分析MAP與生理鹽水洗滌紅細胞質(zhì)量

陳瀅芬

廣東省佛山市中心血站南海血站 528000

洗滌紅細胞在臨床可用于治療各種自身免疫性疾病、肝腎功能障礙等患者中，其是使用特定的方法將保存期內(nèi)全血、懸浮紅細胞使用大量等滲溶液進行洗滌，去除血漿成分和非紅細胞成分，并將紅細胞懸浮在添加液中制備成紅細胞成分血[1]。目前臨床對洗滌紅細胞經(jīng)典制備方法為洗滌完成后使用氯化鈉懸浮，但是保存時間短，僅為24h[2]。MAP即枸櫞酸鈉—枸櫞酸—葡萄糖—磷酸二氫鈉—氯化鈉—腺嘌呤—甘露醇，是目前研究較多的關(guān)于洗滌紅細胞制備液，但是研究多局限在洗滌紅細胞質(zhì)量和存儲時間方面，并沒有凸顯出其優(yōu)勢[3]，因此本研究選取100袋血液標本進行本次研究，分析MAP液與生理鹽水洗滌紅細胞質(zhì)量，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 抽取2018年2月—2019年2月保存期內(nèi)的懸浮少量白細胞紅細胞2U共100袋進行本次研究，使用無菌接駁機分為兩組，每份均為1U。其中一組制備生理鹽水洗滌紅細胞(生理鹽水組)，一組使用MAP液洗滌紅細胞(MAP組)。生理鹽水洗滌液組成成分為氯化鈉9g/L，來源于成都青山利康藥業(yè)有限公司。MAP液成分包括：枸櫞酸鈉1.5g/L、枸櫞酸0.2g/L、葡萄糖7.93g/L，磷酸二氫鈉0.94g/L、氯化鈉4.97g/L、腺嘌呤0.14g/L、甘露醇14.57g/L，來源于四川南格爾生物醫(yī)學股份有限公司。

1.2 選擇標準 納入標準：(1)所有血液均來自于當?shù)匮?，均為健康獻血者；(2)獻血者丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、抗HCV、HB-aAg、抗HIV及梅毒抗體均符合獻血要求；(3)標本采集時間在10d以內(nèi)；(4)離心后無溶血和異常凝集的發(fā)生；(5)不規(guī)則抗體篩查為陰性；(6)直接抗球蛋白試驗結(jié)果為陰性。排除標準：(1)不合格標本；(2)采集時間超過10d的血標本。

1.3 方法 (1)MAP組洗滌過程：將生理鹽水100ml/U轉(zhuǎn)移到待分離的空袋內(nèi)進行稱重，并分別加入MAP組懸浮少白細胞紅細胞中，注意旋轉(zhuǎn)搖動，促進生理鹽水與血漿蛋白、聚集貼壁的白膜進行混勻，便于后續(xù)洗滌。隨后稱取第二次加入的鹽水并確保鹽水量準確。于3 500r/min進行高速離心，溫度為4℃，時間為8min，離心完成后進行分離。操作者左手持分漿夾，使用右手拇指和食指沿著白膜流出方向推送，直至管口，并注意攔截紅細胞，避免將過多的紅細胞隨白膜層擠出。反復洗滌2次，加入MAP紅細胞保存液，劑量為50ml/U。(2)生理鹽水組洗滌過程： 生理鹽水稱重完成后加入到生理鹽水組的懸浮少白細胞紅細胞中，其余操作與MAP組相同。最后加入生理鹽水50ml/U，制備洗滌紅細胞。

1.4 觀察指標 觀察兩組洗滌紅細胞質(zhì)量，參照中華人民共和國全血及成分血質(zhì)量要求(GB18469-2012)，分析對比血紅蛋白含量、上清蛋白含量及溶血率[4]。其中血紅蛋白含量使用血細胞計數(shù)儀進行測定，上清蛋白含量使用鄰苯三酚紅鉬絡合顯色法和分光光度計進行測定，溶血率使用Trinder法及分光光度計測定。觀察兩組洗滌紅細胞的腺苷酸含量。將樣本進行血細胞分析儀計數(shù)，并取樣本紅細胞500μl與三蒸水500μl進行充分混合，觀察紅色透明后加入高氯酸HCIO4，劇烈震蕩后，靜置10min離心，取上清液放入到離心管，加入碳酸鉀K2CO3進行中和，并使用pH試紙調(diào)整pH值為6.5～7.6之間，靜置10min后離心10min，并將沉淀去除，收集上清液500μl，使用高效液相色譜進行檢測。

2 結(jié)果

2.1 MAP及生理鹽水對洗滌紅細胞質(zhì)量的影響 MAP洗滌紅細胞與生理鹽水洗滌紅細胞的血紅蛋白含量、上清蛋白含量及溶血率對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 MAP及生理鹽水對洗滌紅細胞質(zhì)量檢測結(jié)果

注：血紅蛋白含量國標為18g以上，上清蛋白含量國標為0.5g以下，溶血率低于紅細胞總量0.8%。

2.2 MAP及生理鹽水對洗滌紅細胞內(nèi)腺苷酸含量對比 MAP組洗滌紅細胞內(nèi)ATP及ADP含量高于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；MAP組洗滌紅細胞AMP低于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

3 討論

洗滌液在洗滌紅細胞中占有重要的角色，傳統(tǒng)的生理鹽水成分較為簡單，不能為紅細胞的代謝提供能量底物，且不含有緩沖液，無法調(diào)節(jié)酸堿平衡，因此目前研究認為生理鹽水洗滌可能會使紅細胞產(chǎn)生形態(tài)及功能損傷，甚至可能損害紅細胞特性，引起紅細胞破壞等[5]。且生理鹽水中大量的鈉離子和氯離子也會對紅細胞產(chǎn)生一定的不良影響。因此如何有效調(diào)節(jié)洗滌紅細胞存儲液pH值、補充能量代謝底物、調(diào)節(jié)存儲液的滲透壓平衡并加入保護性分子，減少氧化損傷為減少紅細胞體外存儲性損傷的研究重點[6]。

表2 MAP及生理鹽水對洗滌紅細胞內(nèi)

MAP液是紅細胞保存液，其包括枸櫞酸—枸櫞酸鈉—葡萄糖—磷酸二氫鈉CPD、葡萄糖—腺嘌呤—甘露醇—氯化鈉SAGM兩部分，并通過添加甘露醇的濃度，有效提高添加液的穩(wěn)定性，形成新的紅細胞保存液[7]。MAP中含有的葡萄糖和腺嘌呤可以為紅細胞提供能量底物，而甘露醇則可以作為一個紅細胞膜的抗氧化劑及紅細胞膜穩(wěn)定劑，枸櫞酸及枸櫞酸鈉緩沖可以調(diào)節(jié)pH值，而磷酸二氫銨則可以避免紅細胞聚集，并為紅細胞能量代謝提供磷酸鹽，有效延緩2,3-DPG下降[8]。此外，氯化鈉的含量減少，既可以有效地提供鈉離子，又可以將溶液的滲透壓調(diào)整為等滲溶液。從本次研究結(jié)果也可以看出，MAP洗滌紅細胞與生理鹽水洗滌紅細胞的血紅蛋白含量、上清蛋白含量及溶血率對比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明MAP有利于洗滌紅細胞的存儲，其與生理鹽水液同樣具有較好的效果。

研究認為成熟紅細胞的結(jié)構(gòu)較為簡單，不含有線粒體和細胞核等其他細胞器，而代謝是維持紅細胞形態(tài)及功能，維系紅細胞抵御外界因素的基礎(chǔ)[9]。紅細胞的代謝途徑包括有磷酸戊糖途徑、糖酵解途徑及2,3-DPG途徑，其中95%左右為后兩者代謝。糖酵解能夠為紅細胞獲取ATP，2,3-DPG途徑則可以調(diào)節(jié)血紅蛋白的攜氧能力，磷酸戊糖途徑能夠產(chǎn)生氫離子及NADPH，并維持谷胱甘肽還原態(tài)，保護紅細胞膜及酶蛋白，避免氧化發(fā)生，維持紅細胞功能[10]。MAP液中葡萄糖可以為糖酵解提供所必需的物質(zhì)，且腺嘌呤能夠參與糖酵解中，或合成AMP，進而促進ATP的形成；同時枸櫞酸鈉及枸櫞酸緩沖對還可以為糖酵解提供相對平穩(wěn)的環(huán)境[11]。

使用MAP液可以保存紅細胞，并減少紅細胞的破壞，進而保護紅細胞功能。從本次研究結(jié)果可以看出， MAP組洗滌紅細胞內(nèi)ATP及ADP含量高于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；MAP洗滌紅細胞AMP低于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。說明MAP溶液能夠更好地維持紅細胞的能量。尤其是ATP含量較高，有助于提高紅細胞的變形能力，其可以維持紅細胞內(nèi)的低鈣狀態(tài)。如ATP水平過低則可能會導致紅細胞內(nèi)鈣離子聚集和沉淀在紅細胞膜，導致膜僵硬，引起紅細胞變形能力降低。

綜上所述，MAP洗滌紅細胞質(zhì)量穩(wěn)定，且符合國家標準，并較好地維持了腺苷酸能量，適合應用于臨床。