水稻黑條矮縮病抗性QTL定位

劉江寧 王楚鑫 張宏根 繆一栩 高海林 許作鵬 劉巧泉 湯述翥

水稻黑條矮縮病抗性QTL定位

劉江寧1,2,**王楚鑫1,2,**張宏根1,2,*繆一栩1,2高海林1,2許作鵬1,2劉巧泉1,2湯述翥1,2

1江蘇省作物遺傳生理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/ 植物功能基因組學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/ 江蘇省作物基因組學(xué)和分子育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/ 揚(yáng)州大學(xué)農(nóng)學(xué)院, 江蘇揚(yáng)州 225009;2江蘇省糧食作物現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心/ 揚(yáng)州大學(xué), 江蘇揚(yáng)州 225009

發(fā)掘水稻黑條矮縮病的抗性基因有助于抗病品種的選育, 減少黑條矮縮病對(duì)水稻生產(chǎn)的危害。本研究構(gòu)建了包含222個(gè)家系的L5494/IR36重組自交系群體。對(duì)該群體進(jìn)行黑條矮縮病的田間誘發(fā)鑒定, 抗性親本IR36發(fā)病率為28.70%, 感病親本L5494發(fā)病率為84.26%, 群體發(fā)病率范圍為11.21%~89.81%。利用134對(duì)分子標(biāo)記構(gòu)建覆蓋12條染色體的遺傳連鎖圖譜, 總遺傳距離為1475.97 cM, 平均標(biāo)記間距為11.1 cM。利用QTL IciMapping 4.0對(duì)抗黑條矮縮病QTL進(jìn)行分析, 共檢測(cè)到4個(gè)QTL, 其中第1、第2、第9染色體上QTL的表型貢獻(xiàn)率分別為12.64%、16.00%和8.43%, 抗病等位基因來自抗病親本IR36; 第6染色體上QTL的表型貢獻(xiàn)率為10.82%, 抗病等位基因來自感病親本L5494。在此基礎(chǔ)上, 利用93-11為供體、日本晴為背景的近等基因系材料, 在定位區(qū)間內(nèi)檢測(cè)到來自93-11的抗性QTL。本研究結(jié)果為水稻黑條矮縮病抗性基因定位及分子標(biāo)記輔助選擇育種提供借鑒。

水稻黑條矮縮病; 重組自交系; QTL定位

水稻黑條矮縮病(rice black-streaked dwarf virus disease, RBSDV)是一種病毒性病害, 主要是由灰飛虱通過持久性不經(jīng)卵的方式進(jìn)行傳播[1-2]。黑條矮縮病病毒屬植物呼腸弧病毒組病毒, 由10條命名為S1~S10的雙鏈RNA組成[3-5]。水稻黑條矮縮病毒侵染植株后, 會(huì)使病株矮縮, 葉色濃綠僵硬, 葉背、葉鞘和莖稈有早期蠟白色、后期為黑褐色的短條紋不規(guī)則突起, 重病株不抽穗, 被稱為水稻中的“癌癥”。20世紀(jì)60年代, 該病害在我國華東地區(qū)大規(guī)模流行,隨后20年中, 其發(fā)病規(guī)模大大下降, 但在90年代又在江浙等地回升流行, 致使多地區(qū)作物產(chǎn)量受到影響[6-8]。2006年后, 水稻黑條矮縮病在江蘇、浙江、山東等地大發(fā)生, 造成大面積減產(chǎn)[9], 2013年后, 該病害在江蘇已得到控制, 但在河南沿黃部分稻區(qū)嚴(yán)重發(fā)生[10]。目前, 防治水稻黑條矮縮病的手段主要是使用農(nóng)藥殺滅傳毒媒介體灰飛虱。但是由于灰飛虱的數(shù)量大、具有遷徙性及耐藥性高等因素, 防治效果不佳[11]。因此選育和推廣抗病品種是最為經(jīng)濟(jì)有效的途徑。

黑條矮縮病屬于流行性病害, 其發(fā)病規(guī)律以及發(fā)病地點(diǎn)較難掌控, 田間鑒定缺乏穩(wěn)定性, 人工接種病毒需投入大量的人工, 對(duì)大群體誘發(fā)存在較大困難。同時(shí), 不同品種帶有不同的水稻黑條矮縮病抗病基因, 即使是同一品種在不同研究中也會(huì)出現(xiàn)抗感性狀不一致現(xiàn)象, 這又給黑條矮縮病抗病基因研究以及抗病品種選育帶來一定難度[12]。目前, 對(duì)黑條矮縮病抗病基因研究以及抗病育種的報(bào)道較少, 不同研究者普遍認(rèn)為水稻黑條矮縮病抗性是由微效多基因控制, 不同品種帶有不同的抗性基因, 抗黑條矮縮病水稻品種的選育需聚合多個(gè)抗性基因[13-14]。現(xiàn)已在除水稻第8和第12染色體外其他染色體上共定位到30多個(gè)黑條矮縮病抗性QTL[11,15-21],但只有第6染色體上的被精細(xì)定位[16]。因此, 有必要加強(qiáng)黑條矮縮病抗性QTL的發(fā)掘與定位。

本研究利用一套L5494/IR36重組自交系(recombinant inbred lines, RIL)群體進(jìn)行黑條矮縮病抗性QTL的定位。根據(jù)定位結(jié)果, 利用日本晴背景近等基因系對(duì)第1染色體上黑條矮縮病抗性QTL進(jìn)行驗(yàn)證, 將為水稻黑條矮縮病抗性基因的定位及抗病品種的分子標(biāo)記輔助選育提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 供試材料

2010—2015年, 構(gòu)建了一套L5494/IR36重組自交系群體, 共獲得222個(gè)家系, 其中IR36為半矮稈秈稻抗性親本, L5494為高稈粳稻品系, 對(duì)黑條矮縮病表現(xiàn)高感[19]。至2016年夏季, 該群體已自交至F10代。

為充分挖掘秈粳之間有利等位基因, 構(gòu)建了一套以秈稻親本93-11為供體, 粳稻親本日本晴為受體的染色體片段代換系群體, 并通過重測(cè)序技術(shù)明確了各系背景中的導(dǎo)入片段[22-23]。2017—2018年, 選擇攜帶第1染色體黑條矮縮病抗性QTL導(dǎo)入片段的代換系(編號(hào)N9)、日本晴及93-11進(jìn)行抗性鑒定, 根據(jù)抗性鑒定結(jié)果來分析93-11中是否存在抗性位點(diǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 黑條矮縮病誘發(fā) 已有研究表明, 水稻在秧苗期(二至八葉期)對(duì)黑條矮縮病較為敏感[24]。由于近年來黑條矮縮病在江蘇發(fā)生很輕, 無法對(duì)該病進(jìn)行田間自然誘發(fā)鑒定。而河南開封仍為黑條矮縮病重病區(qū), 是該病抗性鑒定的理想地點(diǎn)。因此, 2016年將RIL群體播種于開封, 在秧田期進(jìn)行水稻黑條矮縮病的田間自然誘發(fā)?；绎w虱主要以小麥為寄主越冬, 將鑒定材料播種于麥田附近, 不施用農(nóng)藥, 每天人工將麥田里的灰飛虱驅(qū)趕至水稻秧田中, 以增加秧田蟲口密度, 保證鑒定材料充分感病。5月12日播種, 6月15日后, 將水稻秧苗移栽至揚(yáng)州大學(xué)試驗(yàn)基地, 采取單苗栽插, 株行距13.3 cm × 25.0 cm, 每個(gè)家系54穴, 2次重復(fù)。2017—2018年, 將N9、日本晴及93-11以上述同樣的方式進(jìn)行黑條矮縮病誘發(fā), 3次重復(fù), 采取單苗栽插移栽, 株行距不變, 每個(gè)重復(fù)100穴, 常規(guī)水肥管理。

1.2.2 發(fā)病率統(tǒng)計(jì) 根據(jù)表型鑒定, 家系內(nèi)植株明顯矮縮、葉色濃綠僵硬, 判定為病株。水稻分蘗初期對(duì)各家系進(jìn)行第1次黑條矮縮病病株鑒定。由于此時(shí)部分感病植株還未發(fā)病或病程較輕、表型不太明顯, 因此僅用塑料標(biāo)簽對(duì)發(fā)病癥狀明顯的植株進(jìn)行標(biāo)注, 以防稻苗爛死不留痕跡, 影響最終數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)。水稻分蘗盛期進(jìn)行第2次鑒定, 并統(tǒng)計(jì)各個(gè)株系的發(fā)病率, 以各重復(fù)發(fā)病率的平均值作為表型統(tǒng)計(jì)。

1.2.3 DNA的提取及分子標(biāo)記檢測(cè) 分別取每個(gè)系3張來自于不同單株的葉片混剪, 采用CTAB法[25]提取基因組DNA。PCR體系為模板DNA 2.0 μL, 0.3 μmol L–1的引物2.0 μL, 2×EsMaster Mix (2×EsMaster Mix為含dNTP、Mg2+、buffer、酶的混合液) 8.0 μL, 加ddH2O補(bǔ)足至20.0 μL。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?5℃預(yù)變性5 min, 94℃變性40 s, 53~58℃退火40 s, 72℃延伸30~50 s, 30個(gè)循環(huán), 最后72℃保溫10 min, 擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)3%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析及QTL定位 使用Microsoft Excel軟件統(tǒng)計(jì)群體基因型及發(fā)病率, 運(yùn)用QTL IciMapping 4.0軟件[26]進(jìn)行遺傳圖譜的構(gòu)建以及采用復(fù)合區(qū)間作圖法(composite interva1 mapping, CIM)定位QTL, 參照McCouch等[27]方式命名QTL。

2 結(jié)果與分析

2.1 群體發(fā)病率的鑒定

2016年, IR36自然發(fā)病率為28.70%, 較抗RBSDV (圖1-A)。L5494的發(fā)病率為84.26%, 高感RBSDV (圖1-B)。RIL群體各家系發(fā)病率范圍在11.21%~89.81%之間, 黑條矮縮病誘發(fā)充分(圖1-C), 各個(gè)家系表型的分布圖呈現(xiàn)數(shù)量性狀的特點(diǎn)(圖2), 說明該群體對(duì)黑條矮縮病的抗性由數(shù)量性狀位點(diǎn)控制。

圖1 IR36、L5494與群體中小區(qū)發(fā)病情況

A: 親本IR36; B: 親本L5494; C: 群體中重病小區(qū)。

A: parent IR36; B: parent L5494; C: a susceptible line from RIL population.

圖2 重組自交系群體發(fā)病率次數(shù)分布圖

2.2 遺傳連鎖圖譜構(gòu)建

本課題組之前的研究中, 共篩選出136對(duì)在IR36與L5494間具有多態(tài)的分子標(biāo)記[19]。本研究利用其中134對(duì)標(biāo)記對(duì)RIL群體中222個(gè)家系檢測(cè)表明, 位于第3染色體10.78~25.11 Mb區(qū)段內(nèi)的標(biāo)記偏分離, 大多數(shù)家系(>95%)檢測(cè)的基因型與IR36一致, 除此之外, 其他標(biāo)記均正常分離。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果構(gòu)建了包含第3染色體的分子標(biāo)記遺傳圖譜, 134對(duì)分子標(biāo)記均勻分布于12條染色體上, 覆蓋的遺傳距離為1475.97 cM, 標(biāo)記間平均距離為11.1 cM, 該連鎖圖譜符合QTL定位的要求(圖3)。

2.3 黑條矮縮病抗性QTL的定位

利用構(gòu)建好的遺傳圖譜結(jié)合各個(gè)家系平均發(fā)病率表型值, 使用QTL IciMapping 4.0軟件進(jìn)行RBSDV抗性位點(diǎn)定位, 設(shè)LOD值為2.5。共檢測(cè)到4個(gè)抗性QTL, 分別位于第1、第2、第6、第9染色體, LOD值分別為4.44、6.89、5.45和3.94, 表型貢獻(xiàn)率為12.64%、16.00%、10.82%和8.43%。其中第6染色體上檢測(cè)到的QTL抗病等位基因來自感病親本L5494, 第1、第2、第9染色體上檢測(cè)到的QTL抗病等位基因來自抗病親本IR36。QTL分布情況以及相關(guān)數(shù)據(jù)如圖4和表1所示。

圖4 水稻黑條矮縮病抗性QTL在染色體上的位置

表1 L5494/ IR36重組自交系抗病QTL定位結(jié)果

2013–2015年QTL數(shù)據(jù)來源于本課題組前期的研究[19]。

The information of QTL for RBSDV resistance in 2013–2015 was from our former study[19]. PVE: phenotypic variation explained by each QTL.

2.4 抗性位點(diǎn)qRBSDV-1的檢驗(yàn)

結(jié)合本課題組已有的研究結(jié)果,與在2013—2016年間多次被重復(fù)檢測(cè)到,在2015—2016年也能被重復(fù)檢測(cè)到(表1)[19]。其中,已被精細(xì)定位[16],在不同研究中也均被定位到[15,21], 而僅在本研究中被定位到。

本課題組發(fā)現(xiàn)秈稻品種93-11對(duì)黑條矮縮病抗性顯著強(qiáng)于粳稻品種日本晴, 同時(shí)已構(gòu)建成一套以93-11為供體、日本晴為背景的染色體片段代換系群體?？紤]到本研究中抗病等位基因來源于秈稻抗病品種IR36, 93-11第1染色體相應(yīng)片段是否也攜帶與黑條矮縮病抗性有關(guān)的QTL？根據(jù)93-11為供體、日本晴為背景的染色體片段代換系重測(cè)序結(jié)果, 發(fā)現(xiàn)代換系N9 (圖5)除在所在染色體區(qū)段具有93-11導(dǎo)入片段外, 背景已基本回復(fù)到日本晴。利用兩側(cè)標(biāo)記AP-39.6及RM104對(duì)N9、日本晴及93-11進(jìn)行檢測(cè), 結(jié)果N9在這兩標(biāo)記處均為93-11帶型, 說明N9在目標(biāo)區(qū)段內(nèi)帶有93-11導(dǎo)入片段。

水稻黑條矮縮病鑒定結(jié)果顯示, 2017年日本晴平均發(fā)病率為31.19%, 93-11平均發(fā)病率為15.62%, N9平均發(fā)病率為26.38%, N9發(fā)病率較日本晴顯著下降(=0.0474<0.05); 2018年, 日本晴平均發(fā)病率為10.33%, 93-11平均發(fā)病率為2.00%, N9平均發(fā)病率為2.01%, N9發(fā)病率仍較日本晴顯著降低(=0.0228<0.05)(表2和圖6)。上述鑒定結(jié)果表明N9在第1染色體導(dǎo)入片段上存在一個(gè)來源于93-11黑條矮縮病抗性QTL, 其與可能為同一個(gè)抗性位點(diǎn)。

圖5 代換系N9的重測(cè)序圖譜

藍(lán)線、紅線分別表示對(duì)應(yīng)SNP位點(diǎn)為日本晴與93-11基因型, 紅框表示93-11導(dǎo)入片段。

Each blue line and red line represent single nucleotide polymorphisms of ‘Nipponbare’ and ‘93-11’, respectively. The red box in Chr.1 indicates a substituted fragment derived from 93-11.

表2 日本晴與9311及N9發(fā)病情況

*: 0.01<<0.05;**:0.01.

圖6 2017年日本晴及N9田間發(fā)病情況

A: 日本晴; B: N9。A: Nipponbare; B: N9.

3 討論

發(fā)掘抗性基因和培育抗性品種是解決黑條矮縮病危害的根本策略。目前, 黑條矮縮病研究的難點(diǎn)之一在于該病的誘發(fā)與鑒定。該病的誘發(fā)可以采用在病區(qū)田間自然誘發(fā)和人工室內(nèi)接種的方法。由于人工室內(nèi)接種費(fèi)時(shí)、工作量大、需要各種設(shè)施條件[28],因此, 對(duì)于大量種質(zhì)資源或分離群體的抗性鑒定一般采取田間自然鑒定的方法。周彤等[24]研究表明水稻黑條矮縮病主要在秧苗期誘發(fā), 二葉齡時(shí)最易感病, 十葉齡之后幾乎不感病。因此, 本研究采取田間自然鑒定的方法, 直接將群體播種于黑條矮縮病重病區(qū)河南開封, 在秧田期自然誘發(fā)感病。為充分感病, 秧田選擇靠近麥田的田塊, 并在水稻幼苗期將灰飛虱從麥田驅(qū)趕至水稻秧田, 以增加蟲口密度。從2016年發(fā)病率鑒定結(jié)果來看, 整個(gè)RIL群體發(fā)病很充分, 表明秧田期在病區(qū)田間自然誘發(fā)黑條矮縮病是可行的。已有的研究表明, 在水稻分蘗盛期, 黑條矮縮病發(fā)病表型最明顯, 鑒定結(jié)果最可信[14,29]。但一些黑條矮縮病重病株會(huì)在移栽后很快枯死, 由于病株矮小、田間灌水較深, 在分蘗盛期調(diào)查發(fā)病率前已腐爛, 會(huì)造成調(diào)查數(shù)據(jù)偏差。因此, 本研究對(duì)試驗(yàn)材料進(jìn)行兩次鑒定, 第1次在分蘗初期用塑料標(biāo)簽對(duì)有明顯表型的病株進(jìn)行標(biāo)記, 在水稻分蘗盛期第2次鑒定時(shí)再統(tǒng)計(jì)群體的發(fā)病情況, 這使得表型鑒定更為準(zhǔn)確, 有助于增強(qiáng)研究結(jié)果的可靠性。

2013—2015年間, 本課題組利用L5494/IR36重組自交系群體共定位了12個(gè)黑條矮縮病抗性QTL, 分別位于第1、第6、第8、第9染色體, 其中第6、第9染色體上的抗性QTL在多年內(nèi)均被檢測(cè)到, 第1、第8染色體上的抗性QTL在群體充分發(fā)病的情況下被檢測(cè)到[19]。本研究利用該套重組自交系群體共檢測(cè)到4個(gè)QTL, 分別位于第1、第2、第6、第9染色體, 其中第1、第6、第9染色體上的抗性QTL與之前研究中定位結(jié)果一致, 說明這3個(gè)是穩(wěn)定表達(dá)的抗性QTL。潘存紅等[15]、Li等[16]利用珍汕97B/明恢63的重組自交系群體共檢測(cè)到6個(gè)黑條矮縮病抗性QTL, 分別位于第6、第7、第9、第11染色體上, 進(jìn)一步通過構(gòu)建以明恢63為供體親本, 感病親本淮稻5號(hào)為輪回親本的近等基因系, 驗(yàn)證了第6染色體上的抗病QTL, 將基因定位于627.6 kb的物理區(qū)間內(nèi)。本研究中定位到第6染色體上的抗性QTL位置與Li等[16]定位區(qū)段重疊, 可能是相同的抗性基因, 不同的是本研究中抗性基因來源是高感親本L5494, 這說明感病親本中也存在著抗性基因, 僅利用該基因不足以克服黑條矮縮病對(duì)水稻生產(chǎn)的危害。本研究中定位到第9染色體抗性QTL在多個(gè)不同研究中均被定位到, 定位區(qū)段較為一致, Sun等[17]通過構(gòu)建蘇御糯背景近等系驗(yàn)證了該抗性QTL, 說明該抗性QTL可能廣泛存在于抗性種質(zhì)資源中, 可以應(yīng)用于抗黑條矮縮病水稻育種。本研究中在第2染色體上定位到的抗性QTL尚未見報(bào)道, 但Wang等[30]在第2染色體上相同區(qū)段內(nèi)定位到一處抗灰飛虱QTL, 因此本研究在第2染色體定位的抗性QTL可能為抗灰飛虱位點(diǎn)。此外, 王寶祥等[11]用Koshihikari/桂朝2號(hào)RIL群體及Zhou等[18]利用淮稻5號(hào)/Tetep的F2:3家系均在第3染色體上定位到了1個(gè)抗病QTL, 并且位置相近, 說明第3染色體上極可能存在1個(gè)抗性基因, 但在本研究中, 由于第3染色體標(biāo)記偏分離, 絕大多數(shù)家系均表現(xiàn)為IR36的基因型, 因而未能夠定位到相關(guān)抗病QTL。

本研究定位的抗性QTL在2015— 2016年群體較高發(fā)病率情況下能夠被重復(fù)檢測(cè)到, 抗性等位基因來源于秈型親本IR36。王寶祥等[31]研究發(fā)現(xiàn)大部分秈稻品種對(duì)黑條矮縮病的抗性要優(yōu)于粳稻品種。本課題組發(fā)現(xiàn)秈稻品種93-11對(duì)黑條矮縮病也具有較好抗性, 為驗(yàn)證93-11第1染色體相應(yīng)片段是否也攜帶與黑條矮縮病抗性有關(guān)的QTL, 2017—2018年對(duì)93-11為供體、日本晴為背景的近等基因系N9鑒定證實(shí), 93-11第1染色體所在區(qū)段的確也存在與黑條矮縮病抗性相關(guān)的QTL,推測(cè)其可能就是。當(dāng)然,是否普遍存在于其他秈稻中仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。相關(guān)結(jié)果將為水稻黑條矮縮病的研究提供借鑒。

4 結(jié)論

利用L5494/ IR36的重組自交系群體, 共檢測(cè)到4個(gè)水稻黑條矮縮病抗性QTL, 分別位于第1、第2、第6、第9染色體, 表型貢獻(xiàn)率分別為12.64%、16.00%、10.82%和8.43%, 利用近等基因系確定第1染色體上標(biāo)記AP-39.6與RM104間存在一個(gè)抗病位點(diǎn)。這些黑條矮縮病抗性QTL的定位與驗(yàn)證為基因的精細(xì)定位、克隆和分子輔助育種奠定基礎(chǔ)。

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Mapping of QTLs for resistance to rice black-streaked dwarf disease

LIU Jiang-Ning1,2,**, WANG Chu-Xin1,2,**, ZHANG Hong-GEN1,2,*, MIAO Yi-Xu1,2, GAO Hai-Lin1,2, XU Zuo-Peng1,2, LIU Qiao-Quan1,2, and TANG Shu-Zhu1,2

1Jiangsu Key Laboratory of Crop Genetics and Physiology / Key Laboratory of Plant Functional Genomics of the Ministry of Education / Jiangsu Key Laboratory of Crop Genomics and Molecular Breeding, Agricultural College of Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China;2Jiangsu Co-Innovation Center for Modern Production Technology of Grain Crops, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China

Rice black-streaked dwarf virus disease (RBSDV) may cause great loss of rice production, and breeding resistant varieties is an effective method to control RBSDV. To develop resistant varieties, it is important to screen germplasm that shows RBSDV resistance and to identify the genes/quantitative trait loci (QTLs) contained. In the present study, a set of 222 recombinant inbred lines (RILs) derived from the cross between L5494 (a susceptiblevariety) and IR36 (a resistantvariety) were constructed for RBSDV-resistant QTL mapping. With natural infection test, the RBSDV incidences of L5494 and IR36 were 84.26% and 28.70%, respectively, and the disease incidence of RILs was ranged from 11.21% to 89.81%. Using 134 polymorphic molecular markers, a linkage genetic map was constructed. The map covered a total length of 1475.97 cM with an average interval of 11. 1 cM between adjacent markers. Four RBSDV-resistant QTLs were discovered using QTL IciMapping 4.0 Software, of which,,, andwere from the resistant parent IR36, andfrom the susceptible parent L5494. QTLs,,,andwere located on chromosomes 1, 2, 6, and 9, respectively, which explained 12.64%, 16.00%, 10.82%, and 8.43% of the phenotypic variations. Moreover, a RBSDV-resistant QTL from 93-11 (spp.) at thelocus was confirmed by a near isogenic line that harborsderived from 93-11 with the Nipponbare (spp.) genetic background. Our findings will be benefit for the marker assisted breeding of RBSDV-resistant varieties.

rice black-streaked dwarf viral disease; recombinant inbred line; QTL mapping

本研究由國家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2016ZX08001002-003), 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31771743)和江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目資助。

This study was supported by the National Major Project for Developing New GM Crops (2016ZX08001002-003), the National Natural Science Foundation of China (31771743), and the Project Funded by the Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions (PAPD).

張宏根, E-mail: zhg@yzu.edu.cn, Tel: 0514-87972148

**同等貢獻(xiàn)(Contributed equally to this work)

2019-01-11;

2019-06-12;

2019-07-09.

URL: http://kns.cnki.net/kcms/detail/11.1809.s.20190705.1335.010.html

10.3724/SP.J.1006.2019.92003