乳腺癌組織長(zhǎng)鏈非編碼RNA UCA1和BCAR4表達(dá)與輔助化療效果的相關(guān)性研究 *

王 碧，吉茂禮

(1.陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西咸陽(yáng) 712000；2.商洛市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西商洛 726000)

輔助化療可以使一部分乳腺癌患者獲得病理學(xué)完全緩解，延長(zhǎng)患者的生存期[1]。研究表明，長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)尿路上皮癌相關(guān)1(urothelial carcinoma-associated 1，UCA1)和乳腺癌雌激素耐受基因4(breast cancer anti-estrogen resistance 4，BCAR4)與乳腺癌化療的耐藥機(jī)制有關(guān)[2]。本研究采用實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技術(shù)分析30例乳腺癌患者組織UCA1和BCAR4的表達(dá)，旨在探討兩基因標(biāo)志物與乳腺癌輔助化療效果的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2016年12月～2018年12月在陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院和陜西省商洛市中心醫(yī)院接受輔助化療的局部晚期乳腺癌穿刺或活檢標(biāo)本30例進(jìn)行分析。年齡39～74歲，中位年齡52歲。依據(jù)化療效果分為有效組(20例)和無(wú)效組(10例)。所有患者均經(jīng)病理組織學(xué)診斷為原發(fā)性乳腺癌，患者白細(xì)胞>3 000×109/L，符合輔助化療標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：并發(fā)高血壓、糖尿病等慢性疾病，并發(fā)血液病或其他惡性腫瘤。本研究經(jīng)陜西省核工業(yè)二一五醫(yī)院和陜西省商洛市中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，并得到所有患者的知情同意。

1.2 試劑和儀器 RT-PCR引物以及RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒以及PCR試劑盒均購(gòu)自廣州復(fù)能基因有限公司。血清CA153水平檢測(cè)采用羅氏Modular○RP800生化分析儀。

1.3 方法 血清CA153水平檢測(cè)采用電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，參考值為0～25 ng/ml。組織UCA1和BCAR4表達(dá)檢測(cè)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)。

1.3.1 乳腺癌輔助化療：所有患者均行DA方案化療：多西他賽75 mg/m2，1次/3周，吡柔阿霉素50 mg/m2，1次/3周，環(huán)磷酰胺600 mg/m2，1次/3周，共化療6周。依據(jù)輔助化療的療效行保乳手術(shù)或乳房切除術(shù)。乳腺癌輔助化療療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[3]，完全緩解：腫瘤完全消失，包括腋窩淋巴結(jié)；部分緩解：最長(zhǎng)的腫瘤直徑減少30%；疾病進(jìn)展：最長(zhǎng)的腫瘤增長(zhǎng)20%或出現(xiàn)新的腫瘤轉(zhuǎn)移灶；無(wú)變化：所有情況無(wú)變化。完全緩解和部分緩解者被納入有效組，疾病進(jìn)展和無(wú)變化者被納入無(wú)效組。

1.3.2 標(biāo)本收集與處理：所有患者于輔助化療后采集空腹靜脈血4 ml，分離血清于-80℃保存，用于CA153水平檢測(cè)。收集輔助化療后的穿刺或活檢標(biāo)本，用于UCA1和BCAR4表達(dá)檢測(cè)。

1.3.3 RT-PCR：按照miRVana miRNA分離試劑盒說(shuō)明書操作，提取乳腺癌組織的總RNA。引物采用ABI公司Primer Express Softwarev2.0設(shè)計(jì)，由華大基因公司合成。以U6作為內(nèi)參照。BCAR4引物序列：F5’-CTGGTGTCGTGGA GTCGGCAATTCAGTGA-3’，R5’-GACCC AAIACGAGTCGGCAATTCAACT-3’。UCA1引物序列：F5’-CAAGGTTCATGACACTTGC-3’。R5’-GTCAATCCWCGCTGTAGCA-3’。U6引物序列：F5’-ACTTCTGAATGAGTGCTTCAG-3’，R5’-UGAAGCGCCTGGTGTTTAAACG-3’。PCR反應(yīng)條件：預(yù)變性95℃10 s，95℃10 s，60℃20s，72℃10s共40個(gè)循環(huán)。以2-△Ct求得UCA1和BCAR4的相對(duì)表達(dá)量，△Ct=目的基因循環(huán)數(shù)-U6的循環(huán)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 資料采用SPSS21.0軟件進(jìn)行分析。UCA1，BCAR4和CA153的異常率分析以及乳腺癌臨床病理特征分析采用χ2檢驗(yàn)，UCA1，BCAR4和CA153的表達(dá)或水平分析采用t檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Person法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織UCA1，BCAR4及血清CA153分析結(jié)果比較 見(jiàn)表1。與無(wú)效組比較，有效組組織UCA1，BCAR4表達(dá)和血清CA153水平顯著降低，有效組三標(biāo)志物的異常率也顯著降低。以上比較的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。乳腺癌輔助化療的有效率為66.6%。

表1 乳腺癌組織UCA1，BCAR4及血清CA153分析結(jié)果比較

2.2 相關(guān)分析 見(jiàn)表2。在乳腺癌輔助化療無(wú)效組中，組織UCA1和BCAR4表達(dá)呈正相關(guān)性(r=0.839，P<0.01)，兩標(biāo)志物分別與血清CA153水平呈正相關(guān)性(r=0.817～0.832，均P<0.01)。組織UCA1表達(dá)與乳腺癌患者的年齡無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，而與腫瘤組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性(均P<0.05)。BCAR4表達(dá)與乳腺癌患者的年齡和腫瘤組織學(xué)分級(jí)無(wú)相關(guān)性(均P>0.05)，而與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)。

表2 乳腺癌臨床病理特征分析(%)

3 討論

輔助化療可以使乳腺癌患者獲得病理學(xué)緩解，但仍然有一部分的患者面臨進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)，并可能因此失去保乳手術(shù)的機(jī)會(huì)[4]。研究表明lncRNA中的BCAR4和UCA1與乳腺癌化療的耐藥機(jī)制密切相關(guān)。VAN AGTHOVEN等[1]研究認(rèn)為BCAR4的高表達(dá)可能促進(jìn)雌激素依賴型乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，上調(diào)組織BCAR4表達(dá)可以增加乳腺癌細(xì)胞對(duì)雌激素的敏感性，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗。研究表明，人類表皮生長(zhǎng)因子受體(ErbB)是一種原癌基因，其在許多腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。組織中高表達(dá)的ErbB2和ErbB3可以刺激腫瘤細(xì)胞增殖，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性[5]。研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)人乳腺癌ZR-75-1細(xì)胞株內(nèi)的BCAR4表達(dá)可以促進(jìn)ErbB2和ErbB3的磷酸化，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)雌激素的依賴作用，進(jìn)而刺激腫瘤細(xì)胞的增殖[6]。有研究采用RT-PCR技術(shù)分析80例乳腺癌患者的結(jié)果顯示，BCAR4在乳腺癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁組織，而沉默BCAR4表達(dá)則可以抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲[7]。本研究結(jié)果顯示乳腺癌輔助化療有效組中BCAR4的基因表達(dá)較無(wú)效組顯著降低，BCAR4在有效組的異常率也顯著降低(P<0.01)。提示輔助化療可能降低乳腺癌細(xì)胞對(duì)雌激素的敏感性，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡。目前，有關(guān)BCAR4在乳腺癌輔助化療中的研究甚少，有待進(jìn)一步地深入研究。

最近的研究證實(shí)UCA1對(duì)乳腺癌呈現(xiàn)明顯的促癌作用，并且調(diào)控多種腫瘤細(xì)胞如非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌及肝癌細(xì)胞的化療敏感性。研究表明UCA1是乳腺癌的原癌基因，其在雌激素受體陽(yáng)性及陰性的乳腺癌細(xì)胞中均呈現(xiàn)較高的表達(dá)[8]。LIU等[9]研究發(fā)現(xiàn)UCA1表達(dá)與乳腺癌的病理分級(jí)和死亡率呈正相關(guān)性。他們的研究認(rèn)為UCA1通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路影響腫瘤細(xì)胞的化療敏感性，在他莫昔芬耐藥的腫瘤細(xì)胞中Wnt信號(hào)活性和UCA1表達(dá)明顯增加。最近的報(bào)道認(rèn)為，不均一核糖核蛋白Ⅰ可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞中UCA1的過(guò)表達(dá)，其作用機(jī)制可能為乳腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)的UCA1與p27競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合不均一核糖核蛋白Ⅰ，導(dǎo)致p27表達(dá)受到抑制，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[10]。LIU等[9]采用RT-PCR方法評(píng)估乳腺癌患者組織UCA1的表達(dá)，他們發(fā)現(xiàn)抑制UCA1表達(dá)則增強(qiáng)了乳腺癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性并誘導(dǎo)更多的癌細(xì)胞凋亡，提示UCA1可能與乳腺癌化療的耐藥機(jī)制有關(guān)。本研究分析30例乳腺癌患者的結(jié)果顯示，有效組UCA1的基因表達(dá)和異常率與無(wú)效組比較顯著下調(diào)(P<0.01)。提示輔助化療可以使乳腺癌患者獲得部分緩解或完全緩解，進(jìn)而延長(zhǎng)患者的生存期。

CA153已被公認(rèn)為乳腺癌的相關(guān)腫瘤標(biāo)志物，其在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯增高，并且在轉(zhuǎn)移病灶中也具有較高的異常率[11]。本研究的分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌輔助化療有效組血清CA153水平及異常率較無(wú)效組顯著降低(P<0.01)。進(jìn)一步地分析顯示UCA1和BCAR4表達(dá)有正相關(guān)性，且UCA1和BCAR4表達(dá)與CA153水平均有正相關(guān)性(P<0.01)。UCA1表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性(P<0.05)。BCAR4表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)。以上提示UCA1和BCAR4可能參與了乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展，其在乳腺癌組織中的差異性表達(dá)可以監(jiān)測(cè)輔助化療的效果。

綜上所述，UCA1和BCAR4表達(dá)可能與乳腺癌輔助化療的耐藥機(jī)制有關(guān)，下調(diào)UCA1和BCAR4表達(dá)可以促進(jìn)輔助化療的效果并有效緩解腫瘤的進(jìn)展。