T淋巴細胞斑點實驗聯(lián)合熒光PCR法用于肺結(jié)核診斷中的臨床分析

河南省濮陽市第五人民醫(yī)院（457000）劉慧君

有關(guān)數(shù)據(jù)調(diào)查顯示[1]，每年全球因肺結(jié)核死亡的人數(shù)約有300萬，死亡率最高的為發(fā)展中國家，肺結(jié)核已經(jīng)成為世界性的公共衛(wèi)生問題。T淋巴細胞斑點實驗（T-SPOT）與熒光PCR法均是診斷肺結(jié)核的有效方法，但臨床鮮少有聯(lián)合檢查在肺結(jié)核診斷中的應用價值分析，本研究對101例疑似肺結(jié)核患者進行研究，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2016年2月～2018年2月收治的101例疑似肺結(jié)核患者為研究對象，男性57例，女性44例；年齡19～66歲，平均年齡（42.5±4.14）歲。

1.2 方法 患者均接受T-SPOT法與熒光PCR法聯(lián)合T-SPOT法檢測：①熒光PCR法：采集患者痰液標本，并在其中加入2～3倍體積的4%NaOH，取0.5ml～1.5ml以15000r/min離心5min后棄上清液，于沉淀物中加入1ml無菌生理氯化鈉進行標本預處理，與之混合。使用熒光PCR試劑盒，嚴格按照試劑盒操作說明處理。②T-SPOT：取患者4ml外周靜脈血，離心管內(nèi)加入4ml RPMI1640培養(yǎng)液充分搖勻。在另一只離心管內(nèi)加入3ml淋巴細胞分離液，取8ml混勻的細胞懸液加入淋巴細胞分離液中，并以16000r/min速率離心22min，再加入RP-MI1640培養(yǎng)液，以600r/min速率離心7min，棄上清液。再加入11ml AIMV培養(yǎng)液，以350r/min的速率離心7min，棄上清液。與AIMV培養(yǎng)液混勻后取10ml細胞懸液與40ul錐蟲藍染色液混勻后，取10ul置于細胞計數(shù)板上，采用結(jié)核感染T淋巴感染試劑盒中的微孔板進行計數(shù)、統(tǒng)計處理，并記錄T細胞數(shù)量。

1.3 觀察指標 熒光PCR法：①陽性標準：結(jié)核桿菌DNA≥500copy/mL，②陰性標準：結(jié)核桿菌DNA<500copy/mL。SPOT法：①陽性標準：陰性對照的著色細胞斑點形成數(shù)（SFC）為0～5個，抗原A和抗原B檢測孔技術(shù)≥6個；陰性對照SFC為6～10個，抗原A或抗原B≥2倍陰性孔斑點數(shù)。②陰性標準：抗原A、抗原B孔未達以上標準，但陽性對照反應較好。以臨床最終診斷結(jié)果為金標準，計算T-SPOT法聯(lián)合熒光PCR法的診斷準確率、特異度、敏感度。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0軟件對本研究數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料以x2檢驗，差異有統(tǒng)計學意義為P＜0.05。

2 結(jié)果

以培養(yǎng)法為診斷為金標準，101例患者中，最終確診肺結(jié)核95例，其他6例；T-SPOT試驗檢出97例，經(jīng)金標準確診86例，其他4例。T-SPOT試驗聯(lián)合熒光PCR法檢出96例，經(jīng)金標準確診肺結(jié)核94例，檢出其他5例。聯(lián)合檢測法的診斷準確率率、特異度、敏感度較單一T-SPOT實驗法高（P>0.05），見附表。

附表 不同檢測法的診斷準確率、敏感度、特異度比較（n,%）

3 討論

肺結(jié)核因感染結(jié)核分枝桿菌所致，盡早進行病原學檢查對肺結(jié)核的診斷和化療方案的制定具有指導意義。熒光PCR法是通過采用特異性熒光探針及結(jié)核分枝菌的特異性引物，使其與PCR反應液、4種脫氧核糖核酸苷酸、耐熱DNA聚合酶配合，并用體外擴增法對結(jié)核桿菌的基因進行檢測，因此具有較高的特異性。該項檢測是以結(jié)核桿菌基因保守區(qū)段作為檢測對象，因此不會受到耐藥性及細胞表型的影響，因此陽性檢出率高[2]。

T-SPOT是通過結(jié)核分枝桿菌的特異性抗原，刺激外周血單個核細胞（PBMC），然后利用細胞因子干擾素檢測出抗原特異性T淋巴細胞的應答反應，從而判斷患者的感染情況，為診斷肺結(jié)核提供依據(jù)[3]。本研究將兩種檢查方法結(jié)合，具有優(yōu)勢互補的作用。結(jié)果提示，熒光PCR法聯(lián)合T-SPOT法在診斷肺結(jié)核中的準確率為93.07%，敏感度為97.92%，特異度為83.33%，均高于單一T-SPOT法。

綜上所述，熒光PCR法聯(lián)合T-SPOT法在診斷肺結(jié)核的準確率、特異度、敏感度較高，可將其作為臨床首選診斷方法。