強力益氣顆粒的制備工藝研究

郤慶 徐向輝

摘 要 目的：優(yōu)化強力益氣顆粒的制備工藝。方法：以黃芪甲苷的提取轉(zhuǎn)移率和出膏率為指標(biāo)，采用正交試驗優(yōu)化煎煮提取中的加水量、煎煮時間及煎煮次數(shù)等參數(shù)并進行驗證試驗。結(jié)果：最優(yōu)制備工藝為6味藥加10倍量水煎煮提取3次，1 h/次。結(jié)論：優(yōu)化的制備工藝穩(wěn)定、可行。

關(guān)鍵詞 強力益氣顆粒 正交試驗 制備工藝

中圖分類號：R944.27； R286 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：1006-1533（2019）17-0073-03

Study on a process for the preparation of Qiangliyiqi granule*

XI Qing1**， XU Xianghui2***（1. Department of Pharmacy， Shanghai Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Shanghai 200082， China； 2. Department of Pharmacy， Shanghai Jiangong Hospital， Shanghai 200083， China）

ABSTRACT Objective： To optimize a process for the preparation of Qiangliyiqi granule. Methods： The parameters such as water addition， boiling time and boiling times in the decoction extraction were optimized by orthogonal test taking the extraction transfer rate and the paste rate of astragaloside IV as indicators， and the verification test was also performed. Results： The optimal preparation process was as follows： 10 fold amount of water was added into 6 kinds of Chinese medicines and then decoction extraction was performed for 3 times with one hour each. Conclusion： The optimized process is stable and feasible.

KEy WORDS Qiangliyiqi granule； orthogonal test； preparation process

中醫(yī)認(rèn)為惡性腫瘤是多種因素長期作用于人體導(dǎo)致的正氣受損，氣滯血瘀、癌毒內(nèi)生。故中醫(yī)治療中多以扶正、固本、健脾、補腎等增強機體的抗病能力，減輕放、化療對機體帶來的損傷，使白細胞恢復(fù)正常[1]。放、化療后白細胞減少的病因、病機為：脾胃受損、氣血虧需。脾為后天之本，氣血生化之源，脾氣虛則氣血生化無源。臨床表現(xiàn)為白細胞減少，并伴有神疲倦怠、頭暈乏力等癥候，屬于虛勞范疇[2]。研究發(fā)現(xiàn)[3]，在內(nèi)服中藥復(fù)方治療白細胞減少癥的臨床研究中，補虛類中藥的使用頻率遠高于其他類別（71.2%），補虛類中藥能提高粒單系祖細胞產(chǎn)率（CFU-GM），具有促進正常造血干細胞生長的作用。強力益氣顆粒正是根據(jù)中醫(yī)“虛則補之，損則益之”的理論，經(jīng)過多年臨床實踐總結(jié)所得的經(jīng)驗方。方中黃芪具有補氣升陽、固表止汗、脫毒排膿之功，所含的皂苷類、多糖類等主要成分在免疫調(diào)節(jié)，抗腫瘤等方面具有主要的作用[4]。淫羊藿中主要活性成分淫羊藿苷對機體主要的中樞免疫器官胸腺和脾臟等具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能，可明顯增強化療、輻射所致的免疫抑制小鼠NK細胞活性，淫羊藿苷達到一定濃度還可以提高腫瘤患者LAK細胞以及NK細胞的活性。補益類中藥黨參、柴胡、白術(shù)扶正固本，能增強機體的免疫功能?；颊唛L期用藥，未見明顯不良反應(yīng)發(fā)生，療效確切，安全性好，且價格低廉，服用方便，這為強力益氣顆粒的進一步開發(fā)提供了堅實的臨床基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；3300蒸發(fā)光散射檢測器（Alltech公司）；CP225D電子天平（德國Sartorius公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

黃芪甲苷對照品（批號：171241-201001，純度：99.7%），來源于中國食品藥品檢定研究院。甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。黃芪等藥材購自上海萬仕誠國藥制品有限公司，經(jīng)上海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院副主任藥師吳婉靜鑒定，符合現(xiàn)行《中華人民共和國藥典》各藥材項下的規(guī)定。其中黃芪藥材中黃芪甲苷的含量為0.056%。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取正交試驗

為確定6個藥材提取的煎煮最佳工藝，選取加水量、提取次數(shù)、提取時間為考察因素，選用L9（34）正交表，以黃芪甲苷的提取率為指標(biāo)，進行了9次試驗（表1）。

2.2 黃芪甲苷的含量測定方法[5]

2.2.1 色譜條件[4]

Ultimate C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，粒徑5μm）；流動相為乙腈-水（32∶68）；流速為1.0 ml/ min；柱溫為30 ℃；進樣量為10 μl；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度60 ℃，空氣流速為2.0 L/min。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對照品12.64 mg，置25 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備

精密量取各提取液5 ml，置分液漏斗中，加入水飽和的正丁醇振搖提取4次，20 ml/次，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，20 ml/次，正丁醇液蒸干，殘渣加水10 ml使溶解，搖勻，濾過，即得[6]。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備

取缺失黃芪的其他藥材按照處方工藝制備陰性樣品，照供試品溶液的制備方法制備陰性樣品溶液。

2.2.5 測定方法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。

2.2.6 專屬性考察

精密吸取上述供試品溶液、對照品溶液與陰性樣品溶液各20 μl，按上述色譜條件測定。結(jié)果表明，供試品色譜中呈現(xiàn)與對照品色譜主峰保留時間一致的色譜峰，且陰性樣品無干擾。

2.2.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取黃芪甲苷對照品25.32 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取上述母液2 ml、3 ml、5 ml、7 ml分置于10 ml量瓶中加流動相定容、搖勻，即得。

分別精密吸取上述對照品溶液及對照品母液各20 μl注入液相色譜儀，依法測定并記錄峰面積，以對照品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分均值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

黃芪甲苷的回歸方程為y=1.634 2 x+1.054 7（r2= 0.999 4）。結(jié)果表明黃芪甲苷的進樣量在4.051 2～20.256μg范圍內(nèi)，峰面積與濃度之間線性關(guān)系良好。

2.2.8 精密度試驗

精密量取對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次20 μl，記錄峰面積，結(jié)果黃芪甲苷的峰面積RSD為1.2%，表明色譜系統(tǒng)連續(xù)進樣時精密度良好。

2.2.9 溶液穩(wěn)定性試驗

精密量取供試品溶液，分別于0 h，4 h，8 h，12 h進樣，每次20 μl，記錄峰面積，結(jié)果4個時間點黃芪甲苷的峰面積RSD為1.6%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.10 重復(fù)性試驗

分別量取供試液6份，每份5 ml，按照供試品溶液制備方法處理，結(jié)果6份供試品黃芪甲苷的含量RSD為1.5%，說明方法重復(fù)性較好。

2.2.11 數(shù)據(jù)處理及分析

根據(jù)L9（34）正交表，試驗結(jié)果及方差分析見表2、表3和表4。

由表4、表5可知，因素A、B對結(jié)果有顯著性影響，因素C沒有顯著性影響。最佳提取工藝為A3B3C1，即加10倍量水，煎煮3次，1 h/次。

2.2.12 最佳工藝的驗證

為了驗證提取工藝的合理性與穩(wěn)定性，稱取3份1倍處方比例藥材按最佳工藝進行試驗，結(jié)果見表5。

由表5可知，3次提取工藝驗證試驗結(jié)果與上述正交試驗的最佳工藝結(jié)果較為一致，且數(shù)據(jù)比較平行，說明該最佳工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

1）蒸發(fā)光散射檢測器對于無紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物，是一個很好的補充，但不能用不揮發(fā)的鹽或溶劑做流動相，基線噪音較大、靈敏度低是主要缺點。其中載氣流速這個參數(shù)的設(shè)置會對色譜峰的信噪比和保留時間產(chǎn)生影響，漂移管的溫度過高或過低都會直接影響溶劑的揮發(fā)程度，以致于影響基線的穩(wěn)定性。所以我們在試驗過程中反復(fù)摸索，最后確定漂移管溫度60℃，空氣流速2.0 L/min時，方法中色譜峰的基線噪音最小，樣品保留時間合適并且穩(wěn)定。

2）提取液的制備方法。為了減小測定誤差，首先采取了直接水提取后直接進樣的方式，發(fā)現(xiàn)色譜峰較多，陰性樣品存在干擾。后嘗試過D101大孔樹脂等方法，均沒有正丁醇萃取提取率高，且干擾小。最后確定供試液的制備方法為正丁醇萃取后加氨試液洗滌。經(jīng)方法學(xué)驗證該方法較穩(wěn)定可行。

參考文獻

[1] 于淼. 補氣生血、溫補腎陽類中藥輔助治療腫瘤患者因化療致白細胞減少癥的療效分析[J]. 中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2016， 10（6）： 256-257.

[2] 李軼群， 黃學(xué)武. 八珍湯加減預(yù)防腫瘤化療后白細胞減少癥32例臨床觀察[J]. 河北中醫(yī)， 2006， 78（10）： 755-756.

[3] 李虹， 張蓉蓉. 中藥復(fù)方治療白細胞減少癥用藥規(guī)律分析[J]. 中醫(yī)， 2015， 56（4）： 338-341.

[4] 杜現(xiàn)華， 杜心佳， 張克信， 等. 黃芪注射液配合化療治療惡性腫瘤臨床觀察[J]. 上海醫(yī)藥， 2000， 21（2）： 16-18.

[5] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（2015年版）一部[M]. 北京： 人民衛(wèi)生出版社， 2015： 302.

[6] 段立軍， 孫博航. 黃芪甲苷的研究進展[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報， 2011， 28（5）： 410-416.