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    提取核桃蛋白關鍵參數(shù)的優(yōu)化

    2019-10-18 09:24:13李亞萍
    江蘇農(nóng)業(yè)科學 2019年15期
    關鍵詞:單因素試驗正交試驗核桃

    李亞萍

    摘要:采用堿提酸沉法從核桃中提取蛋白質(zhì),應用單因素試驗和正交試驗對提取條件進行優(yōu)化。獲得最佳提取參數(shù)為料液比為1 g ∶ 30 mL,提取溫度為50 ℃,堿提pH值為8.0,酸沉pH值為4.0,核桃蛋白提取率可達12.15%。

    關鍵詞:核桃;蛋白質(zhì);堿提酸沉法;提取參數(shù);單因素試驗;正交試驗

    中圖分類號: TS255.6

    文獻標志碼: A

    文章編號:1002-1302(2019)15-0224-02

    核桃中含有豐富的營養(yǎng)成分,其中油脂含量占比達 40%~65%,蛋白質(zhì)含量占比達14%~17%[1-4]。研究發(fā)現(xiàn),核桃蛋白中含有清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白4種蛋白質(zhì),分別占蛋白質(zhì)總量的6.81%、17.57%、5.33%、70.11%[5]。這些蛋白中就含有18種氨基酸,其中8種是人類生命得以存在所必需的氨基酸,且其中精氨酸、谷氨酸、組氨酸、酪氨酸含量在植物蛋白類中相對較高[6],這些成分都是人體組織細胞代謝不可或缺的重要物質(zhì),長時間食用可以對冠心病起到一定的預防作用[7-9]。安康核桃表現(xiàn)為果質(zhì)良、易取仁、仁色淺、飽滿、風味香、殼薄、出仁率高,其中蛋白質(zhì)含量以及脂肪含量和其他核桃相比較高。本研究采用堿提酸沉法提取核桃中的蛋白質(zhì),優(yōu)點是操作過程簡約,試驗條件易于控制,且成本低廉。

    1 材料與方法

    1.1 儀器、試劑及材料

    MODEL0406-1離心機,上海醫(yī)療器械(集團)有限公司手術(shù)器械廠生產(chǎn);SY2200-T超聲波清洗機,上海聲源超聲波儀器設備有限公司生產(chǎn);1765半微量定氮蒸餾裝置,上海昕滬實驗設備有限公司生產(chǎn)。試驗所用試劑均為分析純。核桃采自陜西安康地區(qū)的山地核桃。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 核桃蛋白的提取 篩選安康優(yōu)質(zhì)核桃,稱取10 g,粉碎,加入1 ∶ 1(質(zhì)量比)的纖維素酶和果膠酶,超聲波提取 30 min、滅酶,使用離心機離心30 min,2 000 r/min,烘干,接著加入適量的NaOH溶液并在不同的溫度下水浴攪拌 65 min,再次利用離心機離心 30 min,然后加入鹽酸,調(diào)節(jié)pH值,使其出現(xiàn)絮狀沉淀,然后離心30 min,洗滌沉淀2~3次,干燥,得到核桃蛋白。操作過程見圖1。

    1.2.2 核桃蛋白含量的測定 參照GB 5009.5—2016《食品安全國家標準食品中蛋白質(zhì)的測定》[10],以凱氏定氮法測定

    核桃中蛋白質(zhì)的含量,并計算蛋白提取率。

    1.3 堿提核桃蛋白的單因素試驗

    1.3.1 pH值的優(yōu)化 固定料液比為1 g ∶ 20 mL、提取溫度為 45 ℃,依次調(diào)節(jié)NaOH溶液的pH值為7.0、7.5、8.0、8.5、9.0,浸提65 min后,計算核桃蛋白的提取率。

    1.3.2 提取溫度的優(yōu)化 固定NaOH溶液的pH值為8.0、料液比為1 g ∶ 20 mL,分別在溫度為35、40、45、50、55 ℃條件下各浸提65 min,計算核桃蛋白的提取率。

    1.3.3 料液比的優(yōu)化 固定提取溫度為50 ℃、堿液pH值為8.0,依次以1 ∶ 10、1 ∶ 20、1 ∶ 30、1 ∶ 40、1 ∶ 50(g ∶ mL)為料液比浸提65 min,計算核桃蛋白的提取率。

    1.4 堿提核桃蛋白的正交試驗

    按表1所示的影響因素設計正交試驗,正交試驗結(jié)果見表2,對核桃蛋白堿提的各因素進行綜合優(yōu)化,確定最佳的提取參數(shù)。

    1.5 蛋白酸沉pH值的確定

    在最佳堿提條件下,加入鹽酸依次調(diào)節(jié)核桃蛋白溶液的pH值為3.5、4.0、4.5,接著測定核桃蛋白質(zhì)的含量,并計算其沉淀率和得率,確定最佳酸沉pH值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 堿液pH值對核桃蛋白提取率的影響

    在固定料液比1 g ∶ 20 mL、提取溫度45 ℃條件下,調(diào)節(jié)不同的pH值。

    從圖2可以看出,在7.0

    2.2 提取溫度對核桃蛋白提取率的影響

    固定1 g ∶ 20 mL的料液比、pH值為8.0,改變不同溫度。從圖3可以看出,在提取溫度低于50 ℃時,蛋白提取率隨著溫度的升高而增大,當溫度為50 ℃時,蛋白的提取率最大。50 ℃之后核桃蛋白提取率反而開始減小,是因為溫度越高蛋白質(zhì)變性越嚴重,還有可能是蛋白質(zhì)與雜質(zhì)黏合所致。

    2.3 料液比對核桃蛋白提取率的影響

    固定提取溫度為50 ℃、堿液pH值為8.0,改變不同的料液比。從圖4可以看出,當料液比<1 g ∶ 30 mL時,核桃蛋白的提取率會隨著料液比的增加而增大,且變化幅度較大。當料液比為1 g ∶ 30 mL時,核桃蛋白的提取率最大。料液比>1 g ∶ 30 mL 時,提取率反而減小,但變化幅度不大??紤]到加水量增加會導致蛋白分離時間大幅加長,同時必然會增加設備負荷,這就需要投入更多的設備,所以選擇料液比為 1 g ∶ 30 mL 較為合適。

    2.4 正交試驗

    以單因素試驗所得數(shù)據(jù)為依據(jù),對核桃蛋白提取條件進行正交試驗。從表2可以看出,核桃蛋白提取率的影響程度依次為 A>C>B,最佳水平組合為A2B2C3。核桃蛋白的最佳提取工藝參數(shù)為:堿提pH值為8.0、提取溫度為50 ℃、料液比為 1 g ∶ 30 mL,提取率最高可達12.15%。

    2.5 核桃蛋白酸沉最佳條件的確定

    分別調(diào)節(jié)pH值為3.5、4.0、4.5,測定蛋白質(zhì)的含量,計算沉淀率和得率,得到的酸沉試驗結(jié)果見表3。

    3 結(jié)論

    通過單因素試驗和正交試驗研究結(jié)果,核桃蛋白質(zhì)的最佳提取工藝參數(shù)為料液比1 g ∶ 30 mL,提取溫度50 ℃,堿提和酸沉的pH值分別為8.0、4.0,在該工藝條件下,核桃蛋白的提取率可達12.15%。采用堿提酸沉法提取核桃蛋白,不僅提高了蛋白的提取率,還降低了蛋白質(zhì)的變性比率,保證了蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和色澤。若進行核桃蛋白的深加工,比如蛋白飲料、多肽口服液,則核桃的附加值會大幅提高。所以應加大其深加工產(chǎn)品的開發(fā)力度,推廣高純度核桃蛋白產(chǎn)品在醫(yī)藥、食品工業(yè)上的應用。

    參考文獻:

    [1]郭 旭. 漢濱區(qū)核桃產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀,問題與對策研究[D]. 楊凌:西北農(nóng)林科技大學,2016.

    [2]恩斯明格. 《食物與營養(yǎng)百科全書》選集(5)[M]. 北京:農(nóng)業(yè)出版社,1989.

    [3]恩斯明格. 《食物與營養(yǎng)百科全書》選集(1)[M]. 北京:農(nóng)業(yè)出版社,1989.

    [4]李正明. 植物蛋白生產(chǎn)工藝與配方[M]. 北京:中國輕工業(yè)出版社,1998.

    [5]張慶祝,丁曉雯,陳宗道,等. 核桃蛋白質(zhì)研究進展[J]. 糧食與油脂,2003(5):21-23.

    [6]姜榮慶. 復合酶提取山核桃油及副產(chǎn)物綜合利用的研究[D]. 長春:吉林農(nóng)業(yè)大學,2011.

    [7]Pereira J A,Oliveira I,Sousa A,et al. Bioactive properties and chemical composition of six walnut (Juglans regia L.) cultivars[J]. Food and Chemical Toxicology,2008,46(6):2103-2111.

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    [10]國家衛(wèi)生和健康委員會,國家食品藥品監(jiān)督管理總局. 食品安全國家標準 食品中蛋白質(zhì)的測定:GB 5009.5—2016[S]. 北京:中國標準出版社,2016.肖 嵐,李 誠,程小平,等. 牦牛血抗氧化低聚肽的穩(wěn)定性及與其他食源性低聚肽抗氧化互作分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學,2019,47(15):226-232.

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