脂肪酸合成酶、VEGF和MMP-9在卵巢癌組織及外周血中的表達及其臨床意義

楊勇波，伍 玲

(1.重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院 腫瘤科,重慶405400;2.重慶市開州區(qū)中醫(yī)院 婦產(chǎn)科)

卵巢癌是死亡率處于首位的婦科惡性腫瘤疾病[1]，患者早期臨床癥狀及體征較為隱匿，極易出現(xiàn)淋巴結或其他臟器組織轉移及播散等現(xiàn)象，導致患者預后極差。上述惡性生物學行為與腫瘤的特殊物質、能量生理代謝之間存在密切的聯(lián)系，而脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FASN)是在其中起到重要作用的功能蛋白酶，其不但可調節(jié)物質、能量生理代謝過程，還可調節(jié)細胞內信號分子的轉導，在較多惡性腫瘤組織中呈異常表達現(xiàn)象，與腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的相關性[2]。有研究證實[3]，F(xiàn)ASN基因在卵巢癌發(fā)生、進展中也發(fā)揮著重要的作用，但何種作用機制使得FASN基因出現(xiàn)異常表達目前仍未研究清楚。近些年國外關于結直腸癌的實驗研究發(fā)現(xiàn)[4]，F(xiàn)ASN可通過改變血管內皮生長因子(VEGF)及基質金屬蛋白酶-9 (MMP-9)分泌及生物學活性功能而調節(jié)腫瘤組織中的新生血管形成。FASN在卵巢癌中是否也有存在上述情況目前尚無相關文獻報道，因此本研究擬觀察FASN、VEGF和MMP-9在卵巢癌組織及外周血中的表達，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇本院腫瘤科、婦產(chǎn)科2016年2月-2018年5月期間住院治療的110例患者作為研究對象，術后經(jīng)病理組織檢查均已確診，所有患者手術治療前均未經(jīng)任何治療，其中卵巢癌患者38例，平均年齡為(48.4±6.3)歲；卵巢良性腫瘤患者40例，平均年齡為(47.7±7.1)歲；因子宮良性病理改變而實施卵巢切除治療的患者32例，平均年齡為(48.1±7.8)歲。各組患者年齡經(jīng)統(tǒng)計學分析比較無顯著性差異(P>0.05)，所有患者均知曉研究內容并簽署知情同意書，本課題已獲得醫(yī)院倫理委員會審核及批準。

1.2 實驗試劑

兔抗人FASN、VEGF、MMP-9單克隆抗體均購自美國Santa公司，免疫組織化學試劑盒購于北京中杉金橋生物技術有限公司，DAB顯色試劑盒購自武漢博士德生物技術有限公司，血清FASN酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒購自北京華夏遠洋科技有限公司，血清VEGF、MMP-9 ELISA試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司。

1.3 實驗檢測方法

1.3.1FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達檢測 術后收集各組患者新鮮卵巢癌或卵巢組織標本，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋切片處理后采用免疫組織化學法檢測FASN、VEGF和MMP-9蛋白在組織中的表達水平，由專人根據(jù)試劑盒說明書進行操作，以PBS溶液替代一抗作為陰性對照，以乳腺癌組織作為陽性對照。細胞核或細胞質染色后表現(xiàn)為棕褐色顆粒則認定為檢測結果陽性，在顯微鏡高倍視野(×400)下隨機選擇5個視野，陽性細胞數(shù)所占比例根據(jù)<5%、5%-30%、31%-70%、>70%計為0、1、2、3分，染色強度根據(jù)無著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色計為0、1、2、3分，兩者計分相加所得總分>3分則視為陽性表達，分別由兩名本院工作經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師獨立閱片予以判讀。

1.3.2血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平檢測 術前在清晨空腹狀態(tài)下抽取各組患者肘部血液5 ml，離心處理10 min后留取上層血清，采用ELISA法檢測各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平，由專人根據(jù)試劑盒說明書進行操作。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用統(tǒng)計學軟件SPSS 19.0對本研究數(shù)據(jù)進行處理，各組陽性表達率比較采用χ2檢驗，各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較采用方差分析及兩兩比較，各指標之間相關性關系采用Spearman法，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 各組FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達水平比較

FASN、VEGF和MMP-9蛋白在對照組、卵巢良性病變組及卵巢癌組中的陽性表達率比較均存在顯著性差異(P<0.05)，卵巢癌組和卵巢良性病變組各指標陽性表達率均明顯高于對照組(P<0.05)，且卵巢癌組各指標陽性表達率明顯高于卵巢良性病變組(P<0.05)，見表1及圖1。

表1 各組FASN、VEGF和MMP-9蛋白表達水平比較 [n(%)]

注：與對照組比較，*P<0.05；卵巢癌組與卵巢良性病變組比較，#P<0.05。

A：正常卵巢組織；B：卵巢良性腫瘤組織；C：卵巢癌組織1：FASN；2：VEGF；3：MMP-9注：FASN、VEGF、MMP-9蛋白均表達在細胞漿內

2.2 各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較

各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較均存在顯著性差異(P<0.05)，卵巢癌組和卵巢良性病變組各指標表達水平均明顯高于對照組(P<0.05)，且卵巢癌組各指標表達水平明顯高于卵巢良性病變組(P<0.05)，見表2。

表2 各組血清FASN、VEGF和MMP-9表達水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；卵巢癌組與卵巢良性病變組比較，#P<0.05。

2.3 FASN與VEGF、MMP-9的相關性分析

采用Spearman法分析，卵巢癌患者病灶組織中FASN與VEGF、MMP-9呈正相關性關系(r=0.625，0.577，P<0.05)，血清中FASN與VEGF、MMP-9也呈正相關性關系(r=0.684，0.608，P<0.05)。

3 討論

惡性腫瘤病灶組織或細胞出現(xiàn)周圍組織侵襲和淋巴結轉移是卵巢癌重要的臨床特征，也是導致卵巢癌患者放化療效果不佳以及最終死亡的重要原因，上述生物學行為是依賴較多介質因子的步驟過程，尤其以VEGF和MMP-9起到的作用最為重要[5]。MMP-9屬于基質金屬蛋白酶家族成員，可有效降解血管基底膜以及其他細胞外基質(extracellular matrix,ECM)成分，使得毛細血管更容易形成血管腔解剖結構，也有助于VEGF順利轉移至血管內皮細胞和血管基底膜表面，從而明顯促進內皮細胞的分裂過程，顯著性增加毛細血管的通透性，增強內皮細胞增殖生長和遷移等生物學功能，最終導致新生血管在腫瘤病灶組織內的大量形成[6,7]。同時VEGF還可明顯提高整合素在內皮細胞以及惡性腫瘤細胞上的表達水平，有助于惡性腫瘤細胞出現(xiàn)遷移、黏附和浸潤等惡性生物學行為[8]。此外，國外研究還發(fā)現(xiàn)[9]，VEGF可間接促進MMP-9的合成分泌，并明顯增加后者的生物學活性功能。本研究顯示，卵巢癌患者組織及血清VEGF、MMP-9水平均明顯高于卵巢良性病變患者及對照組，提示VEGF和MMP-9在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程中起著相互協(xié)同的作用，共同促進新生血管組織的形成、增強腫瘤細胞的浸潤和轉移等生物學功能。

腫瘤細胞還具有重新編程能量生理代謝等特征性行為，不管是處于有氧微環(huán)境狀態(tài)或是缺氧微環(huán)境狀態(tài)，其更易將大量葡萄糖代謝成為乳酸，進而通過增強脂肪酸氧化磷酸化生物學途徑進行物質合成、能量產(chǎn)生，最終在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起到重要作用[10]。一般情況下，正常細胞傾向于攝取外源性脂肪酸，而腫瘤細胞則主要攝取內源性脂肪酸，并以脂滴形式將脂肪酸予以大量儲存[11]。正常人體可通過日常飲食獲取脂肪酸，故組織或血清中FASN不表達或呈低表達現(xiàn)象，而腫瘤組織對內源性脂肪酸的需求量較多，因此在結直腸癌、胰腺癌等多種類型惡性腫瘤病灶組織中均可見FASN過表達現(xiàn)象[12,13]。本研究也發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者組織及血清FASN水平明顯高于卵巢良性病變患者及對照組，與上述研究一致。相關研究還發(fā)現(xiàn)[14-16]，F(xiàn)ASN表達水平過高預示著較多腫瘤患者預后情況不佳。目前研究證實[17]，F(xiàn)ASN在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展過程以及周圍組織侵襲、淋巴結轉移等多方面有著重要作用，但關于FASN過表達的機制研究極為復雜，主要為轉錄水平、翻譯后水平及微環(huán)境切應力等方面[18]。本研究顯示卵巢癌患者病灶組織及血清中FASN與VEGF、MMP-9均呈正相關性關系(P<0.05)，提示FASN可能通過增強VEGF、MMP-9表達而在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。FASN作為在細胞脂質生理代謝過程中起著重要作用的一種酶，有希望成為臨床早期診斷卵巢癌的實驗室標志物和新的治療靶點。