N-α-乙?；D(zhuǎn)移酶10蛋白在宮頸癌中的表達(dá)及與患者臨床特征的關(guān)系

張曉婷，韓銳，王軍#

1新疆維吾爾自治區(qū)計劃生育科學(xué)技術(shù)研究所/新疆維吾爾自治區(qū)生殖健康醫(yī)院檢驗科，烏魯木齊830001

2新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心產(chǎn)前診斷科，烏魯木齊830054

高危型人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持續(xù)性感染是宮頸癌發(fā)生的主要因素，但宮頸癌的發(fā)生及發(fā)展與多種基因、多個階段、多種信號通路的共同參與密切相關(guān)[1-4]。N-α-乙?；D(zhuǎn)移酶 10（N-α-acetyltransferase 10，NAA10）基因是一種新型的乙?；D(zhuǎn)移酶基因，定位于人染色體的Xq28區(qū)域，能夠編碼含有235個氨基酸的N-α-乙?；D(zhuǎn)移酶10蛋白（N-α-acetyltransferase 10 protein，NAA10p）[5-6]。NAA10p在結(jié)腸癌、胰腺癌、乳腺癌和口腔鱗狀細(xì)胞癌等腫瘤組織中過表達(dá)，影響著腫瘤的不同階段[7-8]。而NAA10p在宮頸癌組織中的表達(dá)尚未見報道，因此，本研究探討NAA10p在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年11月至2018年10月新疆維吾爾自治區(qū)計劃生育科學(xué)技術(shù)研究所收治的宮頸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為宮頸癌；②臨床及隨訪資料完整；③術(shù)前均未接受放、化療及生物治療等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并心血管和內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病患者。根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入38例宮頸癌患者，年齡43～71歲，中位年齡55.6歲，＜50歲21例，≥50歲17例；腫瘤直徑：≥4 cm 23例，＜4 cm 15例；按2009年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期：Ⅰa期18例，Ⅰb～Ⅱa期20例；分化程度：高分化8例，中分化12例，低分化18例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例。取38例宮頸癌患者的宮頸癌組織和相應(yīng)的癌旁正常組織（距離腫瘤病灶邊緣＞4 cm的正常組織）。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

石蠟包埋并連續(xù)切成4 μm厚度的切片，二甲苯Ⅰ和Ⅱ溶液中各浸泡10 min脫蠟，在梯度（100%、95%、90%、80%和70%）乙醇中各浸泡5 min脫水，3%雙氧水于室溫避光10 min滅活內(nèi)源性過氧化物酶，放入枸櫞酸鈉緩沖液中加熱30 min進(jìn)行抗原修復(fù)。滴加山羊血清進(jìn)行非特異性封閉，37℃孵育15 min。用濾紙吸去封閉液，滴加一抗，放入濕盒，4℃孵育過夜；滴加二抗，37℃孵育1 h，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，中性樹脂中封片。

1.3 結(jié)果判定

NAA10p蛋白定位于細(xì)胞質(zhì)，呈淺黃色、棕黃色或棕褐色表達(dá)。根據(jù)細(xì)胞染色程度進(jìn)行評分：未染色計0分，淺黃色染色計1分，棕黃色染色計2分，棕褐色染色計3分。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評分：先在100倍光鏡下掃視整個組織切片，選取5個細(xì)胞密度高的區(qū)域，然后在400倍光鏡下計數(shù)5個區(qū)域中陽性細(xì)胞所占比例并進(jìn)行評分，陽性細(xì)胞所占比例＜25%計1分，陽性細(xì)胞所占比例為25%～49%計2分，陽性細(xì)胞所占比例為50%～74%計3分，陽性細(xì)胞所占比例≥75%計4分。將染色程度與陽性細(xì)胞所占比例評分相乘，0～2分為陰性表達(dá)，≥3分為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用Fisher確切概率法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NAA10 p表達(dá)情況的比較

宮頸癌組織中NAA10p的陽性表達(dá)率為73.68%（28/38），明顯高于癌旁正常組織的23.68%（9/38），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中NAA10 p的表達(dá)情況

不同年齡、腫瘤直徑宮頸癌患者宮頸癌組織中NAA10p陽性表達(dá)率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。分化程度為中高分化、FIGO分期為Ⅰb～Ⅱa期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者宮頸癌組織中NAA10p陽性表達(dá)率均高于低分化、FIGO分期為Ⅰa期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中NAA10 p的表達(dá)情況（n=38）

3 討論

NAA10是1985年從釀酒酵母中發(fā)現(xiàn)的一種乙?；D(zhuǎn)移酶，NAA10基因與人類細(xì)胞中的基因有40%的同源性，含7個外顯子，能夠編碼由235個氨基酸組成的蛋白質(zhì)NAA10p，主要通過45～130氨基酸位點發(fā)揮其乙?；D(zhuǎn)移酶的功能[5-6]，并在多種腫瘤組織中過表達(dá)，影響著腫瘤的不同階段[7-8]。Yu等[9]研究證實胰腺癌、乳腺癌、胃癌和肺癌等組織中NAA10p相對表達(dá)量均明顯高于癌旁正常組織，且腫瘤組織中NAA10p陽性表達(dá)率達(dá)52.3%，在癌旁組織中NAA10p陽性表達(dá)率為31.5%。Zeng等[10]研究已證實，乳腺癌組織中NAA10p及NAA10mRNA水平高于癌旁正常組織，還證實了NAA10p的表達(dá)與患者的FIGO分期、總生存期及無病生存期密切相關(guān)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌、肺癌和乳腺癌組織中NAA10p陽性表達(dá)率均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織。鄭軍等[11]研究表明口腔正常黏膜組織、白斑及口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的NAA10p陽性表達(dá)率依次升高，且NAA10p的表達(dá)水平與口腔鱗狀細(xì)胞癌組織的分化程度、FIGO分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，NAA10p在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為73.68%，明顯高于癌旁正常組織的23.68%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），表明NAA10p在宮頸癌中的表達(dá)水平較高。分化程度為中高分化、FIGO分期為Ⅰb～Ⅱa期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者宮頸癌組織中NAA10p陽性表達(dá)率均高于分化程度為低分化、Ⅰa期和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這些結(jié)果充分表明了NAA10p在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中起著重要作用，可能成為患者診斷的有效標(biāo)志物。

目前，研究認(rèn)為NAA10p通過調(diào)節(jié)分子信號通路顯著抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲作用。當(dāng)miRNA-342-5p及miRNA-608過表達(dá)能靶向下調(diào)結(jié)腸癌SW480、SW620細(xì)胞中NAA10p的表達(dá)，進(jìn)而顯著抑制腫瘤細(xì)胞的生長[12]。NAA10p能夠促進(jìn)IκB激酶β（inhibitor kappa B kinase β，IKKβ）介導(dǎo)的乳腺癌生成[13]。Xu等[14]的微陣列分析實驗表明，髓細(xì)胞白血病1（myeloid cell leukemia 1，MCL1）基因是NAA10下游的靶基因之一，NAA10正向調(diào)節(jié)MCL1的表達(dá)，而敲除NAA10可降低MCL1表達(dá)，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。NAA10p也可通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶2（matrixmetalloproteinase 2，MMP2）的降解進(jìn)而促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞遷移[15]。以上研究說明NAA10p能夠通過MCL1和MMP2等信號通路促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長與侵襲，這些機(jī)制的探討有助于本課題組下一步的研究。

綜上所述，NAA10p在宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率高于癌旁正常組織，分化程度為中高分化、FIGO分期Ⅰb～Ⅱa期和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者的宮頸癌組織中NAA10p陽性表達(dá)率較高，可作為判斷宮頸癌發(fā)生發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的參考指標(biāo)。未來需要進(jìn)一步深入研究，期望NAA10p可以成為宮頸癌基因治療的有效靶點之一。