GLP-1類似物Exendin-4對(duì)糖尿病腎病大鼠腎臟SOD、8-OHdG的影響

郝紹伯 蘭麗珍

（1 山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院，山西 太原 030001；2 山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，山西 太原 030001）

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥，其發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，與DN相關(guān)的致病基因涉及多個(gè)病理生理環(huán)節(jié)。近年來(lái)，氧化應(yīng)激反應(yīng)在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用逐漸引起重視[1]。胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）受體在人體內(nèi)有著非常廣泛的分布，因此GLP-1可以產(chǎn)生非常廣泛的生理作用[2,3]。而GLP-1類似物Exendin-4與GLP-1氨基酸序列53%同源，是GLP-1受體的激動(dòng)劑，且不易被被體內(nèi)的二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）降解，具有良好的臨床應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察在GLP-1類似物Exendin-4作用下糖尿病腎病大鼠腎臟組織中SOD、8-OHdG蛋白表達(dá)水平的變化，探討GLP-1類似物對(duì)糖尿病腎病時(shí)腎臟氧化應(yīng)激的影響，進(jìn)而探討Exendin-4延緩糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

廣東寶麗健生物工程有限公司提供的Exendin-4，南京建成科技有限公司提供的尿蛋白試劑盒，武漢博士德生物有限公司提供的DAB顯色劑，武漢博士德生物有限公司提供的SOD抗體，8-OHdG試劑購(gòu)自聚合HRP標(biāo)記性抗IgG購(gòu)自武漢博士德生物有限公司。

1.2 生化指標(biāo)檢測(cè)

代謝籠收集24h尿液，723型可見分光光度計(jì)檢測(cè)尿蛋白含量；尾靜脈采血，強(qiáng)生血糖儀檢測(cè)血糖。

1.3 免疫組化檢測(cè)腎組織8-OHdG、SOD蛋白表達(dá)

取出腎臟蠟塊，切片后進(jìn)行SOD、8-OHdG的免疫組化及HE染色，并觀察染色后的切片。圖像采用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）進(jìn)行分析，每組隨機(jī)不重復(fù)各取8個(gè)腎組織視野，測(cè)定其平均光密度，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié) 果

治療后各組大鼠腎組織SOD、8-OHdG的平均光密度值見表1。

表1 治療后各組大鼠腎組織SOD、8-OHdG的平均光密度值(±s)

表1 治療后各組大鼠腎組織SOD、8-OHdG的平均光密度值(±s)

注：與DN組相比較，*P＜0.05；與低劑量治療組相比較，#P＜0.05

分組 例數(shù) 8-OHdG SOD DN組 8 0.32±0.05 0.21±0.03低劑量治療組 8 0.26±0.03* 0.24±0.02*高劑量治療組 8 0.20±0.02*# 0.26±0.03*#

2.1 生化指標(biāo)變化

DN組注射STZ 7d后血糖明顯提高，高血脂、高血糖、高尿蛋白、一直處于穩(wěn)定的狀態(tài)。與DN組相比，高劑量治療組與低劑量治療組各血糖明顯提高。高劑量治療組各指標(biāo)下降更為明顯。

2.2 HE染色觀察各組大鼠腎臟的病理變化，DN組腎小球萎縮，基質(zhì)增生，毛細(xì)血管袢受壓，腎小管管壁增厚，管腔狹窄。高劑量組與低劑量組有不同程度的加重。

2.3 免疫組織化學(xué)方法測(cè)腎組織PEDF、TGF-β1的蛋白表達(dá)水平，染色陽(yáng)性信號(hào)呈黃至棕黃色顆粒，陽(yáng)性反應(yīng)顆粒均位于胞漿內(nèi)。

3 討 論

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病主要的微血管并發(fā)癥之一，高血糖時(shí)產(chǎn)生的大量電子供體，明顯增加了線粒體膜內(nèi)外電化學(xué)勢(shì)能，使超氧化物生成顯著增加了[4]。有報(bào)道[5]稱高糖環(huán)境培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量的ROS，而堆積于體內(nèi)過(guò)量的ROS可以通過(guò)AGEs途徑、多元醇途徑、己糖胺旁路、PKC途徑等多種通路引起腎臟組織損傷，并最終導(dǎo)致糖尿病腎病[6-9]。

由于ROS具有高反應(yīng)性，可以迅速的與周圍物質(zhì)反應(yīng)，不易直接測(cè)到，故體內(nèi)氧化應(yīng)激的定量描述主要依賴于ROS與脂質(zhì)、DNA、蛋白質(zhì)反應(yīng)后的氧化產(chǎn)物和體內(nèi)抗氧化酶的測(cè)定。8羥基脫氧鳥苷（8-hydroxydeoxyguanosine，8-OHdG）是DNA受到氧化攻擊后的產(chǎn)物，相對(duì)于正常人，糖尿病腎病患者，尤其在伴有腎功能異常的患者體內(nèi)8-OHdG的水平是增高的，反映了糖尿病及DN患者氧化應(yīng)激水平的增高[10]。而超氧化物歧化酶（SOD）是體內(nèi)清除自由基的重要生物酶，有研究表明，糖尿病大鼠成模6及12周時(shí)，其腎組織內(nèi)SOD活性較對(duì)照組顯著下降[11]，因此，血液或組織內(nèi)SOD的水平也可以間接反映體內(nèi)氧化應(yīng)激的水平。

本實(shí)驗(yàn)中Exendin-4治療組糖尿病大鼠腎臟8-OHdG與糖尿病腎病組相比有明顯降低，SOD明顯增高，24h尿蛋白定量減少，腎臟病理改變明顯緩解，說(shuō)明Exendin-4可以通過(guò)抗氧化作用延緩糖尿病腎臟病變，起到腎臟保護(hù)作用。關(guān)于Exendin-4抗氧化的機(jī)制，一方面來(lái)自于血糖的改善，另一方面，我們猜測(cè)可能與藥物直接作用于腎臟組織的GLP-1受體有關(guān)。

總之，本研究提示，Exendin-4可以通過(guò)降低糖尿病腎病大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激的水平，減輕腎臟組織病理改變，從而達(dá)到延緩糖尿病腎病的目的，其具體的作用機(jī)制尚不十分明確。目前國(guó)內(nèi)外的研究主要集中在GLP-1類似物的降糖作用及對(duì)胰島細(xì)胞的保護(hù)作用，對(duì)腎臟作用的研究還不夠深入，而這項(xiàng)工作的開展可能會(huì)為糖尿病腎病的預(yù)防及治療提供新的思路。

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