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    脂肪酸合成酶、VEGF和MMP-9在卵巢癌組織及外周血中的表達及其臨床意義

    2019-09-27 01:24:16楊勇波
    中國實驗診斷學 2019年9期
    關鍵詞:卵巢癌良性脂肪酸

    楊勇波,伍 玲

    (1.重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院 腫瘤科,重慶405400;2.重慶市開州區(qū)中醫(yī)院 婦產(chǎn)科)

    卵巢癌是死亡率處于首位的婦科惡性腫瘤疾病[1],患者早期臨床癥狀及體征較為隱匿,極易出現(xiàn)淋巴結或其他臟器組織轉移及播散等現(xiàn)象,導致患者預后極差。上述惡性生物學行為與腫瘤的特殊物質、能量生理代謝之間存在密切的聯(lián)系,而脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)是在其中起到重要作用的功能蛋白酶,其不但可調節(jié)物質、能量生理代謝過程,還可調節(jié)細胞內信號分子的轉導,在較多惡性腫瘤組織中呈異常表達現(xiàn)象,與腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的相關性[2]。有研究證實[3],F(xiàn)ASN基因在卵巢癌發(fā)生、進展中也發(fā)揮著重要的作用,但何種作用機制使得FASN基因出現(xiàn)異常表達目前仍未研究清楚。近些年國外關于結直腸癌的實驗研究發(fā)現(xiàn)[4],F(xiàn)ASN可通過改變血管內皮生長因子(VEGF)及基質金屬蛋白酶-9 (MMP-9)分泌及生物學活性功能而調節(jié)腫瘤組織中的新生血管形成。FASN在卵巢癌中是否也有存在上述情況目前尚無相關文獻報道,因此本研究擬觀察FASN、VEGF和MMP-9在卵巢癌組織及外周血中的表達,并探討其臨床意義。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料

    選擇本院腫瘤科、婦產(chǎn)科2016年2月-2018年5月期間住院治療的110例患者作為研究對象,術后經(jīng)病理組織檢查均已確診,所有患者手術治療前均未經(jīng)任何治療,其中卵巢癌患者38例,平均年齡為(48.4±6.3)歲;卵巢良性腫瘤患者40例,平均年齡為(47.7±7.1)歲;因子宮良性病理改變而實施卵巢切除治療的患者32例,平均年齡為(48.1±7.8)歲。各組患者年齡經(jīng)統(tǒng)計學分析比較無顯著性差異(P>0.05),所有患者均知曉研究內容并簽署知情同意書,本課題已獲得醫(yī)院倫理委員會審核及批準。

    1.2 實驗試劑

    兔抗人FASN、VEGF、MMP-9單克隆抗體均購自美國Santa公司,免疫組織化學試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司,DAB顯色試劑盒購自武漢博士德生物技術有限公司,血清FASN酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒購自北京華夏遠洋科技有限公司,血清VEGF、MMP-9 ELISA試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司。

    1.3 實驗檢測方法

    1.3.1FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達檢測 術后收集各組患者新鮮卵巢癌或卵巢組織標本,經(jīng)常規(guī)石蠟包埋切片處理后采用免疫組織化學法檢測FASN、VEGF和MMP-9蛋白在組織中的表達水平,由專人根據(jù)試劑盒說明書進行操作,以PBS溶液替代一抗作為陰性對照,以乳腺癌組織作為陽性對照。細胞核或細胞質染色后表現(xiàn)為棕褐色顆粒則認定為檢測結果陽性,在顯微鏡高倍視野(×400)下隨機選擇5個視野,陽性細胞數(shù)所占比例根據(jù)<5%、5%-30%、31%-70%、>70%計為0、1、2、3分,染色強度根據(jù)無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色計為0、1、2、3分,兩者計分相加所得總分>3分則視為陽性表達,分別由兩名本院工作經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師獨立閱片予以判讀。

    1.3.2血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平檢測 術前在清晨空腹狀態(tài)下抽取各組患者肘部血液5 ml,離心處理10 min后留取上層血清,采用ELISA法檢測各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平,由專人根據(jù)試劑盒說明書進行操作。

    1.4 統(tǒng)計學分析

    采用統(tǒng)計學軟件SPSS 19.0對本研究數(shù)據(jù)進行處理,各組陽性表達率比較采用χ2檢驗,各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較采用方差分析及兩兩比較,各指標之間相關性關系采用Spearman法,檢驗水準α=0.05。

    2 結果

    2.1 各組FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達水平比較

    FASN、VEGF和MMP-9蛋白在對照組、卵巢良性病變組及卵巢癌組中的陽性表達率比較均存在顯著性差異(P<0.05),卵巢癌組和卵巢良性病變組各指標陽性表達率均明顯高于對照組(P<0.05),且卵巢癌組各指標陽性表達率明顯高于卵巢良性病變組(P<0.05),見表1及圖1。

    表1 各組FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達水平比較 [n(%)]

    注:與對照組比較,*P<0.05;卵巢癌組與卵巢良性病變組比較,#P<0.05。

    A:正常卵巢組織;B:卵巢良性腫瘤組織;C:卵巢癌組織1:FASN;2:VEGF;3:MMP-9注:FASN、VEGF、MMP-9蛋白均表達在細胞漿內

    2.2 各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較

    各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較均存在顯著性差異(P<0.05),卵巢癌組和卵巢良性病變組各指標表達水平均明顯高于對照組(P<0.05),且卵巢癌組各指標表達水平明顯高于卵巢良性病變組(P<0.05),見表2。

    表2 各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較

    注:與對照組比較,*P<0.05;卵巢癌組與卵巢良性病變組比較,#P<0.05。

    2.3 FASN與VEGF、MMP-9的相關性分析

    采用Spearman法分析,卵巢癌患者病灶組織中FASN與VEGF、MMP-9呈正相關性關系(r=0.625,0.577,P<0.05),血清中FASN與VEGF、MMP-9也呈正相關性關系(r=0.684,0.608,P<0.05)。

    3 討論

    惡性腫瘤病灶組織或細胞出現(xiàn)周圍組織侵襲和淋巴結轉移是卵巢癌重要的臨床特征,也是導致卵巢癌患者放化療效果不佳以及最終死亡的重要原因,上述生物學行為是依賴較多介質因子的步驟過程,尤其以VEGF和MMP-9起到的作用最為重要[5]。MMP-9屬于基質金屬蛋白酶家族成員,可有效降解血管基底膜以及其他細胞外基質(extracellular matrix,ECM)成分,使得毛細血管更容易形成血管腔解剖結構,也有助于VEGF順利轉移至血管內皮細胞和血管基底膜表面,從而明顯促進內皮細胞的分裂過程,顯著性增加毛細血管的通透性,增強內皮細胞增殖生長和遷移等生物學功能,最終導致新生血管在腫瘤病灶組織內的大量形成[6,7]。同時VEGF還可明顯提高整合素在內皮細胞以及惡性腫瘤細胞上的表達水平,有助于惡性腫瘤細胞出現(xiàn)遷移、黏附和浸潤等惡性生物學行為[8]。此外,國外研究還發(fā)現(xiàn)[9],VEGF可間接促進MMP-9的合成分泌,并明顯增加后者的生物學活性功能。本研究顯示,卵巢癌患者組織及血清VEGF、MMP-9水平均明顯高于卵巢良性病變患者及對照組,提示VEGF和MMP-9在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著相互協(xié)同的作用,共同促進新生血管組織的形成、增強腫瘤細胞的浸潤和轉移等生物學功能。

    腫瘤細胞還具有重新編程能量生理代謝等特征性行為,不管是處于有氧微環(huán)境狀態(tài)或是缺氧微環(huán)境狀態(tài),其更易將大量葡萄糖代謝成為乳酸,進而通過增強脂肪酸氧化磷酸化生物學途徑進行物質合成、能量產(chǎn)生,最終在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用[10]。一般情況下,正常細胞傾向于攝取外源性脂肪酸,而腫瘤細胞則主要攝取內源性脂肪酸,并以脂滴形式將脂肪酸予以大量儲存[11]。正常人體可通過日常飲食獲取脂肪酸,故組織或血清中FASN不表達或呈低表達現(xiàn)象,而腫瘤組織對內源性脂肪酸的需求量較多,因此在結直腸癌、胰腺癌等多種類型惡性腫瘤病灶組織中均可見FASN過表達現(xiàn)象[12,13]。本研究也發(fā)現(xiàn),卵巢癌患者組織及血清FASN水平明顯高于卵巢良性病變患者及對照組,與上述研究一致。相關研究還發(fā)現(xiàn)[14-16],F(xiàn)ASN表達水平過高預示著較多腫瘤患者預后情況不佳。目前研究證實[17],F(xiàn)ASN在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程以及周圍組織侵襲、淋巴結轉移等多方面有著重要作用,但關于FASN過表達的機制研究極為復雜,主要為轉錄水平、翻譯后水平及微環(huán)境切應力等方面[18]。本研究顯示卵巢癌患者病灶組織及血清中FASN與VEGF、MMP-9均呈正相關性關系(P<0.05),提示FASN可能通過增強VEGF、MMP-9表達而在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。FASN作為在細胞脂質生理代謝過程中起著重要作用的一種酶,有希望成為臨床早期診斷卵巢癌的實驗室標志物和新的治療靶點。

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