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    淺談L—天冬酰胺酶與其重組表達載體的研究

    2019-10-20 03:21王遠锏黃浩勝陳震宇
    科學導報·科學工程與電力 2019年12期
    關鍵詞:宿主癌細胞活性

    王遠锏 黃浩勝 陳震宇

    【摘 要】來自于細菌和真菌等微生物的L-天冬酰胺酶通過切斷癌細胞L-天冬酰胺的來源實現(xiàn)治療癌癥,本身存在如低毒性、致敏性等問題。使用的重組表達載體將具有無谷氨酰胺酶活性L-天冬酰胺酶提取并生產(chǎn),擴大L-天冬酰胺酶表達能力并提高其工業(yè)化生產(chǎn)潛力。

    【關鍵詞】L-天冬酰胺酶;重組表達載體;

    1 結構、性質、作用機理

    癌細胞無法合成天冬酰胺而從周圍細胞中獲取。L-天冬氨酸酶降解L-天冬酰胺,切斷癌細胞L-天冬酰胺來源抑制癌細胞生長。大腸桿菌中細胞質中表達L-天冬酰胺酶I組成型,具有低速水解L-天冬酰胺(L-Asn)與L-谷氨酰胺(L-Gln)的能力;在缺氧條件下,大腸桿菌周質空腔中積累形成包涵體,具有抗蛋白酶、對宿主毒性小、容易富集純化等優(yōu)點。L-天冬酰胺酶II為4亞基同聚體,該酶的四聚體形態(tài)具有活性,活性中心包括Lys、Cys、His三個氨基酸。細菌來源的L-天冬酰胺酶具有少量的谷氨酰胺酶活性,易產(chǎn)生過敏與超敏反應、血栓及出血等副作用,對肝臟毒害較大。

    2 來源與生產(chǎn)

    L-天冬酰胺酶在多種微生物體內均有表達,大腸桿菌是天冬酰胺酶藥物最初來源,其L-天冬酰胺酶表達系統(tǒng)研究較為清楚。根據(jù)L-天冬酰胺酶II基因表達與ansB啟動子有關[1],受cAMP受體蛋白正調控與厭氧負調控。當胞內為低水平葡萄糖含量,cAMP含量升高,cAMP-cAMP受體蛋白復合物含量增加并結合ansB啟動子中CAP結合位點,σ70RNA聚合酶與啟動子結合強度提高,基因表達水平上升。除了大腸桿菌之外,真菌也是研究生產(chǎn)L-天冬酰胺酶的對象,Vijay[2]使用土曲霉MTCC1782作為培養(yǎng)對象生產(chǎn)L-天冬酰胺酶,產(chǎn)物產(chǎn)量與安全性都有提高。

    3 L-天冬酰胺酶重組表達體系

    在L-天冬酰胺酶的生產(chǎn)體系中主要包括大腸桿菌表達系統(tǒng)、枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)、巴斯德畢赤酵母菌表達系統(tǒng)。低成本,高產(chǎn)量,生產(chǎn)周期短的大腸桿菌表達系統(tǒng)目前較為常用,梁毅偈等[3]完成了大腸桿菌Nissle1917L-天冬酰胺酶Ⅱ基因在大腸桿菌BL21中的表達,但產(chǎn)物無法正確折疊??莶菅挎邨U菌表達系統(tǒng)蛋白質分泌能力強,分泌蛋白純化難度低。Feng Y等[4]將基因與含p43強啟動子的表達載體pP43NMK重組并導入Bacillus subtilis WB600,在宿主菌中成功實現(xiàn)L-天冬酰胺酶II的重組表達。另外修改組合策略可提高L-天冬酰胺酶在宿主體內的表達水平。巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)可以對自身表達的蛋白質進行加工,生產(chǎn)的L-天冬酰胺酶更加安全,目前Nagarajan A[5]等人從內生真菌中成功篩選并分離到新型無谷氨酰胺酶L-天冬酰胺酶。酵母表達系統(tǒng)產(chǎn)可以適應高密度發(fā)酵,重組體系產(chǎn)品易于純化,是目前一種具有較高應用潛力的的L-天冬酰胺酶表達體系。

    參考文獻:

    [1] ?ebnem E,Hikmet G.Cloning,isolation and expression of l -asparaginase gene(ansB)in different gram-negative bacteria expressing Vitreoscilla hemoglobin[J].Curr Opin Biotech,2011,22.

    [2] Vijay B,Raju K J.Production of L-asparaginase by Aspergillus terreus MTCC 1782 under solid state fermentation using pearl millet and finger millet as mixed substrate[J]J Chem,Biol Phys Sci.2015,5(1):366-377.

    [3] 梁毅偈,孫運軍,胡勝標,等.大腸桿菌Nissle1917L-天冬酰胺酶Ⅱ基因在大腸桿菌BL21中的表達與抗腫瘤活性[J].微生物學通報,2014,41(4):607-613.

    [4] Feng Y,Liu S,Jiao Y,et al. Enhanced extracellular production of L-asparaginase from Bacillus subtilis 168 by B.Subtilis WB600 through a combined strategy[J]Appl Microbiol Biot.2017,101(4):1509-1520.

    [5]Nagarajan A,Thirunavukkarasu N,Suryanarayanan T S,et al.Screening and isolation of novel glutaminase free L-asparaginase from fungal endophytes[J] Res J Microbiol.2014,9(4):163-176.

    (作者單位:華南師范大學(石牌校區(qū))生命科學學院)

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