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    老年原發(fā)性肝癌患者血清miRNA-200c水平及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

    2019-10-10 08:39:28殷焦陳慶李正平楊林
    中國老年學(xué)雜志 2019年19期
    關(guān)鍵詞:肝癌血清水平

    殷焦 陳慶 李正平 楊林

    (1湖北文理學(xué)院醫(yī)學(xué)院分子醫(yī)學(xué)中心,湖北 襄陽 441053;2中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第991醫(yī)院)

    原發(fā)性肝癌為世界6大惡性腫瘤之一,在各個(gè)年齡段均可發(fā)病,死亡率比較高;我國原發(fā)性肝癌也比較常見,其發(fā)病率和死亡率比較高〔1〕。原發(fā)性肝癌早期癥狀不明顯,容易被忽視,多數(shù)原發(fā)性肝癌患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)處于中晚期;原發(fā)性肝癌如果沒有進(jìn)行及時(shí)治療,平均生存時(shí)間只有3個(gè)月左右〔2〕。近年來隨著醫(yī)療水平的發(fā)展,使許多早期原發(fā)性肝癌患者被發(fā)現(xiàn)并進(jìn)行了有效治療,但因原發(fā)性肝癌容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,因此預(yù)后仍不太樂觀〔3〕。微小RNA(miRNA)調(diào)節(jié)翻譯后基因表達(dá),從而調(diào)控惡性腫瘤細(xì)胞的增殖分化和凋亡等過程〔4〕。miRNA的差異表達(dá)在多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用〔5〕,miRNA-200c在多種惡性腫瘤中表達(dá)異?!?,7〕。本文對(duì)老年原發(fā)性肝癌患者血清miRNA-200c水平進(jìn)行研究,探討其在老年原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展、診斷、預(yù)后預(yù)測中的價(jià)值。

    1 對(duì)象與方法

    1.1研究對(duì)象 選擇90例老年原發(fā)性肝癌患者作為肝癌組,90例同期體檢的健康老年人作為對(duì)照組。肝癌組年齡(75.43±4.16)歲;男58例,女32例;乙型肝炎病毒(HBV)陽性74例,陰性16例;有肝硬化77例,無肝硬化13例;腫瘤直徑(3.67±1.02)cm;低分化25例,中分化29例,高分化36例;TNM分期:Ⅰ期27例,Ⅱ期22例,Ⅲ期33例,Ⅳ 期8例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例。對(duì)照組年齡(74.58±4.32)歲,男53例,女37例。對(duì)照組和肝癌組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)審批。納入標(biāo)準(zhǔn):肝癌組患者經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性肝癌,首次手術(shù)治療,手術(shù)前未進(jìn)行放化療等其他治療;對(duì)照組無肝病病史。排除標(biāo)準(zhǔn):其他惡性腫瘤者,嚴(yán)重重要臟器功能障礙者,依從性差未正規(guī)隨訪者,失訪者,資料不全者。

    1.2血清miRNA-200c水平測定 肝癌組于術(shù)前抽取靜脈血4 ml、對(duì)照組于體檢當(dāng)天抽取靜脈血4 ml,根據(jù)RNA提取說明書提取總RNA,分光光度計(jì)測定RNA濃度和純度,將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定血清miRNA-200c水平,以U6為內(nèi)參,PCR條件為:95℃ 10 min;95℃ 15 s、56℃ 60 s,共42個(gè)循環(huán)。以2-ΔΔCt表示血清miRNA-200c水平。

    1.3隨訪 采用門診隨訪和電話隨訪,隨訪開始時(shí)間為手術(shù)時(shí)間,隨訪結(jié)束時(shí)間為死亡時(shí)間或隨訪截止時(shí)間,隨訪截止時(shí)間為2016年12月31日。

    1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn),血清miRNA-200c水平對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值采用受試者工作特征(ROC)曲線分析,血清miRNA-200c水平與預(yù)后的關(guān)系采用Kaplan-Meier法,取P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1兩組血清miRNA-200c水平比較 肝癌組血清miRNA-200c水平明顯低于對(duì)照組(0.57±0.08 vs 1.00±0.05,t=43.241,P=0.000)。

    2.2血清miRNA-200c水平與原發(fā)性肝癌臨床病理特征的關(guān)系 血清miRNA-200c水平與原發(fā)性肝癌的分化程度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(均P<0.05),其中低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ 期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清miRNA-200c水平明顯低于中-高分化、TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者;血清miRNA-200c水平與原發(fā)性肝癌患者的年齡、性別、HBV感染、肝硬化、腫瘤直徑無關(guān)(P>0.05),見表1。

    表1 血清miRNA-200c水平與原發(fā)性肝癌臨床病理特征的關(guān)系

    2.3血清miRNA-200c水平對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值 血清miRNA-200c水平診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線下面積為(AUC)為0.811,95%CI為0.808~0.814,診斷臨界值為0.51,靈敏度為91.02%,特異度為69.53%。見圖1。

    2.4血清miRNA-200c水平與原發(fā)性肝癌患者生存期的關(guān)系 血清miRNA-200c水平以ROC曲線診斷臨界值0.51為界,分為高表達(dá)組和低表達(dá)組,高表達(dá)組總生存率和無病生存率均明顯高于低表達(dá)組(P<0.05)。見圖2和圖3。

    圖1 血清miRNA-200c水平診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線

    圖2 血清miRNA-200c與原發(fā)性肝癌總生存率的Kaplan-Meier曲線

    圖3 血清miRNA-200c與原發(fā)性肝癌無病生存率的Kaplan-Meier曲線

    3 討 論

    原發(fā)性肺癌因缺乏敏感有效的診斷方法,致死率比較高〔8〕,因此尋找敏感有效的診斷方法具有重要意義。甲胎蛋白為比較常用的篩查原發(fā)性肝癌的腫瘤標(biāo)志物,但仍存在許多缺陷,有大概1/3的早期原發(fā)性肝癌患者不能用甲胎蛋白檢出,甲胎蛋白篩查原發(fā)性肝癌的靈敏性也不高。近年來,miRNA作為單鏈、小分子、非編碼、內(nèi)源性分子在惡性腫瘤的研究中廣泛應(yīng)用。miRNA為高度保守、內(nèi)源性的一組小分子非編碼RNA,長21~25個(gè)核苷酸,通過與mRNA的3′-UTR區(qū)域結(jié)合發(fā)揮對(duì)翻譯過程的調(diào)節(jié)作用,從而參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡等多種過程;從體液、器官、組織中提取的miRNA對(duì)溫度、pH值、RNA酶活性均具有一定耐受性,該特性使其具有潛力成為多種疾病的生物標(biāo)志物。miRNA與多種惡性腫瘤關(guān)系密切,多種惡性腫瘤組織中miRNA表達(dá)與正常組織存在差異;miRNA的異常表達(dá)參與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程,可能成為區(qū)分惡性腫瘤組織和正常組織的標(biāo)志物〔9〕。miRNA在不同惡性腫瘤組織和正常組織中的表達(dá)具有組織特異性,使其成為惡性腫瘤臨床診斷的潛在標(biāo)志物〔10〕。多種miRNA在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)也存在異常,在原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,為原發(fā)性肝癌診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)的潛在生物標(biāo)志物〔11〕;miRNA在健康人群和原發(fā)性肝癌患者血清中的表達(dá)也存在差異,因此血清miRNA水平也成為原發(fā)性肝癌診斷、術(shù)后復(fù)發(fā)、生存率預(yù)測的潛在標(biāo)志物〔12,13〕。miRNA-200家族包括多個(gè)家族成員,miRNA-200c為miRNA-200家族成員之一,定位于人12號(hào)染色體上,在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用〔14~16〕,如miRNA-200c在Ⅲc期卵巢漿液性囊腺癌組織中表達(dá)升高,與卵巢癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力關(guān)系密切,臨床上檢測miRNA-200c對(duì)上皮性卵巢癌的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移具有重要價(jià)值,過表達(dá)miRNA-200c有望成為治療卵巢癌的手段之一〔17〕;miRNA-200c參與胰腺癌的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化,影響人胰腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力〔18〕;miR-200c通過P53/P21信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞凋亡,逆轉(zhuǎn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)甲氨蝶呤的耐藥性〔19〕。來源于惡性腫瘤組織的miRNA可在血液中穩(wěn)定存在,因此血清miRNA水平可反映其在惡性腫瘤組織中的表達(dá),因惡性腫瘤組織受取材限制,而血清miRNA水平檢測更為方便,因此研究血清miRNA水平的意義受到大家的青睞〔20〕。程佩宇等〔21〕研究發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌患者血清 miRNA-200c水平降低,血清miRNA-200c水平與結(jié)直腸癌的分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,血清miRNA-200c檢測有望成為結(jié)直腸癌的診斷和預(yù)后判斷的潛在生物標(biāo)志物。本研究結(jié)果表明血清miRNA-200c在老年原發(fā)性肝癌的病情評(píng)估、診斷、判斷預(yù)后中具有潛在價(jià)值,有望成為老年原發(fā)性肝癌的潛在生物標(biāo)志物。

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