檢測(cè)前2周內(nèi)未曾服用過(guò)影響腸道菌群的制劑，如抗生素等；③未進(jìn)行過(guò)放療、化療者；④患者均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并感染及其他器官衰竭者；②妊娠或哺乳期婦女；③糞便樣本污染或留取量不足者。

1.3檢測(cè)方法 大腸組織(膜菌群)樣本：兩組患者進(jìn)行大腸鏡檢查退鏡時(shí)，采用一次性活體取樣鉗(常州市智業(yè)醫(yī)療儀器研究所有限公司提供)在乙狀結(jié)腸處取新鮮組織，用PBS緩沖液清洗后，裝入無(wú)菌EP管內(nèi)在-80℃保存待檢。

兩組取約0.4 mm的糞便(腔菌群)及大腸組織(膜菌群)樣本，加入3.6 ml稀釋液進(jìn)行研磨，梯度稀釋并接種到相應(yīng)培養(yǎng)基，大腸桿菌、腸球菌進(jìn)行需氧培養(yǎng)，類桿菌、乳桿菌、雙歧桿菌進(jìn)行厭氧培養(yǎng)，使用梅里埃ATB自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀對(duì)大腸桿菌、腸球菌、乳桿菌、雙歧桿菌和類桿菌進(jìn)行鑒定并計(jì)數(shù)。

1.4觀察指標(biāo) 比較兩組相關(guān)指標(biāo)：①兩組腸道膜菌群與腔菌群的檢測(cè)結(jié)果；②雙歧桿菌與腸桿菌計(jì)數(shù)的比值(B/E)：B/E值≥1提示腸道微生物定植抗力正常，B/E值<1提示腸道微生物定植抗力下降；③不同分期大腸癌患者和對(duì)照組腸道膜菌群檢測(cè)結(jié)果與B/E值；④腸道膜菌群檢測(cè)在觀察組大腸癌患者的早期篩查率。

2 結(jié) 果

2.1兩組腸道膜菌群與腔菌群檢測(cè)結(jié)果及B/E值比較 見(jiàn)表1。與正常對(duì)照組相比，觀察組膜菌群中雙歧桿菌、乳桿菌含量和B/E值均顯著下降，大腸桿菌、腸球菌和類桿菌含量均顯著升高；觀察組腔菌群中雙歧桿菌、乳桿菌含量和B/E值均顯著下降，腸球菌和類桿菌含量均顯著升高，大腸桿菌與對(duì)照組類似。

2.2不同分期大腸癌患者和對(duì)照組腸道膜菌群檢測(cè)結(jié)果與B/E值比較 見(jiàn)表2。與正常對(duì)照組相比，觀察組Ⅰ期患者腸道膜菌群中類桿菌含量顯著升高(P<0.05)，雙歧桿菌、乳桿菌含量、B/E值均顯著下降(P<0.05)；與正常對(duì)照組相比，觀察組Ⅱ期患者腸道膜菌群中大腸桿菌、腸球菌和類桿菌含量均顯著升高(P<0.05)，雙歧桿菌、乳桿菌含量、B/E值均顯著下降(P<0.05)；與觀察組Ⅰ期患者相比，觀察組Ⅱ期患者腸道膜菌群中大腸桿菌、腸球菌和類桿菌含量均顯著升高(P<0.05)，雙歧桿菌、乳桿菌含量、B/E值均顯著下降(P<0.05)。

2.3觀察組大腸癌的早期初篩結(jié)果 觀察組中確診的100例大腸癌患者，腸道膜菌群檢測(cè)早期初篩88例，初篩率為88.0%，漏診率為12.0%。

3 討 論

隨著我國(guó)人口老齡化加重和人們生活水平提高，大腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。研究表明，早期大腸癌術(shù)后5年生存率高于90%，然而多數(shù)大腸癌患者在早期階段癥狀不足[6]。病理學(xué)檢查是診斷大腸病變的金標(biāo)準(zhǔn)，但很多患者懼怕結(jié)腸鏡檢查的痛苦而拒絕檢查，為臨床的早期診斷帶來(lái)困難。因此，尋找有效的非侵入性篩查方法是提高大腸癌早期檢出率和延長(zhǎng)患者生命周期的關(guān)鍵。本研究中，與正常對(duì)照組相比，觀察組患者腸道菌群含量出現(xiàn)明顯異常，說(shuō)明大腸癌患者存在腸道菌群紊亂，腸道菌群的檢測(cè)對(duì)大腸癌的早期診斷有一定的作用。

人體腸道菌群包括膜菌群和腔菌群。研究認(rèn)為，糞便無(wú)法代表腸道菌群的特征，腸道內(nèi)膜菌群和腔菌群組成成分存在差異[7]。腸道定植抗力可反映腸道內(nèi)正常菌群對(duì)(潛在)致病菌群定植的抵抗能力，用B/E值表示，B/E值≥1提示人體腸道環(huán)境良好[8]。本研究通過(guò)對(duì)大腸癌患者和對(duì)照組的腸道膜菌群與腔菌群進(jìn)行觀察比較，結(jié)果顯示，觀察組腸道膜菌群中的大腸桿菌顯著高于對(duì)照組，而腔菌群相較于對(duì)照組無(wú)明顯區(qū)別，提示大腸癌患者膜組織中大腸桿菌的變化較為異常，但大腸癌患者的膜菌群和腔菌群的變化并不完全不同。不同分期大腸癌患者的腸道菌群變化也不相同，Ⅰ期患者存在一定的菌群失調(diào)，Ⅱ期患者腸道菌群失調(diào)進(jìn)一步加劇，提示腸道菌群的變化與大腸癌的發(fā)展有關(guān)。觀察組腸道內(nèi)腔菌群和膜菌群的B/E值均下降，且Ⅱ期患者的B/E值下降幅度明顯大于Ⅰ期患者，同時(shí)Ⅱ期患者雙歧桿菌含量下降幅度大于Ⅰ期患者，大腸桿菌含量增加幅度大于Ⅰ期患者，提示隨著大腸癌病情發(fā)展，腸道內(nèi)有益菌不斷減少，潛在致病菌逐漸增加，腸道環(huán)境逐漸惡化。此外，本研究結(jié)果顯示，腸道膜菌群檢測(cè)在觀察組大腸癌患者早期初篩效果較好，初篩率達(dá)88%。同時(shí)，本研究中取樣前的腸道清潔狀況也可能影響腸道菌群，還需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行研究。

表1 兩組腸道膜菌群與腔菌群檢測(cè)結(jié)果及B/E值比較

表2 不同分期大腸癌患者和對(duì)照組腸道膜菌群檢測(cè)結(jié)果與B/E值比較

注：a為Ⅰ期與對(duì)照組比較差異顯著，P<0.05；b為Ⅱ期與對(duì)照組比較差異顯著，P<0.05；c為Ⅰ期與Ⅱ期比較差異顯著，P<0.05

綜上所述，腸道膜菌群檢測(cè)大腸癌的初篩率較高，方法簡(jiǎn)便，易于普及，為早期篩查大腸癌提供了一種有效檢測(cè)手段，值得臨床推廣應(yīng)用。