阿替洛爾片溶出度測(cè)定方法的改進(jìn)

劉志杰，李東輝，王 鑫

（北京市海淀區(qū)食品藥品安全監(jiān)控中心，北京 100094）

阿替洛爾在生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS）中屬Ⅲ類，即高溶解性、低滲透性藥物。2015年版《中國(guó)藥典（二部）》中阿替洛爾片的溶出度測(cè)定方法為紫外分光光度（UV）法，但在實(shí)際檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，有些產(chǎn)品含量測(cè)定結(jié)果不高，而溶出度測(cè)定值卻超過(guò)120%。在溶出度測(cè)定中，雖然自動(dòng)取樣系統(tǒng)和濾膜多采用惰性材料，但在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)某些產(chǎn)品仍存在濾膜吸附現(xiàn)象[1-2]，致使結(jié)果變低。該現(xiàn)象一般可通過(guò)增加初濾液體積解決。本研究中建立了高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定阿替洛爾片的溶出度，并與UV法進(jìn)行了比較，且對(duì)原方法的不合理高值進(jìn)行了探討。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XS205DU型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；1260型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測(cè)器（DAD，美國(guó) Agilent公司）；TU-1901型紫外分光光度計(jì)（北京普析通用責(zé)任有限公司）；RC-8MD型智能溶出儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

阿替洛爾對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為 100117-201105，純度 99.8%）；阿替洛爾片（A 廠，批號(hào)分別為 161202，180104，180301，規(guī)格為 12.5 mg；B 廠，批號(hào)為 20161230，規(guī)格為 25 mg）；甲醇、磷酸、辛烷磺酸鈉均為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[3-4]

色譜柱:Waters Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀 6.8 g，辛烷磺酸鈉 1.3 g，加水溶解并稀釋至 1000 mL，用磷酸調(diào) pH 至 3.0）-甲醇（70 ∶30，V／V）；檢測(cè)波長(zhǎng):226 nm；柱溫:30 ℃；流速:1.0 mL ／min；進(jìn)樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液:稱取阿替洛爾對(duì)照品9.94 mg，精密稱定，置 100 mL容量瓶中，用溶出介質(zhì)[（9→1000）鹽酸溶液]溶解并定容，作對(duì)照品貯備液，精密量取2 mL，用溶出介質(zhì)溶解并定容至20 mL，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作對(duì)照品溶液。

供試品溶液:按2015年版《中國(guó)藥典（二部）》阿替洛爾片項(xiàng)下方法制備溶出液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下2種溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，在此色譜條件下的色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果，待測(cè)成分峰峰形對(duì)稱，對(duì)稱因子為1.07；待測(cè)成分峰與其他峰可達(dá)到基線分離，分離度大于2.0，理論板數(shù)按阿替洛爾峰計(jì)不低于7000。

圖1 高效液相色譜圖

專屬性試驗(yàn):分別取2個(gè)廠家的樣品，依法制備供試品溶液20 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果主成分與各有關(guān)物質(zhì)能完全分離，分離度大于2.0。利用DAD進(jìn)行峰純度分析，阿替洛爾峰純度因子大于980，表明符合定量要求。

線性關(guān)系考察:分別取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液10，15，20，25，30 μL 進(jìn)樣（每個(gè)進(jìn)樣量梯度連續(xù)進(jìn)樣 3 次，取平均值）測(cè)定，以進(jìn)樣量（，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1934.3X+0.6，R2=0.9999（n=5）。結(jié)果表明，阿替洛爾進(jìn)樣量在0.0994 ～0.2982 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取同一供試品溶液20 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的RSD為0.50%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，室溫下分別于放置 0，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣 20 μL，測(cè)定。結(jié)果阿替洛爾峰面積基本保持不變，RSD為0.82%（n=5），表明室溫下供試品溶液放置8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取溶出樣品溶液，室溫下分別于放置0，2，4，6,8 h 時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定，結(jié)果阿替洛爾峰面積基本保持不變，RSD為0.78%（n=5），表明室溫下供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

回收試驗(yàn):阿替洛爾片溶出度的法定限度[3]為標(biāo)示量的70%，故選擇回收率的體積分?jǐn)?shù)梯度分別為50%，70%，100%。按阿替洛爾片處方配置空白輔料，精密稱定9份，置500 mL容量瓶中，分別精密加入質(zhì)量濃度為0.5012 g／L 的阿替洛爾對(duì)照品溶液 5，7，10 mL，各3份，用溶出介質(zhì)溶解并定容，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.4 樣品溶出度測(cè)定

取樣品（批號(hào)為161202）6片，按2015年版《中國(guó)藥典（二部）》溶出條件制備溶出液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣20 μL分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算溶出度。同時(shí)，采用UV法測(cè)定樣品溶出度。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 2種方法測(cè)定阿替洛爾片溶出度結(jié)果比較（%）

3 討論

2015年版《中國(guó)藥典（二部）》中阿替洛爾片的溶出度檢測(cè)采用UV法。按法定方法測(cè)定阿替洛爾片的含量為97.9%，而溶出百分含量卻超出120%，結(jié)果不合理。因該制劑的適應(yīng)面局限，本中心共抽到2個(gè)廠家4批次樣品，所有批次的溶出度均出現(xiàn)不同程度的不合理高值。按本研究中方法進(jìn)行測(cè)定，溶出度值均顯著降低。

對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，阿替洛爾在226 nm與275 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，且226 nm波長(zhǎng)處的吸光度約為275 nm波長(zhǎng)處的8倍，故UV法測(cè)定阿替洛爾片含量時(shí)均選用226 nm波長(zhǎng)。提取溶出樣品中雜質(zhì)的光譜圖，此雜質(zhì)在226 nm波長(zhǎng)處具有很強(qiáng)的末端吸收。對(duì)于沒(méi)有分離功能的UV法，無(wú)法排除雜質(zhì)的干擾，測(cè)定值常虛高，無(wú)法反映溶出樣品本身效果，存在較大的質(zhì)控風(fēng)險(xiǎn)。比較發(fā)現(xiàn)，對(duì)于UV法測(cè)定溶出度值較高的溶出樣品，其液相色譜的雜質(zhì)峰面積也相應(yīng)較大。

為進(jìn)一步探討阿替洛爾片溶出樣品中的雜質(zhì)，以溶出介質(zhì)配制相同質(zhì)量濃度的樣品溶液，按本研究方法測(cè)定，并未檢出此雜質(zhì)。這說(shuō)明該雜質(zhì)并非是藥物輔料或溶出介質(zhì)引入，而是溶出過(guò)程中新產(chǎn)生的物質(zhì)。與穩(wěn)定性試驗(yàn)不同的是，溶出過(guò)程是在37℃下進(jìn)行，溶出樣品在自動(dòng)收集系統(tǒng)中與管路充分接觸，這些都增加了新物質(zhì)產(chǎn)生的可能性。有文獻(xiàn)報(bào)道，阿替洛爾原料與某些輔料或輔料中的雜質(zhì)存在相容性問(wèn)題[5-6]，溶出過(guò)程的特殊環(huán)境是否啟動(dòng)了某些化學(xué)反應(yīng)還有待進(jìn)一步研究。綜上所述，本研究中建立的阿替洛爾片溶出度測(cè)定方法，簡(jiǎn)單，快速，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可有效控制阿替洛爾片的溶出效果。