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    益氣聰明湯加味對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

    2019-10-15 02:14:39李王杏安張獻(xiàn)文吉海杰蘇榮葉
    關(guān)鍵詞:記憶能力影響

    李王杏安 張獻(xiàn)文 吉海杰 蘇榮葉

    【摘要】目的 觀察益氣聰明湯加味對(duì)VD大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。方法 采用Pulsinelli四血管阻斷法復(fù)制大鼠全腦缺血模型,設(shè)模型組,假手術(shù)組,益氣聰明湯加味低、中、高(1 g/kg、2 g/kg和4 g/kg)劑量組,鹽酸多奈哌齊陽(yáng)性對(duì)照組(1.5 mg/kg),各組分別灌胃干預(yù)連續(xù)4周,Morris迷宮測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。結(jié)果 手術(shù)后第21天進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn),益氣聰明湯加味不同給藥組從第2次開(kāi)始其逃避潛伏期與模型組比較呈現(xiàn)縮短趨勢(shì),尤其以高劑量治療組逃避潛伏期減少明顯,表明益氣聰明湯加味具有改善模型大鼠空間學(xué)習(xí)能力作用。模型大鼠經(jīng)灌胃給與益氣聰明湯加味與多奈哌齊治療4周后,各給藥組定位航行訓(xùn)練逃避潛伏期與模型組比較有減少趨勢(shì),同時(shí)目標(biāo)象限時(shí)間有增加趨勢(shì),其中以多奈哌齊組和高劑量組具有顯著性差異。結(jié)淪 益氣聰明湯加味可提升VD大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力。

    【關(guān)鍵詞】益氣聰明湯;記憶能力;影響

    【中圖分類(lèi)號(hào)】R259 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2019.19..02

    血管性癡呆(VascularDementia,VD)是指由于腦血管疾病引起的缺血性腦組織缺氧和出血性腦損害所導(dǎo)致的以認(rèn)知功能缺損為核心癥狀的獲得性臨床綜合癥,在臨床的表現(xiàn)多為持續(xù)性和獲得性的高級(jí)認(rèn)知功能受到嚴(yán)重?fù)p傷[1],是老年癡呆最常見(jiàn)類(lèi)型之一[2]。中醫(yī)學(xué)在疾病診治中尤其注重整體調(diào)治,認(rèn)為VD與脾胃虛損,腎陽(yáng)不升有密切聯(lián)系。本課題中,我們研究益氣聰明湯對(duì)VD大鼠水迷宮成績(jī)的改善,并

    探討其神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    SPF 級(jí)雄性SD大鼠80只,體質(zhì)量(180±20)g/只(北京華阜康生物科技股份有限公司生產(chǎn),北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(京)2014-004)。動(dòng)物購(gòu)回后飼養(yǎng)于山西省中醫(yī)藥研究院中心實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物房,室溫(22±1)℃,相對(duì)濕度40%~60%,自由進(jìn)食、進(jìn)水。

    1.2 藥物與試劑

    益氣聰明湯加味顆粒,山西省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑室提供;鹽酸多奈哌齊片(衛(wèi)才(中國(guó))藥業(yè)有限公司,批號(hào)1611013)。

    1.3 儀器

    大鼠腦立體定位儀[深圳瑞沃德生命科技有限公司];單通道小動(dòng)物氣體麻醉機(jī)[R540,深圳瑞沃德生命科技有限公司];高頻電刀[DGD-300B-2,北京貝林電子有限公司];Morris水迷宮[DMS-2,中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制]。

    1.4 方法

    1.4.1 分組及全腦缺血模型制備

    實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為模型組,對(duì)照組,益氣聰明湯低、中、高劑量組和假手術(shù)組(n=10)。

    (1)模型組:采用Pulsinelli法四血管閉塞復(fù)制大鼠全腦缺血模型。

    (2)假手術(shù)組:大鼠除不凝閉椎動(dòng)脈和夾閉頸總動(dòng)脈外,其余操作與模型大鼠相同。

    1.4.2 給藥

    術(shù)后5天開(kāi)始給藥。陽(yáng)性對(duì)照組灌胃給予0.5 mg/kg多奈哌齊;益氣聰明湯低、中、高劑量組分別灌胃給予1 g/kg、2 g/kg和4 g/kg益氣聰明湯加味顆粒;假手術(shù)組和模型組大鼠均灌胃相同體積自來(lái)水,灌胃體積20 ml/kg。每日灌胃給藥一次,連續(xù)4周。

    1.5 指標(biāo)檢測(cè)

    1.5.1 Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試

    參照Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法[3]。

    (1)定位航行試驗(yàn):從給藥第三周末開(kāi)始本實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)前1 h給藥。每只大鼠每天訓(xùn)練1次,每次60 s,連續(xù)訓(xùn)練5天。選平臺(tái)對(duì)面(第Ⅱ象限)為入池位置,將大鼠置于象限邊緣1/2弧度處頭朝池壁入水,經(jīng)60 s未找到站臺(tái)者,將其引領(lǐng)至平臺(tái),放置10 s,此時(shí)逃避潛伏期記為60 s。第2~5天重復(fù)如上操作,記錄大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間(潛伏期)作為學(xué)習(xí)成績(jī),進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    (2)空間探索試驗(yàn):定位航行試驗(yàn)結(jié)束后,將平臺(tái)撤去,于相同位置將大鼠頭朝池壁入水,自由游泳60 s。記錄每只大鼠在Morris水迷宮測(cè)試中第一次到達(dá)平臺(tái)的時(shí)間及60 s內(nèi)穿越平臺(tái)所在位置的次數(shù),作為衡量其空間學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。同時(shí)計(jì)算60 s內(nèi)總游泳距離。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    結(jié)果以Means±SD表示,采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,水迷宮實(shí)驗(yàn)采用重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的雙因素方差分析(two-way analysis of variance,ANOVA),其他數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析結(jié)合Dunnett-t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    手術(shù)后第21天進(jìn)行Morris水迷宮定位航行試驗(yàn),單只大鼠放入Morris水迷宮60 s讓其尋找安全平臺(tái),記錄其逃避潛伏期,每日1次,連續(xù)5天。假手術(shù)組大鼠隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加其逃避潛伏期逐漸縮短,由首次的(59.9±0.9)s減少到末次(16.3±6.8)s,并且所有大鼠均能找到安全平臺(tái);模型組大鼠逃避潛伏期亦隨著訓(xùn)練次數(shù)的增加而逐漸縮短,但其在第2次逃避潛伏期與假手術(shù)組比較即明顯延長(zhǎng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),末次逃避潛伏期假手術(shù)組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),表明全腦缺血可引起大鼠空間學(xué)習(xí)能力受損。益氣聰明湯加味不同給藥組從第2次開(kāi)始其逃避潛伏期與模型組比較呈現(xiàn)縮短趨勢(shì),尤其以高劑量治療組逃避潛伏期減少明顯,表明益氣聰明湯加味具有改善模型大鼠空間學(xué)習(xí)能力作用。見(jiàn)表1。

    大鼠連續(xù)進(jìn)行5天定位航行訓(xùn)練后,第6天撤去安全平臺(tái)進(jìn)行空間探索試驗(yàn)。各組大鼠1 min探索總路程無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;假手術(shù)組大鼠首次穿越平臺(tái)位置的潛伏期為(13.2±5.6)s,并且在目標(biāo)象限探索累積時(shí)間為(25.1±5.3)s,而模型組大鼠分別為(31.8±11.2)s和(16.9±4.6)s,與假手術(shù)組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),表明全腦缺血可引起大鼠空間記憶能力受損。模型大鼠經(jīng)灌胃給與益氣聰明湯加味與多奈哌齊治療4周后,各給藥組逃避潛伏期

    與模型組比較有減少趨勢(shì),同時(shí)目標(biāo)象限時(shí)間有增加趨勢(shì),其中以多奈哌齊組和高劑量組具有顯著性差異。見(jiàn)表2。

    3 討 論

    3.1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)記憶能力

    Morris水迷宮是嚙齒類(lèi)動(dòng)物神經(jīng)認(rèn)知模型研究中普遍公認(rèn)的工具,同時(shí)也是評(píng)價(jià)神經(jīng)遞質(zhì)、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)通路以及藥物之間作用的手段之一。本實(shí)驗(yàn)在VD大鼠灌胃治療干預(yù)后進(jìn)行Morris水迷宮定位航行測(cè)試和空間探索實(shí)驗(yàn)測(cè)試,兩者均為評(píng)估大鼠獲取空間記憶能力的指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示,VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力顯著下降,通過(guò)益氣聰明湯加味干預(yù)可有效改善其學(xué)習(xí)記憶能力。

    3.2 脾胃虛損與VD

    近年來(lái)隨著腦卒中、心血管等疾病的劇增,血管性癡呆在全球發(fā)病率上升趨勢(shì)明顯[4],在我國(guó),VD的患病率為1.1%~3.0%。通過(guò)不斷的臨床實(shí)踐,我們發(fā)現(xiàn)VD患者除了常見(jiàn)的學(xué)習(xí)、記憶能力的改變外,多包括有神疲意散、少氣懶言,四肢無(wú)力,困倦少食的特點(diǎn),遣方立藥中結(jié)合補(bǔ)益后天、提升中氣之品,每每可以取得良效。特別是早期的癡呆患者,補(bǔ)益脾胃,使得清陽(yáng)上升,榮養(yǎng)腦絡(luò);重鎮(zhèn)潛降,濁陰下行,浮陽(yáng)不升,腦絡(luò)清明;兼化瘀通絡(luò)逐痰貫穿,可使中州之土無(wú)犯,至高之陽(yáng)不損,經(jīng)絡(luò)之氣無(wú)堵,血脈之血無(wú)瘀。在臨床的病機(jī)分析中,患者尚有心理上的障礙,往往伴有情緒的不暢和抑郁,若適當(dāng)加以疏肝活絡(luò),潛降重鎮(zhèn)之品,多獲良效。據(jù)此我們對(duì)VD的病機(jī)加以完善,認(rèn)為其病理基礎(chǔ)應(yīng)該是清陽(yáng)不升,濁陰不降,脈絡(luò)瘀阻,氣絡(luò)不寧,在理論

    上和實(shí)踐上進(jìn)行了有效補(bǔ)充,揭示了VD病機(jī)變化的復(fù)雜性。

    3.3 益氣聰明湯加味防治VD

    益氣聰敏湯加味,由益氣聰明湯、不忘方聯(lián)合水蛭組成,益氣聰明湯是金元時(shí)期著名醫(yī)家李東垣益氣升陽(yáng)的代表方劑,現(xiàn)代已有學(xué)者[5]用于VD治療并獲得較好療效。不忘方源自《備急千金要方》,具有補(bǔ)腎養(yǎng)心益志之功效。方中人參、黃芪甘溫以補(bǔ)脾胃,甘草甘緩以和脾胃,葛根、升麻、蔓荊輕揚(yáng)升發(fā),能入陽(yáng)明,鼓動(dòng)胃氣,上行頭目,中氣既足,清陽(yáng)上升,白芍?jǐn)筷幒脱?,黃柏補(bǔ)腎生水,菖蒲,茯苓,茯神,健脾開(kāi)竅醒神化痰,兩方聯(lián)合水蛭,可升清陽(yáng)降濁陰,化痰通絡(luò),兼具補(bǔ)脾、補(bǔ)腎、平肝之功,使精氣上行充養(yǎng)清竅,改善學(xué)習(xí)記憶能力。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 吳江,賈建平,崔麗英,等.神經(jīng)病學(xué)[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010:190.

    [2] BLACK S.Vascular cognitive impairment:epidemiology,subtypes,diagnosis and management[J].JR Coll Physicians Edinb,2011,41(1):49.

    [3] 劉利兵.實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)[M].西安:第四軍醫(yī)大學(xué)出版社,進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn),2009:362-363.

    本文編輯:劉欣悅

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