子癇前期胎盤中促紅細(xì)胞生成素及其受體、微血管密度的表達(dá)研究

陳玉婷　陶春梅　初曉麗　劉艷麗

【摘要】 目的：探討子癇前期（PE）胎盤中促紅細(xì)胞生成素（EPO）及其受體（EPOR）的表達(dá)情況及其與微血管密度（MVD）的關(guān)系。方法：選取2017年8月-2018年5月在本院收治的50例PE孕婦為研究組，其中輕度（MP）30例、重度（SP）20例，并選取同期在本院住院分娩的50例正常足月妊娠孕婦為對照組。對比EPO、EPOR、MVD水平，觀察EPO、EPOR表達(dá)情況，并記錄三組新生兒出生體重。結(jié)果：研究組EPO和EPOR陽性表達(dá)評分、MVD均低于對照組（P<0.05）;研究組新生兒出生體重低于對照組（P<0.05），且SP組新生兒體重低于MP組（P<0.05）;EPO與EPOR在兩組胎盤中的表達(dá)情況較為一致，均在滋養(yǎng)層細(xì)胞中的染色最深，鏡下呈現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒;毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞次之，而絨毛間質(zhì)無明顯染色。結(jié)論：EPO和EPOR在PE胎盤微血管的形成中發(fā)揮一定作用，且與PE嚴(yán)重程度有關(guān)，MVD降低與PE的發(fā)生存在密切關(guān)系，臨床上需要重點關(guān)注重度PE患者，有利于改善患者預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】 子癇; 促紅細(xì)胞生成素; 受體; 胎盤; 微血管密度

Study on the Expression of Erythropoietin，Erythropoietin Receptor and Microvessel Density in Patients with Preeclampsia/CHEN Yuting，TAO Chunmei，CHU Xiaoli，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（19）：-112

【Abstract】 Objective：To study the expression of erythropoietin（EPO），erythropoietin receptor（EPOR）and microvessel density（MVD）in patients with preeclampsia（PE）.Method：50 PE pregnant women admitted to our hospital from August 2017 to May 2018 were selected as study group，included 30 cases of mild（MP）and 20 cases of severe（SP），and 50 normal full-term pregnant women who delivered in our hospital during the same period were selected as control group.The levels of EPO，EPOR and MVD were compared，the expression of EPO and EPOR was observed，and the birth weight of three groups was recorded.Result：The EPO and EPOR positive expression scores and MVD in study group were lower than those of control group（P<0.05）.The birth weight of newborns in study group was lower than that of control group（P<0.05），and that in the SP group was lower than that of MP group（P<0.05）.The expression of EPO and EPOR in the placenta of two groups was similar，and the staining was the deepest in trophoblast cells，showing yellow or brown granules under the microscope，followed by capillary endothelial cells，and no obvious staining in villi stroma.Conclusion：EPO and EPOR play a certain role in the formation of placental microvasculature in PE，and are related to the severity of PE，the decrease of MVD is closely related to the occurrence of PE，clinical attention should be paid to patients with severe PE，which is beneficial to improve the prognosis of patients.

【Key words】 Preeclampsia; Erythropoietin; Receptor; Placenta; Microvessel density

First-authors address：Shajing Peoples Hospital，Shenzhen 518104，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.19.028

妊娠期高血壓疾病屬于妊娠期間較為特殊的疾病，而妊娠期高血壓中最常見的為子癇前期（Preeclampsia，PE），該疾病是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦、新生兒死亡的主要原因[1]。目前關(guān)于PE的主要發(fā)病機制并不清楚，主要可分為母體與胎盤原因：一方面患者發(fā)病與胎盤免疫、著床之間存在一定關(guān)系;另一方面由于產(chǎn)婦長時間微循環(huán)出現(xiàn)障礙，兩者之間相互作用，使得母體血供出現(xiàn)不良影響，從而影響到母體狀態(tài)，并對胎兒血供造成影響[2]。PE在生理上的改變基本為全身血管痙攣，導(dǎo)致患者出現(xiàn)內(nèi)皮損傷與局部缺血，從而導(dǎo)致患者子宮胎盤螺旋小動脈直徑明顯減少，內(nèi)皮也出現(xiàn)一定損傷、胎盤血管發(fā)生急性改變，使得子宮胎盤血管灌注發(fā)生改變，胎盤功能受到一定限制，影響胎兒發(fā)育，甚至?xí)霈F(xiàn)胎兒窘迫的情況[3]。目前臨床上大多采取無創(chuàng)超聲設(shè)備，通過在疾病早期觀察患者是否出現(xiàn)微循環(huán)障礙，并及時發(fā)現(xiàn)母嬰不良結(jié)局，對臨床治療具有重要意義[4]。超聲微血管成像可及時計算胎盤微血管密度（Microvessel density，MVD），但僅可作為間接檢查方式，難以準(zhǔn)確觀察PE患者胎盤微循環(huán)情況。促紅細(xì)胞生成素（Erythropoietin，EPO）屬于臨床新發(fā)現(xiàn)的促血管生成因子，能夠與受體（Erythropoietin Receptor，EPOR）結(jié)合引起信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，可以促進(jìn)血管生成和抗氧化等，并積極參與胎盤血管和腫瘤的形成[5]。本研究通過探討PE胎盤中EPO及其受體EPOR的表達(dá)情況以及與MVD的關(guān)系，為臨床早期診斷和治療此類患者提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年8月-2018年5月在本院收治的50例PE孕婦為研究組，其中輕度（Mild Preeclampsia，MP）30例、重度（Severe Preeclampsia，SP）20例，并選取同期在本院住院分娩的50例正常足月妊娠孕婦為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合PE診斷標(biāo)準(zhǔn);單胎;患者未出現(xiàn)肢體功能障礙;整個孕周情況較為穩(wěn)定，對照組和除PE外的研究組患者無其他妊娠期并發(fā)癥及合并癥;研究組合并出現(xiàn)胎兒生長受限（Fetal growth restriction，F(xiàn)GR）[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：家族遺傳病史;合并其他并發(fā)癥;臨床資料不完整;研究對象不能積極配合完成本研究。研究對象均知曉本研究內(nèi)容且自愿簽署知情同意書，本研究經(jīng)過院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)認(rèn)可。

1.2 方法 （1）標(biāo)本收集及處理：在胎盤娩出后，在胎盤中央切取全層胎盤組織，共分為4個0.3 cm×1.5 cm×1.5 cm大小的組織塊，添加中性甲醛，并固定24 h。石蠟包埋切片后進(jìn)行HE染色，在鏡下觀察每張切片，再選取一塊母體面完整、無纖維素沉積、無明顯梗死及出血的組織塊，進(jìn)行免疫組化染色。（2）EPO、EPOR及MVD測定：使用兔抗人單克隆抗體EPO、EPOR試劑（購自英國ABCAM公司）檢測EPO和EPOR表達(dá)情況，工作液濃度為1︰200。MVD使用鼠抗人單克隆抗體血小板-內(nèi)皮細(xì)胞黏附因子-1（CD31）與二抗（購自福建邁新公司）進(jìn)行檢測。按照二步法免疫組化檢測試劑盒說明書操作步驟進(jìn)行染色。其中，EPO、EPOR以胎肝做陽性對照，CD31以血管瘤做陽性對照，陰性對照為PBS。（3）所有檢測結(jié)果的判定均使用盲法，由兩位資深病理科醫(yī)師，在顯微鏡觀察EPO、EPOR表達(dá)情況，檢測陽性率與MVD計數(shù)。當(dāng)兩位醫(yī)師診斷出現(xiàn)分歧時需要共同閱片確定。其中EPO、EPOR陽性細(xì)胞：結(jié)構(gòu)完整，染色高于背景顏色，不著色、與背景顏色一致記0分，細(xì)胞膜內(nèi)淺黃色顆粒1分，胞漿中等細(xì)胞顆粒著色2分，胞漿粗大且彌散細(xì)小顆粒3分;陽性細(xì)胞比<10%為0分，1分為10%～50%，2分為50%～75%，3分為>75%;二者相加，陰性0分，弱陽性1～2分，中等陽性3～4分，強陽性5～6分。MVD計數(shù)判斷：通過100倍光鏡選擇毛微血管分布高密度位置，并使用400倍光鏡觀察，計算單個視野內(nèi)微血管數(shù)量，取平均值為MVD值[7]。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察兩組EPO、EPOR、MVD水平，并記錄EPO、EPOR的表達(dá)情況及三組新生兒出生體重[8]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 使用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組基線資料比較 兩組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

2.2 兩組EPO和EPOR陽性表達(dá)評分、MVD比較 研究組EPO和EPOR陽性表達(dá)評分、MVD均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 兩組胎盤中EPO、EPOR的表達(dá)情況 EPO與EPOR在兩組胎盤中的表達(dá)情況較為一致，均在滋養(yǎng)層細(xì)胞中的染色最深，鏡下呈現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒;毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞次之，而絨毛間質(zhì)無明顯染色。見圖1。

2.4 各組新生兒體重比較 研究組新生兒出生體重（2 561.54±325.52）g，低于對照組的（3 241.52±215.41）g，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=12.318，P=0.000），且SP組新生兒體重（2 141.58±305.52）g，低于MP組的（2 841.52±256.69）g，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.752，P=0.000）。

3 討論

PE為妊娠期間的特殊疾病，大多為孕20周后出現(xiàn)，患者大多表現(xiàn)為蛋白尿與高血壓，近年來其發(fā)病率不斷上升[8]。臨床對于PE的發(fā)病機制與原因探究不斷深入，主要涉及遺傳因素、免疫機制、炎癥、營養(yǎng)等，目前公認(rèn)的發(fā)病機制主要為血管重塑功能障礙，炎癥因子出現(xiàn)釋放，使得全身營養(yǎng)物質(zhì)微循環(huán)出現(xiàn)障礙，導(dǎo)致患者器官出現(xiàn)缺血，引發(fā)患者出現(xiàn)頭昏、惡心等，進(jìn)而造成FGR等情況發(fā)生[9]。而胎盤微循環(huán)障礙屬于功能異常的主要原因，會直接影響胎兒發(fā)育，對胎兒生命安全造成一定影響，因此臨床需要及時觀察患者胎盤情況，并觀察子宮內(nèi)胎兒發(fā)育情況[10]。

EPO作為糖蛋白激素，可經(jīng)過靶細(xì)胞表面發(fā)揮作用，但其大多自身缺乏酶活性，無法通過自身完成信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，而是通過與EPOR結(jié)合發(fā)生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，并發(fā)揮其生物學(xué)作用[11-12]。EPO與EPOR能夠有效促進(jìn)血管生長，并具有抗缺氧的作用，參與了胎盤血管發(fā)生腫瘤的形成與轉(zhuǎn)移，近年來在各個醫(yī)學(xué)領(lǐng)域成為研究熱點[13]。本文對比PE患者與正常孕婦體內(nèi)EPO、EPOR、MVD水平，結(jié)果顯示研究組EPO和EPOR陽性表達(dá)評分、MVD均低于對照組（P<0.05）。以往相關(guān)研究顯示，EPO與EPOR在胎盤中的蛻膜細(xì)胞中呈現(xiàn)大量黃色或棕黃色顆粒，較背景染色相比更深高，提示為陽性表達(dá)，而在胎盤絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿中則較少表達(dá)[14-15]。EPO作為近年新發(fā)現(xiàn)的血管生成調(diào)節(jié)因子，能夠參與多種病理與生理過程，合成與釋放受到多種因素的調(diào)控，主要是由于缺氧所導(dǎo)致，組織缺氧對EPO調(diào)控在于低氧誘導(dǎo)因子調(diào)控[16-17]。而這種缺氧情況往往在妊娠早期胚胎發(fā)育時出現(xiàn)，造成胎盤微血管形成減少，加重胎盤缺氧[18-20]，進(jìn)一步會對胎兒的生長發(fā)育造成一定阻礙，使得其出生體重較輕。本研究結(jié)果顯示，研究組新生兒出生體重低于對照組（P<0.05），且SP組新生兒體重低于MP組（P<0.05），證實了文獻(xiàn)[18-19]的結(jié)論。

綜上所述，EPO和EPOR在PE胎盤微血管的形成中發(fā)揮一定作用，且與PE嚴(yán)重程度有關(guān)，MVD降低與PE的發(fā)生存在密切關(guān)系。臨床上需要重點關(guān)注重度PE患者，有利于改善患者預(yù)后。

參考文獻(xiàn)

[1]張晗，劉方琮，蔡麗瑛，等.子癇前期胎盤組織中氧化應(yīng)激、熱休克蛋白27和熱休克轉(zhuǎn)錄因子1的表達(dá)及意義[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科，2017，9（8）：21-22，38.

[2]鄒娜，劉遠(yuǎn)遠(yuǎn)，裘娟，等.凋亡細(xì)胞及過氧化物酶體增殖物激活受體γ在子癇前期患者胎盤中的表達(dá)及臨床意義[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2016，38（5）：432-435.

[3]趙先蘭，王永紅，劉彩.Notch信號通路配體Jagged1在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)及其與胎盤血管形成的關(guān)系[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2016，51（9）：693-696.

[4]史亞利，賀雪萍.子癇前期胎盤組織中NK細(xì)胞數(shù)量及其配體HLA-G、HLA-E的表達(dá)及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，22（20）：2459-2462，2466.

[5] Tong S，Kaituu-Lino T J，Onda K，et al.Heme Oxygenase-1 Is Not Decreased in Preeclamptic Placenta and Does Not Negatively Regulate Placental Soluble fms-Like Tyrosine Kinase-1 or Soluble Endoglin Secretion[J].Hypertension，2015，66（5）：1073-1081.

[6]曹澤毅.中華婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：565-577.

[7]徐紅.拉貝洛爾對早發(fā)型重度子癇前期患者子宮螺旋動脈血流動力學(xué)及胎盤微血管密度的影響觀察[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科，2017，9（9）：41-43.

[8]崔世紅，高亞南，張琳琳，等.重度子癇前期胎盤組織核轉(zhuǎn)錄因子5和單核細(xì)胞趨化蛋白-1的表達(dá)與巨噬細(xì)胞浸潤[J].中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，19（12）：920-926.

[9]喬東艷，于紅，張愛鳳，等.子癇前期患者胎盤組織NK細(xì)胞及其表面KIR受體的配體HLA-G和HLA-E的表達(dá)及意義[J].臨床檢驗雜志，2015，33（10）：760-762.

[10]鐘薇.子癇前期胎盤組織中visfatin、Xiap和Survivin表達(dá)量檢測及其與血清學(xué)指標(biāo)的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，21（9）：1251-1253，1256.

[11]趙先蘭，陶雅，王永紅，等.Notch信號通路配體Jagged1、Dll4在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2017，52（3）：359-363.

[12] Wang S S，Huang Q T，Zhong M，et al.AOPPs（advanced oxidation protein products）promote apoptosis in trophoblastic cells through interference with NADPH oxidase signaling：implications for preeclampsia[J].J Matern Fetal Neonatal Med，2015，28（15）：1747-1755.

[13]包春燕，周林裕，于曉霞，等.子癇前期胎盤和蛻膜組織中Gas6、SATB1的含量及其與氧化應(yīng)激、炎性反應(yīng)的相關(guān)性[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2018，17（9）：949-952.

[14]翟麗屏，劉凌霄，喬瑞花，等.碘缺乏病病區(qū)孕婦子癇前期胎盤組織人內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄缺陷病毒W(wǎng)家族包膜蛋白基因表達(dá)的定量分析[J].中華地方病學(xué)雜志，2015，34（12）：866-869.

[15] Hannaford K E，Tuuli M，Goetzinger K R，et al.First-Trimester 3-Dimensional Power Doppler Placental Vascularization Indices From the Whole Placenta Versus the Placental Bed to Predict Preeclampsia Does Pregnancy-Associatec Plasma Protein A or Uterine Artery Doppler Sonography Help？[J].J Ultrasound Med，2015，34（6）：965-970.

[16]夏麗.轉(zhuǎn)錄因子Smad4、NF-κB在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)及其與凋亡和侵襲基因表達(dá)的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，21（10）：1375-1377，1380.

[17]李秀娟，曾娟，鄭雪絨，等.網(wǎng)狀蛋白Nogo-B在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)及其與病情相關(guān)分子表達(dá)的相關(guān)性[J].中國婦幼保健，2018，33（11）：2578-2580.

[18]蘇冬梅.子癇前期胎盤中STAT4和STAT6表達(dá)量與sFlt-1、

ADMA生成及胎盤缺氧的相關(guān)性[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，22（17）：1976-1978，1982.

[19]陳秦莉，譚琴，趙江紅，等.骨橋蛋白在子癇前期胎盤組織中的表達(dá)水平及其與滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲、凋亡的相關(guān)性[J].中國婦幼保健，2018，33（4）：899-902.

[20]王麗，趙琳.子癇前期胎盤中Gadd45α的表達(dá)及敲低Gadd45α對滋養(yǎng)細(xì)胞HTR8/Svneo的調(diào)節(jié)作用[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2016，22（2）：119-121，125.