珍珠菜提取物的抗缺氧作用

張嵱彬 楊艷 王麗 廖秀 楊娟 傅舒安 王道平 楊小生，

(1貴州醫(yī)科大學(xué)省部共建藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025；2貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室)

珍珠菜(Lysimachia clethroides Duby)為報(bào)春花科植物虎尾珍珠菜的根或全草，又叫扯根菜、山酸湯稈、通筋草、酸罐罐等。具有活血調(diào)經(jīng)、利水消腫等功效?？芍委煁D女月經(jīng)不調(diào)、小兒疳積、跌打損傷等〔1〕。目前對(duì)珍珠菜的藥理學(xué)研究主要集中在抗腫瘤〔2〕和抗白血病〔3〕方面，而關(guān)于珍珠菜提取物耐缺氧的研究卻未見報(bào)道。本研究建立常壓缺氧模型、亞硝酸鈉中毒模型和急性腦缺血性缺氧模型，旨在探究珍珠菜提取物的耐缺氧作用。

1 材料與方法

1.1儀器、試藥與動(dòng)物 RT-6000酶標(biāo)儀(美國(guó)，雷杜)，XFB-200高速中藥粉碎機(jī)(長(zhǎng)沙市雨花區(qū)中誠(chéng)制藥機(jī)械廠)，Centrifuge-5427 R 低溫高速離心機(jī)(德國(guó)艾本德股份有限公司)，N-1200B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)，SHZ-CD循環(huán)水式多用真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)，JA2003電子天平(上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司)，101-2A電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器公司)，SB25-12DTD超聲波清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

珍珠菜采自貴州省榕江縣，經(jīng)鑒定為珍珠菜全草；鈉石灰(成都金山化學(xué)試劑有限公司)；亞硝酸鈉(重慶百倍精細(xì)化工廠)；超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(南京建成生物工程研究所，生產(chǎn)批號(hào)：20180302)，紅景天膠囊(北京同仁堂，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)食健字G20100243)；昆明種小鼠90只，雌雄各半，體重18～22 g〔合格證號(hào)：SCXK(軍)2012-0011由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供，SPF級(jí)〕。

1.2動(dòng)物分組 將90只小鼠隨機(jī)分為空白組、紅景天組和珍珠菜組，雌雄各半，每組30只，每組分別進(jìn)行常壓缺氧實(shí)驗(yàn)、亞硝酸鈉中毒實(shí)驗(yàn)和急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)。

1.3試劑制備 將珍珠菜陰干粉碎，過(guò)篩，經(jīng)70%甲醇回流提取3次，合并過(guò)濾液，濃縮，得浸膏。將浸膏烘干，按照1 ml原藥液含生藥1 g的方法〔4〕，珍珠菜浸膏的得率為14.70%，經(jīng)計(jì)算得出應(yīng)加水將珍珠菜浸膏配置成0.735 g/ml的溶液，備用。

1.4給藥劑量 紅景天膠囊的成人劑量為40 mg/(kg·d)，折合成動(dòng)物的給藥劑量，經(jīng)計(jì)算得出紅景天組給藥劑量為0.063 g/(ml·d)，珍珠菜組給藥劑量為0.735 g/(ml·d)，灌胃體積均為10 g/(ml·d)?？瞻捉M給予等量生理鹽水〔5〕。

1.5常壓缺氧實(shí)驗(yàn) 末次灌胃給藥后，將小鼠放入250 ml廣口瓶?jī)?nèi)，瓶?jī)?nèi)放置鈉石灰10 g，上置濾紙，橡膠塞表面涂抹凡士林，塞緊瓶蓋，使裝置密閉，記錄小鼠在密閉空間內(nèi)的存活時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出小鼠心臟和大腦，洗凈血液，稱重，勻漿，按照試劑盒方法測(cè)定心肌和大腦中SOD和GSH-Px活力〔6,7〕。

1.6亞硝酸鈉中毒實(shí)驗(yàn) 于末次灌胃給藥1 h后，小鼠腹腔注射1 ml/(10 mg·kg)亞硝酸鈉，記錄小鼠從亞硝酸鈉注射完畢到死亡的時(shí)間，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出小鼠心臟和大腦，洗凈血液，稱重，勻漿，按照試劑盒方法測(cè)定心肌和大腦中SOD和GSH-Px的活力〔6，7〕。

1.7急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn) 于末次灌胃給藥1 h后，各組均在雙耳連線處快速斷頭，記錄小鼠斷頭后至張口呼吸次數(shù)和喘息停止時(shí)間(以小鼠張口呼吸停止且舌頭外露為標(biāo)準(zhǔn)停止計(jì)時(shí))。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取出小鼠心臟和大腦，洗凈血液，稱重，勻漿，按照試劑盒方法測(cè)定心肌和大腦中SOD和GSH-Px的活力〔6,7〕。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1常壓缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果 紅景天組和珍珠菜組生存時(shí)間〔(42.30±2.71)、(35.91±2.51)min〕明顯長(zhǎng)于空白組〔(26.50±4.72)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜組存活時(shí)間延長(zhǎng)了35.51%。珍珠菜組心肌中SOD和GSH-Px活性明顯高于空白組，腦組織GSH-Px活力明顯高于空白組(P<0.05)，見表1。

2.2亞硝酸鈉中毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果 紅景天組和珍珠菜組生存時(shí)間〔(11.00±1.50)、(8.89±1.45)min〕明顯長(zhǎng)于空白組〔(7.40±0.84)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜組存活時(shí)間延長(zhǎng)了20.14%。珍珠菜組心肌和腦組織中SOD和GSH-Px活性均明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.3急性腦缺血性缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果 紅景天組和珍珠菜組生存時(shí)間〔(23.49±3.13)、(31.40±3.42)min〕明顯長(zhǎng)于空白組〔(20.22±1.67)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜組存活時(shí)間延長(zhǎng)了55.29%。珍珠菜組心肌和腦組織中SOD和GSH-Px活性均明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表1 珍珠菜提取物在常壓缺氧下對(duì)小鼠心肌、腦組織中SOD和GSH-Px的影響

與空白組比較：1)P<0.05,2)P<0.01；下表同

表2 珍珠菜提取物對(duì)亞硝酸鈉中毒所致小鼠心肌、腦組織中SOD和GSH-Px的影響

表3 珍珠菜提取物對(duì)急性腦缺血性缺氧所致小鼠心肌、腦組織中SOD和GSH-Px的影響

3 討 論

珍珠菜屬植物中的主要化學(xué)成分為三萜及其皂苷類、黃酮及其皂苷類、甾醇類、苯并內(nèi)酯及有機(jī)酸類〔8,9〕。研究表明，黃酮類化合物有較好的抗氧化活性和清除自由基能力，從而對(duì)缺氧引起的機(jī)體氧化損傷具有保護(hù)作用〔10〕。缺氧是臨床上常見的病理過(guò)程，可導(dǎo)致多種疾病發(fā)生，引起機(jī)體代謝、功能甚至結(jié)構(gòu)異常，嚴(yán)重或長(zhǎng)期缺氧可導(dǎo)致機(jī)體心腦等重要器官死亡。小鼠在密閉環(huán)境中受到缺氧的損害，主要反映在心臟和腦部。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，珍珠菜粗提物能夠使小鼠缺氧存活時(shí)間延長(zhǎng)，有助于改善機(jī)體的缺氧損傷。

在機(jī)體缺氧的情況下，SOD和GSH-Px 很容易被誘導(dǎo)產(chǎn)生，其活性可作為機(jī)體抗氧化能力的標(biāo)準(zhǔn)。珍珠菜粗提物能夠清除過(guò)量的氧自由基，催化超氧陰離子自由基歧化生成氧和過(guò)氧化氫，修復(fù)受損細(xì)胞，可減少缺氧對(duì)心肌組織和腦組織造成的損傷。SOD值越大，保護(hù)細(xì)胞免受損傷的能力越強(qiáng)；GSH-Px酶活力越大，保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的能力越強(qiáng)〔11〕。

綜上所述，珍珠菜提取物能顯著延長(zhǎng)常壓缺氧小鼠和急性腦缺血性缺氧小鼠的存活時(shí)間，提高機(jī)體抗氧化能力，增強(qiáng)小鼠缺氧耐受力，延長(zhǎng)缺氧耐受時(shí)間，降低自由基對(duì)心肌和腦組織的損傷。