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    復(fù)發(fā)性早期妊娠丟失與葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性關(guān)系的研究

    2019-10-15 02:43:24唐禹馨侯海靜
    中國婦幼健康研究 2019年9期
    關(guān)鍵詞:研究

    崔 雙,唐禹馨,侯海靜

    (1.舟山醫(yī)院婦產(chǎn)科,浙江 舟山 316000;2.舟山婦幼保健院產(chǎn)科,浙江 舟山 316000)

    妊娠丟失(pregnancy loss,PL)可出現(xiàn)在整個妊娠期間,其中胚胎開始發(fā)育的妊娠早期較為常見。早期妊娠丟失(early pregnancy loss,EPL)是指妊娠12周以前的妊娠丟失,包括流產(chǎn)和生化妊娠丟失[1]。結(jié)合我國相關(guān)研究,EPL在妊娠丟失中約占80%,最常見的有自發(fā)性流產(chǎn),胚胎停育,胎死宮內(nèi)等情況[2]。復(fù)發(fā)性EPL由于其病因復(fù)雜、預(yù)后較差和對孕婦身心健康的不良影響,一直受到學界關(guān)注。葉酸(即維生素B9)是一種水溶性的維生素,對促進胎兒神經(jīng)細胞分化、預(yù)防胎兒的神經(jīng)管畸形有重要作用。然而葉酸需要進行多重酶的催化作用才能產(chǎn)生活性,其中亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)、甲硫氨酸合成還原酶(MTRR)等屬于關(guān)鍵酶,其基因位點的多態(tài)性易造成酶活性降低而導(dǎo)致葉酸代謝障礙,引發(fā)相關(guān)疾病[3]。有研究指出,部分婦女產(chǎn)生不良孕產(chǎn)結(jié)局與葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性有關(guān)[4]。葉酸多聚谷氨酸是人體通過飲食而攝取的葉酸,需要在空腸中水解為葉酸單聚谷氨酸才能進入血液。我國地域遼闊,南北飲食差異巨大,而且機體對于葉酸的吸收代謝能力因人而異,所以人體葉酸代謝基因多態(tài)性也具有較大差異[5]。目前對于葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性與不良妊娠結(jié)局的研究較多,但鮮見對復(fù)發(fā)性EPL的專門研究。本文旨在研究復(fù)發(fā)性EPL與葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性的關(guān)系,為我國妊娠婦女的相關(guān)臨床研究提供依據(jù)。

    1資料與方法

    1.1一般資料

    選取2016年4月至2018年4月在舟山醫(yī)院和舟山婦幼保健院婦產(chǎn)科就診的170例孕婦為研究對象。納入標準:①年齡為20~35周歲,民族不限;②臨床診斷為復(fù)發(fā)性EPL,指妊娠婦女在孕12周之前出現(xiàn)2次及以上的流產(chǎn)[6];③了解研究內(nèi)容并自愿簽署知情同意書。排除標準:①有吸煙史、酗酒史;②患有腫瘤者或者其他嚴重的循環(huán)、血液等系統(tǒng)疾??;③合并子宮畸形、宮頸功能不全、染色體異常、妊娠期并發(fā)癥或已知胎兒畸形。符合入組標準的復(fù)發(fā)性EPL孕婦84例為研究組,選取正常分娩或者是妊娠結(jié)局正常的孕婦86例為對照組,兩組的年齡、身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、民族、孕次、產(chǎn)次比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05),見表1。

    表1 兩組人口學及病情資料比較結(jié)果

    1.2研究方法

    1.2.1收集研究對象信息

    成立復(fù)發(fā)性EPL與葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性研究的團隊,團隊成員進行統(tǒng)一的培訓(xùn),培訓(xùn)合格后方可開展本項研究。培訓(xùn)的主要內(nèi)容包括:妊娠婦女肘靜脈血采樣方法,數(shù)據(jù)的采集、錄入、統(tǒng)計學方法。收集信息內(nèi)容包括:①研究對象的一般情況資料,如年齡、BMI、民族等;②妊娠婦女孕期情況、孕產(chǎn)史、家族史等。

    1.2.2采集DNA的方法

    由專業(yè)團隊成員采樣妊娠婦女肘晨間空腹靜脈血4mL,利用PCR-熒光探針試劑盒抽提研究對象樣本的DNA。

    1.2.3檢測方法

    運用PCR和熒光法進行亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因的C677T、A1298C位點、甲硫氨酸合成還原酶(MTRR)基因的A66G位點的SNP分型。Taqman-MGB探針所在的位置見表2。PCR每個反應(yīng)體系為10μL總體積,包含20ng/μL×1μL的DNA模板、5μL的2×Taqman Universal Master Mix,0.5μL的20×Taqman-MGB探針和3.5μL去離子水。PCR反應(yīng)條件為95℃ 10min,第一步在92℃ 15s、60℃ 1min條件下進行20個循環(huán)的擴增,第二步在89℃ 15s,60℃ 90s條件下進行30個循環(huán)的擴增。反應(yīng)結(jié)束后,在ABI熒光PCR儀器(ABI 7900型,美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn))上讀取樣品孔中的終點熒光,利用配套的分析軟件計算各個樣本的基因分型結(jié)果。

    表2 Taqman-MGB探針位置

    1.3統(tǒng)計學方法

    2結(jié)果

    2.1兩組MTHFR基因的C677T比較

    兩組MTHFR基因C677T中CC型、CT型和TT型分布比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.212,P=0.027),見表3。

    表3 兩組MTHFR基因C677T分布的比較結(jié)果[n(%)]

    2.2兩組MTHFR基因的A1298C比較

    兩組MTHFR基因A1298C中AA型、AC型、CC型分布比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.458,P=0.038),見表4。

    表4 兩組MTHFR基因A1298C比較結(jié)果[n(%)]

    2.3兩組MTRR基因的A66G比較

    兩組MTRR基因A66G中AA型、AG型、CG型分布比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.093,P=0.029),見表5。

    表5 研究組與對照組MTRR基因A66G比較結(jié)果[n(%)]

    3討論

    3.1復(fù)發(fā)性妊娠丟失的流行病學研究

    復(fù)發(fā)性妊娠丟失是指孕婦發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)、胚胎的停育、胎死宮內(nèi)的情況連續(xù)發(fā)生兩次或者兩次以上[6]。引起妊娠婦女復(fù)發(fā)性EPL的原因與多種因素有關(guān),主要包括:染色體異常、遺傳相關(guān)因素、妊娠婦女內(nèi)分泌及免疫功能紊亂等。妊娠丟失后再次妊娠的成功率僅為37%,胎死宮內(nèi)的發(fā)生率為32%,婦女出現(xiàn)自然流產(chǎn)的發(fā)生率也達到28%[7]。相關(guān)流行病學研究顯示,妊娠丟失的患者中37%~44%具有較為明確的原因,大部分妊娠丟失的原因尚無法解釋[8]。復(fù)發(fā)性EPL是早期妊娠不良結(jié)局中最為常見的一種,并且引發(fā)其產(chǎn)生的原因較多、較為復(fù)雜,如:染色體的異常、妊娠婦女合并有全身性的疾病、感染因素、內(nèi)分泌因素、妊娠早期接受腹部手術(shù)、胎兒附屬物(胎盤、臍帶)等因素[9]。我國復(fù)發(fā)性EPL的發(fā)生率呈上升的趨勢,值得醫(yī)護人員的關(guān)注。

    3.2葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性的作用

    葉酸是妊娠婦女體內(nèi)極其重要、不能缺少的營養(yǎng)物質(zhì),其具有極其重要的生理作用,包括DNA的合成、甲基化、人體生長發(fā)育、基因表達等多個方面。同時葉酸對胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育有重要作用,相關(guān)代謝基因與妊娠婦女子癇前期、胎盤早剝及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局具有高度相關(guān)性[10]。妊娠婦女對葉酸的需求是普通人對葉酸需求的4倍,人體內(nèi)眾多酶系與葉酸的轉(zhuǎn)運、代謝有關(guān),而其中葉酸代謝的關(guān)鍵酶是MTHFR和MTRR兩種。關(guān)鍵酶的基因在不同的國家、地區(qū)的人群中具有多態(tài)性[11]。當其發(fā)生突變時,會使酶的活性發(fā)生相應(yīng)的改變,從而導(dǎo)致葉酸的代謝發(fā)生改變,并導(dǎo)致活性葉酸在妊娠婦女的體內(nèi)水平異常。妊娠婦女MTHFR基因最為重要,在人體染色體上可以編碼氨基酸的數(shù)量為656個,位置是1p36.3,一共包括了外顯子11個,內(nèi)含子10個。MTHFR基因編碼的蛋白質(zhì)可以對5,10-亞甲基四氫葉酸為5-甲基四氫葉酸進行轉(zhuǎn)化。近年的研究發(fā)現(xiàn),MTHFR基因發(fā)生的多態(tài)性突變位點已經(jīng)達到了近20種,其中最為重要的突變位點是C677T位點及A1298C這兩個位點[12]。C677T多態(tài)性突變后,表現(xiàn)的基因型有3種,分別為:CC型、CT型及TT型。A1298C多態(tài)性突變后,表現(xiàn)的基因型有3種,分別為:AA型、AC型及CC型。MTRR基因的A66G多態(tài)性突變后,表現(xiàn)的基因型有3種,分別為:AA型、AG型和GG型[13]。

    3.3復(fù)發(fā)性EPL與葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性的關(guān)聯(lián)

    本研究結(jié)果表明研究組MTHFR基因C677T位點的CC型、CT型和TT型基因分布,A1298C位點的AA型、AC型、CC型基因分布和MTRR基因A66G位點的AA型、AG型、CG型基因分布均高于對照組,這與國內(nèi)的相關(guān)研究結(jié)果相似[14-15],其中研究組的TT型、CC型和CG型分布均高于既往報道,提示該3種基因型的表達可能與妊娠丟失反復(fù)發(fā)作有一定關(guān)聯(lián),但這需要未來進一步研究證實。

    綜上所述,復(fù)發(fā)性EPL與葉酸代謝相關(guān)基因多態(tài)性具有相關(guān)性,對于有高危基因型突變的妊娠婦女應(yīng)盡早、及時地進行干預(yù),減少復(fù)發(fā)性EPL的發(fā)生。

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