海濱錦葵提取物對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)和非特異性免疫的影響

胡佩紅 季海波

摘 要：為研究海濱錦葵提取物對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能及非特異性免疫的影響，以異育銀鯽幼魚為試驗(yàn)對(duì)象，在其基礎(chǔ)日糧中添加不同水平的海濱錦葵提取物，研究不同水平海濱錦葵提取物對(duì)其生長(zhǎng)性能、超氧化物歧化酶、溶菌酶、過(guò)氧化氫酶活性及丙二醛含量的影響。結(jié)果表明，試驗(yàn)組飼料系數(shù)顯著降低，可有效提高異育銀鯽的免疫機(jī)能和生長(zhǎng)性能。

關(guān)鍵詞：海濱錦葵;異育銀鯽;非特異性免疫;生長(zhǎng)性能;提取物

中圖分類號(hào) R285文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 1007-7731（2019）16-0015-03

Abstract：In order to study the effects of extracts of Kostelezkya virginica on growth performance and non-specific immunity of allogynous crucian carp. Different levels of extracts of Kostelezkya virginica were added to the basic diets of allogynous crucian carp. The control group did not add extracts of mallow，the basic diets of treatment group （group I～I(xiàn)V） were added 40 g，80 g，120 g and 160g extracts of Kostelezkya virginica in turn per ton. The effects of different levels extracts of Kostelezkya virginica on its growth performance，superoxide dismutase，lysozyme，catalase activity and malondialdehyde content were studied. The results showed that the growth performance of allogynous silver crucian carp could be improved in the test group，and the best effect was found in the test group II. Compared with the control group，the feed coefficient decreased significantly to 1.56（P<0.05），17.46% （p < 0.05），44.08%（P<0.05），62.03%（P<0.05），catalase activity increased by 44.44%（P<0.05），and malondialdehyde content decreased by 58.48%（P<0.05）. Therefore，the Kostelezkya virginica extracts can effectively improve the immune function and growth performance of allogynous silver crucian carp，and the optimum dosage is 80 mg/kg.

Key words：Kostelezkya virginica;Allogynous silver crucian carp;Non-specific Immune;Growth Performance;Extracts

海濱錦葵（Kostelezkya virginica）是錦葵科錦葵屬草本植物，天然分布于美國(guó)東部沿海的特拉華州至得克薩斯州的鹽沼海岸帶，1993年由南京大學(xué)欽佩教授引入中國(guó)，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)室及野外生理生態(tài)試驗(yàn)證明其活性成分對(duì)哺乳動(dòng)物無(wú)毒且無(wú)致突變作用，其提取物可安全應(yīng)用[1-2]。海濱錦葵塊根和葉片中富含無(wú)糖、皂苷、黃酮等生物活性成分，具有很好的增強(qiáng)免疫和抗腫瘤作用。運(yùn)用海濱錦葵根粉或葉片為原料提取有效成分，針對(duì)畜禽和水產(chǎn)的不同養(yǎng)殖階段開(kāi)發(fā)不同類型飼用免疫增強(qiáng)劑，提高集約化養(yǎng)殖的畜禽和水產(chǎn)動(dòng)物免疫力，完全或大部分替代抗生素，在促進(jìn)養(yǎng)殖效益提高的同時(shí)，為市場(chǎng)提供安全的養(yǎng)殖食品。

隨著人們對(duì)畜禽和水產(chǎn)類食品安全性不斷重視，純天然、綠色、安全的飼用添加劑的需求量將逐步提高。國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的植物源飼用添加劑主要以中草藥為主，其種植加工成本偏高和用量偏大限制了市場(chǎng)的需求。如黃芪等中草藥原料植物需要良田種植，在水肥條件保證的情況下，黃芪藥用部分根的產(chǎn)量為3750～4500kg/hm2，而市場(chǎng)需求的黃芪多糖需要進(jìn)一步加工，有效應(yīng)用劑量為1‰以上。其他的植物源飼用添加劑仍在研發(fā)之中，尚未形成市場(chǎng)規(guī)模，導(dǎo)致增強(qiáng)畜禽和水產(chǎn)機(jī)體免疫力的添加劑仍然以抗生素類為主。海濱錦葵體內(nèi)富含多種生物活性物質(zhì)，其含量明顯超過(guò)其他一般中草藥，在飼料中低用量添加即可起到顯著效果，具有純天然、綠色安全、成本低、效益好的優(yōu)勢(shì)，可運(yùn)用于綠色飼用添加劑。本研究旨在將海濱錦葵提取物作為飼用添加劑添加至異育銀鯽飼料中，通過(guò)考察其對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)性能和超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、溶菌酶（Lysozym，LZM）、過(guò)氧化氫酶（Catalase from bovine liver，CAT）活性及丙二醛（Malonic dialdehyde，MDA）等非特異性免疫指標(biāo)的影響，以期獲得海濱錦葵提取物在異育銀鯽基礎(chǔ)日糧最佳添加水平，為開(kāi)發(fā)天然、綠色、安全的飼用免疫增強(qiáng)劑與促生長(zhǎng)添加劑提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 異育銀鯽，體重量30～40g，試驗(yàn)前經(jīng)馴養(yǎng)2周，淘汰體質(zhì)弱及帶病個(gè)體，由宿遷三新農(nóng)業(yè)有限公司提供;海濱錦葵提取物，活性成分含多糖、皂苷、黃酮（根粉多糖≥10.00%、根粉皂苷≥3.50%、根粉黃酮≥0.50%），由江蘇海力發(fā)生物科技有限公司提供;超氧化物歧化酶活試劑盒、過(guò)氧化氫酶活試劑盒、丙二醛測(cè)定試劑盒、溶壁球菌粉，均購(gòu)于南京建成生物工程研究所;試驗(yàn)用缸：玻璃鋼材質(zhì)，圓柱體水槽，高度90cm，直徑90cm，淮安正昌飼料有限公司提供。

1.2 主要儀器 MIX1000型旋渦混合儀（ 杭州瑞成儀器有限公司），HWS-12電熱恒溫水浴鍋（上海一恒儀器有限公司），Alpha-1900Plus紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海譜元儀器有限公司），AXTGL16A臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（ 鹽城市安信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）。

1.3 日糧配方組成 以淮安正昌飼料有限公司異育銀鯽幼魚飼料為基礎(chǔ)日糧，對(duì)照組不添加海濱錦葵提取物，試驗(yàn)組（Ⅰ～Ⅳ組）每噸依次分別添加40g、80g、120g和160g的海濱錦葵提取物。對(duì)照組與試驗(yàn)組日糧配方組成與營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1、表2。

1.4 養(yǎng)殖試驗(yàn) 選擇體質(zhì)健壯、大小基本一致的經(jīng)馴養(yǎng)后的異育銀鯽魚種為試驗(yàn)對(duì)象，每缸投放40尾，每組試驗(yàn)各設(shè)3個(gè)重復(fù)，共15缸。采用淮安正昌飼料有限公司恒溫循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)，水溫控制在25±1℃，溶解氧保持在5.0mg/L以上，氨氮小于0.3mg/L，pH約為7.0，晝夜充氣，每隔2d換水1次，每次換水2/3，以保證水質(zhì)清新。飼料投喂量根據(jù)魚體重及馴養(yǎng)時(shí)實(shí)際攝食量確定，投喂量約為體重的4.0%～4.5%。每2周稱重1次，同時(shí)調(diào)整投飼量。每日定點(diǎn)定時(shí)投喂4次，時(shí)間為8∶00，11∶00，13∶00，17∶00，飽食投喂，觀察攝食情況。養(yǎng)殖周期91d，記錄初均體重量、末均體重量、末均體長(zhǎng)、總投餌量、總殘餌量，計(jì)算飼料系數(shù)、體重增長(zhǎng)率和肥滿度。

1.5 生長(zhǎng)性能指標(biāo)計(jì)算方法[3] 體重增長(zhǎng)率（%）=[（末均體重量-初均體重量）/初均體重量×100]; （1）

飼料系數(shù)=（總投餌量-總殘餌量）/（末均體[重]量-初均體[重]量）; （2）

肥滿度（%）=末均體[重]量（g）/末均體長(zhǎng)3（cm3）×100; （3）

1.6 血清非特異性免疫指標(biāo)[4-6] 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每缸隨機(jī)取魚3尾，于尾靜脈處采血，置于2mL離心管中，于4℃、3000r/min下，離心10min，收集上層血清，-18℃冰箱冷凍，備用，分別用于測(cè)定SOD、CAT、LZM活性和MDA含量。

1.6.1 SOD活性測(cè)定 采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活性，使用購(gòu)自南京建成生物技術(shù)研究所的SOD測(cè)試盒進(jìn)行測(cè)定，操作步驟參考試劑盒步驟進(jìn)行。按下公式計(jì)算的超氧化物歧化酶活性：

1.6.2 LZM活性測(cè)定 參考王銳[7]的方法進(jìn)行，略有改動(dòng)，用0.067mol/L，pH6.4的磷酸鹽緩沖液溶解溶壁微球菌粉制成0.2mg/mL的菌懸液。每個(gè)樣品取3.0mL菌懸液，吸取血清0.04mL加入到菌懸液中，立即混勻并在540nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)0。然后在30℃水浴中保溫20min，取出后置于4℃冰浴中終止反應(yīng)，再次測(cè)定吸光值A(chǔ)。按下公式計(jì)算溶菌酶的活性U：[U=（A0-A）/A0]。

1.6.3 MDA含量測(cè)定 采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定丙二醛含量，測(cè)定步驟按照試劑盒說(shuō)明書操作。樣品中MDA含量按以下公式計(jì)算：

1.6.4 CAT活性測(cè)定 采用鉬酸銨法測(cè)定CAT活性，使用購(gòu)自南京建成生物技術(shù)研究所的CAT測(cè)試盒進(jìn)行測(cè)定，操作步驟參考試劑盒步驟進(jìn)行。

1.7 數(shù)據(jù)處理方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析、Duncan法多重比較。試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，顯著性水平為P<0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)生長(zhǎng)性能的影響 由表3可知，添加海濱錦葵提取物試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，末體均重和體重增長(zhǎng)率均有顯著提高（P<0.05），飼料系數(shù)均顯著降低（P<0.05）而肥滿度差異不顯著（P>0.05）。其中添加量為80-120mg/kg飼料的試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組，體重增長(zhǎng)率極顯著高于其他試驗(yàn)組（P<0.01），飼料系數(shù)極顯著低于其他試驗(yàn)組（P<0.01）。試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組體重增長(zhǎng)率相比對(duì)照組分別提高了31.27%和28.54%，飼料系數(shù)由對(duì)照組的1.89降低至1.56和1.59，分別降低了17.46%和15.87%，因此試驗(yàn)Ⅱ、Ⅲ組海濱錦葵添加量顯著提高了異育銀鯽的生產(chǎn)性能。綜合考慮生長(zhǎng)性能及生產(chǎn)成本，每噸配合飼料中的海濱錦葵提取物的添加量以80g為宜。

2.2 對(duì)血清非特異性免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，相比對(duì)照組，試驗(yàn)Ⅰ～Ⅳ組血清中SOD、CAT和LZM活性均顯著提高（P<0.05），而試驗(yàn)組MDA含量均顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。其中試驗(yàn)Ⅱ組Ⅲ組的4項(xiàng)指標(biāo)差異極顯著，SOD活性分別提高了44.08%和38.57%，CAT酶活分別提高了62.03%和55.59%，LZM分別提高了44.44%和42.22%，而MDA含量分別降低了58.48%和57.67%。由此可見(jiàn)，向異育銀鯽配合飼料中添加一定量的海濱錦葵提取物，顯著提高了異育銀鯽的免疫力，其中以每噸配合飼料添加80g海濱錦葵提取物能最有效提高異育銀鯽的免疫力。

3 結(jié)論與討論

魚類血清中SOD、CAT、LZM活性及MDA含量是衡量魚類非特異性免疫力的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。其中SOD是魚體重要的抗氧化酶，其主要功能是清除體內(nèi)自由基;CAT是魚體防御體系的關(guān)鍵酶之一，其主要功能是分解魚體內(nèi)的H2O2，生成H2O，從而使機(jī)體避免H2O2的毒害;MDA是魚體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，脂質(zhì)過(guò)氧化會(huì)引起細(xì)胞損傷，因此血液中丙二醛的含量可以間接地反映機(jī)體內(nèi)細(xì)胞的損傷程度[4]。而魚類血清中LZM主要針對(duì)G+菌發(fā)揮作用，對(duì)一些G-菌如傷寒桿菌、嗜水氣單胞菌等也有作用，在防御病原入侵上起著重要作用，在魚類的非特異性免疫中也起著至關(guān)重要的作用[7]。本研究向異育銀鯽配合飼料中添加不同水平的海濱錦葵提取物，考察其對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)性能及非特異性免疫指標(biāo)的影響，綜合考慮生長(zhǎng)性能和生產(chǎn)成本，確定了每噸配合飼料中添加80g海濱錦葵提取物可以最有效提高異育銀鯽的免疫機(jī)能，從而大大提高了異育銀鯽的生產(chǎn)性能。因此，本研究成果將為海濱錦葵提取物在動(dòng)物飼料中的應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，具有一定的現(xiàn)實(shí)意義。

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（責(zé)編：楊 林）