乳腺癌中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)與eIF4E表達(dá)的關(guān)系

田世馨，尚立娜，馬應(yīng)全，張 城

(西北民族大學(xué) 醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730030)

乳腺癌被認(rèn)為是全世界女性患者的異質(zhì)性癌癥[1].乳腺癌依賴(lài)腫瘤微環(huán)境生長(zhǎng)，腫瘤微環(huán)境中的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞 (Tumor-associated macrophage，TAMs)是一種重要的炎癥細(xì)胞，其表面標(biāo)志物CD163的浸潤(rùn)與癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān).真核細(xì)胞翻譯起始因子 4E ( eukaryotic translation initiationfactor 4E，eIF4E)是蛋白質(zhì)翻譯起始復(fù)合物形成的關(guān)鍵因子，細(xì)胞中eIF4E在正常情況下呈低表達(dá)，而在多種癌癥中發(fā)生變化，包括肺癌、食管鱗狀細(xì)胞癌、鼻咽癌、胃癌、子宮肌瘤、乳腺癌等.eIF4E的過(guò)度表達(dá)參與細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞增殖、侵襲和細(xì)胞凋亡，并且與較差的存活率相關(guān)[2].目前，eIF4E的表達(dá)和腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)在乳腺癌中的關(guān)系很少報(bào)道.本研究采用免疫組化檢測(cè)CD163和eIF4E在乳腺癌中的表達(dá)，分析兩者在乳腺癌的表達(dá)與臨床病理特征，并探討兩者在乳腺癌中的關(guān)系.

1 資料和方法

1.1 一般資料

收集甘肅省腫瘤醫(yī)院病理科2016年至2018年的乳腺癌組織標(biāo)本92例，經(jīng)病理確診均為乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌.取癌旁正常乳腺組織標(biāo)本74例，入組的患者均為女性，其中年齡在22～76歲.有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例；有神經(jīng)侵犯10例，無(wú)神經(jīng)侵犯82例；有脈管內(nèi)癌栓13例，無(wú)脈管內(nèi)癌栓79例；ki67低表達(dá)20例，ki67高表達(dá)72例.

1.2 主要試劑

eIF4E抗體(P-2)：sc-9976購(gòu)自santacruz公司，按1∶100稀釋?zhuān)珻D163為鼠抗人單克隆抗體，按1∶100稀釋?zhuān)旖菝庖呓M化試劑盒HRP(KIT-5920/5930)、PBS緩沖液、免疫組化筆、免疫組化抗原修復(fù)液、抗體稀釋液均購(gòu)自邁新公司.

1.3 方法

采用Maxvision法進(jìn)行免疫組化染色檢測(cè)eIF4E及CD163表達(dá).所有標(biāo)本均經(jīng)中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，石蠟組織切片.具體操作步驟按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行.抗原修復(fù)采用高壓鍋高溫修復(fù)，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封固，鏡下觀察.用已知的陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照.

1.4 結(jié)果判定

CD163以巨噬細(xì)胞胞漿中染色呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽(yáng)性染色，eIF4E陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞.隨機(jī)在高倍顯微鏡(×400)下取3個(gè)視野，根據(jù)顯色細(xì)胞的比例計(jì)分：0分(顯色癌細(xì)胞為0%)，1分(顯色細(xì)胞<10%)，2分(顯色細(xì)胞10%～49%)，3分(顯色細(xì)胞50%～79%)，4分(顯色細(xì)胞>80%).根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：0分(癌細(xì)胞無(wú)顯色)，1分(淺黃色)，2分(棕黃色)，3分(黃褐色).兩種計(jì)分方法相加，所得結(jié)果為染色強(qiáng)度：0～1分為(-)，2～3分為弱陽(yáng)(+)，4～5分為中陽(yáng)(++)，6～7分為強(qiáng)陽(yáng)(+++).

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 CD163和eIF4E在乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)情況

CD163與eIF4E在乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中表達(dá)的免疫組化結(jié)果見(jiàn)圖1.乳腺癌組織中CD163的表達(dá)量明顯高于癌旁正常乳腺組織，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，圖2A).eIF4E在乳腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，表1).

圖1 A.CD163在乳腺癌組織中高表達(dá)(×100);B.CD163在癌旁正常乳腺組織中低表達(dá)(×100);C．eIF4E在乳腺癌組織中高表達(dá)(×100);D.eIF4E在癌旁正常乳腺組織中陰性表達(dá)(×100)

注：**為P<0.001；BC為乳腺癌，paraneoplastic為癌旁乳腺組織

表1 eIF4E在乳腺癌和癌旁組織中的表達(dá)

2.2 eIF4E和CD163與TNBC臨床病理特征關(guān)系

CD163的表達(dá)情況與ki67的表達(dá)高低相關(guān)(P<0.05)(表2).

表2 eIF4E和CD163表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系

2.3 乳腺癌組織中eIF4E和CD163表達(dá)的相關(guān)性

乳腺癌組織中eIF4E與CD163的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.273，P<0.05)，見(jiàn)圖2B.

3 討論

乳腺癌是來(lái)自乳腺終末導(dǎo)管小葉單元上皮的惡性腫瘤，是目前全世界女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一.有研究顯示，乳腺癌患者腫瘤組織中巨噬細(xì)胞約占80%，同時(shí)伴有廣泛TAMs.腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相互作用，改變細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移.CD163被認(rèn)為是一種高特異性的M2型腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物[3]，在非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、膀胱癌這些腫瘤中，CD163的表達(dá)越高，腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移能力就越強(qiáng).Król等[4]研究顯示，犬乳腺癌組織中TAMs數(shù)量的增加與腫瘤轉(zhuǎn)移能力有關(guān).在腫瘤模型中清除TAMs可以觀察到腫瘤的生長(zhǎng)受到抑制[5].Klingen等[6]研究表明，CD163+TAMs 的存在與乳腺癌侵襲性征密切相關(guān).本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化法檢測(cè)了乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中的CD163的表達(dá).結(jié)果顯示，乳腺癌組織的CD163表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織.結(jié)合臨床病理特征分析，CD163的表達(dá)與ki67的表達(dá)相關(guān).ki67與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與細(xì)胞異常增殖密切相關(guān)，可有效評(píng)估腫瘤細(xì)胞增殖活性[7].而Tiainen等[8]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者中M2樣巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)增加，高表達(dá)CD163分子，導(dǎo)致透明質(zhì)酸的累積，促進(jìn)人乳腺癌進(jìn)展期間的炎癥反應(yīng).由此提示，CD163陽(yáng)性腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)與乳腺癌的增殖、侵襲具有相關(guān)性.

在癌癥背景下，翻譯失調(diào)是核心，真核翻譯起始因子eIF4E是翻譯控制的關(guān)鍵，其致癌潛力嚴(yán)格依賴(lài)于上游MAPK相互作用激酶(Mnks)的絲氨酸209磷酸化[2].eIF4E的高表達(dá)與不良腫瘤相關(guān)并預(yù)測(cè)乳腺癌特異性存活率差[9].Norton等[10]檢測(cè)eIF4E在乳腺癌組織和正常乳腺組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)eIF4E在乳腺癌組織中呈高表達(dá).而本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)了乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織中eIF4E的表達(dá).結(jié)果顯示，乳腺癌組織中eIF4E的表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織，表明eIF4E的表達(dá)升高引起蛋白水平升高.Graff[11]等通過(guò)分析轉(zhuǎn)染后72小時(shí)收獲的細(xì)胞，Western印跡評(píng)估eIF4E反義核苷酸介導(dǎo)培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞中eIF4E蛋白的減少，使受eIF4E 調(diào)節(jié)的腫瘤相關(guān)蛋白表達(dá)下降，抑制腫瘤的生長(zhǎng)等作用.有研究發(fā)現(xiàn)，eIF4E的高低抑制了細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移，增強(qiáng)了化學(xué)敏感性[12].我們的結(jié)果進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中eIF4E的表達(dá)與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)顯著相關(guān)性.在呂紅瓊等[13]對(duì)75例乳腺癌和12例乳腺良性病變中eIF4E基因檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，eIF4E的表達(dá)與有無(wú)腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡、臨床分期均無(wú)關(guān).ShengZhou[14]等檢測(cè)，原發(fā)性乳腺癌組織中eIF4E的表達(dá)與患者的年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期之間無(wú)顯著相關(guān)性.這些研究與我們的結(jié)果相符，推測(cè)eIF4E在乳腺癌組織中與轉(zhuǎn)移暫無(wú)相關(guān)關(guān)系，是一個(gè)獨(dú)立的檢測(cè)因子.因此eIF4E可以作為乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)，而與乳腺癌的臨床病理特征的關(guān)系還需進(jìn)一步研究.

eIF4E作為真核生物蛋白質(zhì)合成翻譯中的關(guān)鍵因子，是多條信號(hào)通路中心的聚集點(diǎn).它的激活，是AKT/mTOR信號(hào)通路磷酸化激活的一個(gè)關(guān)鍵下游事件[15]，而Jhaveri K[16]等發(fā)現(xiàn)，在炎性乳腺癌(IBC)患者腫瘤組織中，PI3K/mTOR通路被強(qiáng)烈激活，同時(shí)有強(qiáng)的浸潤(rùn)性TAMS.由此可以推測(cè)，eIF4E與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)在AKT/mTOR信號(hào)通路中起作用.我們的研究結(jié)果顯示，乳腺癌組織中eIF4E和CD163的表達(dá)呈正相關(guān)，可以推測(cè)兩者可能通過(guò)互相作用來(lái)促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生發(fā)展.

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)CD163與eIF4E在乳腺癌組織中表達(dá)高于癌旁組織，兩者在乳腺癌組織中具有正相關(guān)性，提示CD163與eIF4E在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步發(fā)現(xiàn).