維生素B12對圓型臂尾輪蟲種群增長、繁殖和個體大小的影響

邵盛男

摘要：為了解維生素B12對海水圓型臂尾輪蟲（Brachionus rotundiformis）種群增長、繁殖和個體大小的影響，采用四種不同濃度的維生素B12（0、0.3、0.6、1.2 μg/mL）強化培養(yǎng)輪蟲7 d。每天測定輪蟲的種群密度和懷卵率，每隔一天測定輪蟲背甲長和寬。試驗結(jié)果顯示：0.3 μg/mL維生素B12組輪蟲的種群增長、懷卵率顯著高于其他組（P<0.05）;0.3 μg/mL維生素B12組輪蟲的背甲長和寬均顯著小于其他三組（P>0.05），而其他三組差異不顯著。試驗結(jié)論：在本試驗條件下，維生素B12對圓型臂尾輪蟲種群增長、繁殖和個體大小影響的最適濃度為0.3 μg/mL。

關(guān)鍵詞：圓型臂尾輪蟲（Brachionus rotundiformis）;維生素B12;種群增長;懷卵率;個體大小

維生素B12又叫鈷胺素，可促進甲基轉(zhuǎn)移，具有活化氨基酸，促進核酸生物合成，促進蛋白質(zhì)合成的重要作用。如魚類缺乏維生素B12，可造成食欲不振、生長緩慢以及貧血等病癥[1]。然而自然界中的維生素B12都是微生物合成的，高等動植物不能合成維生素B12 [2]。

在水產(chǎn)動物苗種培育階段，生物餌料是不可或缺的部分，直接影響到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的效益和發(fā)展[3-5]。而輪蟲，因其營養(yǎng)豐富，適應(yīng)力強、繁殖迅速、易培養(yǎng)等特點，已然成為魚類、甲殼動物培養(yǎng)初期的重要開口餌料，在海水養(yǎng)殖育苗階段，目前尚無其他活餌可以替代[6]。不同發(fā)育階段的幼苗對餌料營養(yǎng)需求有所不同，因此，近幾年對于開口餌料的營養(yǎng)強化研究已成為一個新的熱點，國內(nèi)外專家對于輪蟲的研究都逐漸深入[7-11]。近年來關(guān)于維生素B12對輪蟲生長情況的影響有所研究[12-14]，但關(guān)于維生素B12對于圓型臂尾輪蟲（Brachionus rotundiformis）的種群增長、繁殖和個體大小影響的研究至今沒有報道。

本試驗通過研究圓型臂尾輪蟲在不同維生素B12濃度條件下對輪蟲的種群增長、懷卵率，背甲長和寬的影響，來探究維生素B12對輪蟲的最適濃度，進而在培養(yǎng)輪蟲過程中，對輪蟲進行營養(yǎng)強化，為苗種提供更優(yōu)質(zhì)的開口餌料，進一步促進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。

1材料與方法

1.1試驗材料

海水圓型臂尾輪蟲來自于東海水產(chǎn)研究所水產(chǎn)實驗室;活性干酵母是由湖北安琪酵母股份有限公司所提供。維生素B12購買于北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司，所有的實驗儀器均來自東海水產(chǎn)研究所水產(chǎn)養(yǎng)殖室。

1.2試驗材料的準備

1.2.1圓型臂尾輪蟲的保種方法試驗前，將輪蟲置于10 L的廣口瓶中進行培養(yǎng)（人工配制海水、鹽度為20‰[15]），在培養(yǎng)的過程中，連續(xù)充氣，自然光照，培養(yǎng)溫度設(shè)為（25±1）℃，pH為7.3～7.8。以酵母溶液作為輪蟲的餌料，每天投餌一次，餌料投喂量為8×106 cell/mL[16-17]。

1.2.2試驗指標的測定方法每24 h從每個錐形瓶中隨機取3 mL輪蟲培養(yǎng)液，加碘液固定后計數(shù)每毫升培養(yǎng)液中輪蟲數(shù)量、懷卵率。每隔一天從試驗組中隨機取2 mL輪蟲培養(yǎng)液，用鹽酸固定，測定每毫升培養(yǎng)液輪蟲其背甲長和背甲寬。重復三次。取樣在無菌操作臺中進行。

懷卵率=卵個數(shù)/輪蟲總數(shù)量×100%

1.3試驗設(shè)計

試驗分為對照組、維生素B12組，對照組為正常培養(yǎng)組，不添加維生素B12，維生素B12組添加不同濃度的B12（0.3、0.6、1.2 μg/mL）[18-19]。所有儀器在試驗前均已滅菌，酵母投喂量為8×106 cell/mL，輪蟲培養(yǎng)體積為1 L，培養(yǎng)過程中保持自然光照，連續(xù)充氣，設(shè)定溫度為（25±1）℃，pH為7.3～7.8。輪蟲以250 ind/mL的接種密度接種到500 mL鹽度為20‰的錐形瓶中，放置到生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，溫度設(shè)定為25 ℃。三重復。培養(yǎng)時不斷充氣。每日投喂兩次酵母溶液。

1.4統(tǒng)計分析

應(yīng)用單因子方差分析（LSD和Duncan）比較各試驗組的背甲長寬的差異顯著性，應(yīng)用單因子方差分析（Tukey）比較各試驗組生長數(shù)據(jù)的顯著性，差異顯著性水平（P）值設(shè)在0.05，所有統(tǒng)計分析均采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。誤差和置信區(qū)間用mean±SE表示[20]。

2結(jié)果

2.1不同維生素B12濃度對輪蟲種群密度的影響

在培養(yǎng)前1～2 d，各組輪蟲種群增長較緩慢，第3天開始增長得比較快，輪蟲種群量在第5天達到峰值，隨后下降。而維生素B12添加濃度為0.3 μg/L組的輪蟲在第3天大幅度增加，第5天達到峰值后下降，最后輪蟲數(shù)量高于其他各組。見圖1。該試驗結(jié)果表明：在培養(yǎng)早期（1～2 d）維生素B12對輪蟲的種群增長無顯著（P>0.05）影響;在培養(yǎng)的中期（3～5 d）維生素B12濃度為0.3 μg/mL組的輪蟲的種群增長顯著（P<0.05）高于其他組。

2.2不同維生素B12濃度對輪蟲懷卵率的影響

輪蟲懷卵量在第2天開始就增長得比較快，在第3天達到峰值，隨后下降。而維生素B12添加濃度為0.3 μg/mL組的輪蟲在第2天大幅度增加，第3天達到峰值后下降，最后輪蟲懷卵量趨于第1天，見圖2。該試驗結(jié)果表明：在培養(yǎng)后期（6～7 d）維生素B12對輪蟲的懷卵量無顯著（P>0.05）影響;在培養(yǎng)的中期（2～5 d）維生素B12對輪蟲懷卵量影響顯著（P>0.05），維生素B12濃度為0.3 μg/mL組的輪蟲的懷卵率顯著（P<0.05）高于其他組。

2.3不同維生素B12濃度對圓型臂尾輪蟲背甲長寬的影響

0.3 μg/mL維生素B12組輪蟲的背甲長和寬顯著小于其他組（P>0.05），而其他三組差異不顯著。見圖3、圖4。

3討論

維生素最早在水產(chǎn)上的應(yīng)用是解決育苗過程中輪蟲培養(yǎng)的問題，開始使用酵母培養(yǎng)輪蟲時，經(jīng)常會因為缺乏不飽和脂肪酸而導致魚苗體質(zhì)較弱，此后人們逐漸開始通過添加維生素來改變這種營養(yǎng)缺陷[21-23]。維生素在水產(chǎn)育苗方面占據(jù)著不可忽略的地位。維生素E對魚類的生長繁殖起著非常重要的作用，它可以通過一些化學反應(yīng)促進魚類生長和提高飼料效率[24]，在魚類養(yǎng)成期長期缺乏維生素E會導致血糖不穩(wěn)定，并且影響性腺發(fā)育成熟[25]。維生素C具有非常強的抗氧化能力，它能夠促進胚胎發(fā)育，提高精液和魚卵的質(zhì)量[26-27]。維生素A在保障機體正常免疫方面占據(jù)著非常重要的作用[28-29]，并且維生素A可用于改善貧血，提高血紅蛋白水平。在培養(yǎng)輪蟲的水溶液中加入適量的L-肉堿可以促進細菌的繁殖，細菌可以作為輪蟲的餌料，從而促進輪蟲的生長繁殖[30]。此細菌可以分泌維生素B12，所以本試驗以海水圓型臂尾輪蟲（Brachionusrotundiformis）作為研究對象，設(shè)置四種不同濃度的維生素B12（0.0、0.3、0.6、1.2 μg/mL），來探究維生素B12對圓型臂尾輪蟲種群增長、繁殖和個體大小影響的最適濃度。本試驗結(jié)果顯示：添加維生素的試驗組的輪蟲數(shù)量和懷卵數(shù)量顯著高于對照組（P<0.05），這說明維生素B12有可能通過促進細菌分泌物的活性，加速對水體營養(yǎng)物質(zhì)的分解利用，促進細菌數(shù)量的迅速增長，大量的細菌不僅可以作為餌料為輪蟲提供營養(yǎng)，而且可以有效凈化水體環(huán)境。與此同時，維生素B12作為一種營養(yǎng)物質(zhì)可以改善輪蟲的新陳代謝從而促進輪蟲的種群增長和繁殖。3～5 d濃度為0.3 μg/mL的維生素B12的輪蟲數(shù)量顯著高于其他組（P<0.05），2～4 d濃度為0.3 μg/mL的維生素B12的輪蟲懷卵數(shù)量顯著高于其他組（P<0.05），這說明維生素B12對輪蟲種群增長和懷卵率影響的最適濃度為0.3 μg/mL。有研究表明維生素B12能促進萼花臂尾輪蟲種群增長，并且該實驗得出在25 ℃條件下，促進輪蟲生長繁殖的最適濃度為1 μg/mL[19]。所以本實驗是具有一定的實驗依據(jù)的。此外，本試驗還對輪蟲的背甲長和寬進行測量，研究表明：0.3 μg/mL維生素B12組輪蟲的背甲長和寬顯著小于其他組（P>0.05），而其他三組差異不顯著。探究出維生素B12對圓型臂尾輪蟲種群增長、繁殖和個體大小影響的最適濃度，這為生產(chǎn)實踐提供指導，有利于漁業(yè)更好更快的發(fā)展。當然本實驗也存在著一些缺陷，沒有將維生素B12的濃度梯度設(shè)置的特別精細，希望可以在今后的試驗進一步探索。

4結(jié)論

在本試驗條件下，維生素B12對圓型臂尾輪蟲種群增長、繁殖和個體大小影響的最適濃度為0.3 μg/mL。

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Effects of vitamin B12 on population growth，reproduction and individual size of rotifer Brachionus rotundiformis

SHAO Shengnan

（East China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shanghai 200090）

Abstract：The effect of vitamin B12 on the population growth，reproduction and individual size of Brachionus rotundiformis was studied in this experiment.In this study， Brachionus rotundiformis was studied and cultured with four different concentrations of vitamin B12 （0， 0.3， 0.6， 1.2 μg/mL） for 7 days.The density and hatching rate of rotifers are determined daily.The length and width of the rotifer dorsal carp were measured every other day.The results showed that the population growth and egg ratio of 0.3 μg/mL vitamin B12 group （P<0.05） were higher than those of other groups，and the length and width of rotifer in 0.3 μg/mL vitamin B12 group were significantly smaller than those of other three groups （P>0.05），but there were no significant difference among the other three groups.Test conclusion： under this experimental condition，the optimum concentration of vitamin B12 to the population growth，reproduction and individual size of Brachionus rotundiformis is 0.3 μg/mL.

Key words：Brachionus rotundiformis; vitamin B12; population growth; egg rate; size of individual