頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜聯(lián)用法檢測止痛化癥膠囊揮發(fā)性成分

楊娜，劉俊麗，王涵，劉金平，李平亞,董慶海

（吉林大學藥學院人參創(chuàng)新藥物開發(fā)國家地方聯(lián)合工程研究中心，長春 130021）

止痛化癥膠囊為硬膠囊，內容物為棕褐色和黑褐色顆粒，氣微香，味苦、微咸，由黨參、炙黃芪、炒白術、丹參、當歸、雞血藤、三棱、莪術、芡實、山藥、延胡索、川楝子、魚腥草、北敗醬、蜈蚣、全蝎、土鱉蟲、炮姜、肉桂19 味藥物組成，主治氣虛血瘀所致的月經(jīng)不調、痛經(jīng)、慢性盆腔炎等。黨參、炙黃芪補血益氣[1]，具有免疫調節(jié)[2]和抗炎[3]作用；白術、山藥、芡實補益脾胃、益腎氣[4-6]；當歸、丹參、雞血藤具有活血補血、調經(jīng)止痛、舒經(jīng)活絡[7]、促進微血管內皮細胞和微血管增殖的作用[8]；三棱、莪術行氣破血、消積止痛，具有較好的調節(jié)內分泌激素水平[9]、抗血栓、抗炎、抗纖維組織增生等作用；延胡索、川楝子疏肝理氣、鎮(zhèn)痛抗炎[10]，又有類激素樣作用，能緩解一系列圍絕經(jīng)期癥狀；諸蟲類藥攻竄通絡、活血止痛；姜、肉桂散寒止痛、活血通經(jīng)。全方補中有消、攻中有補，標本兼治、攻補兼施，扶正不留瘀、祛瘀不傷正，共奏軟堅散結、祛瘀止痛之效[11]。

固相微萃取技術（Solid phase microext-raction,SPME）屬于非溶劑萃取法，是一種新型的樣品預處理方法[12]。此提取方法無溶劑、快速且靈敏，可以使樣品的制備最小化[13]。通過纖維頭從樣品中吸附待測物，并解吸于分析設備中的一種無溶劑樣品預處理技術，集采集、萃取、濃縮于一體[14]，裝置簡單、操作方便、適合與其他分析儀器連用。為全面了解止痛化癥膠囊的揮發(fā)性成分，本試驗首次采用頂空固相微萃取-氣相色譜-質譜聯(lián)用技術對止痛化癥膠囊的揮發(fā)性成分進行分析鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

止痛化癥膠囊（規(guī)格0.3 g/粒，國藥準字Z22020845，產品批號：160701，吉林金寶藥業(yè)股份有限公司）；5975-6890N 氣相色譜-質譜聯(lián)用儀、萃取纖維頭、樣品瓶（美國Agilent 公司）；手動固相微萃取裝置（美國Supelco公司）；HP-1510 氣相色譜頂空加熱器（上海濟成分析儀器有限公司）；FA1104N 型電子分析天平（上海菁華科技儀器有限公司）。

1.2 試驗方法

1.2.1 揮發(fā)性成分的提取 將固相微萃取的100um PDMS纖維萃取頭置于氣相色譜的進樣口，260 ℃、1 mL/min 下老化10 min。止痛化癥膠囊去膠囊殼、藥末粉碎、過200 目篩，稱取1.0 g 的粉碎后的藥末置于20 mL 樣品瓶中，密封。60 ℃下頂空萃取60 min，隨后從樣品瓶中拔出萃取頭，立即插入色譜儀進樣口，260 ℃解吸 2 min。

1.2.2 GC-MS分析 色譜條件：Agilent HP-35 氣相毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25um）；程序升溫：起始溫度60 ℃，保持 3 min，以 5 ℃/min升溫至 280 ℃，維持 280℃至完成分析；汽化室溫度：260 ℃；載氣：He（純度99.99%）；柱流量：1.0 mL/min，不分流進樣。質譜條件：電子電離源溫度：230 ℃；四級桿溫度：150 ℃；電子轟擊能量：70 eV；溶劑延遲：4 min；數(shù)據(jù)采集模式：全掃描；質量掃描范圍（m/z）：20～600；掃描速度：150 u/s。

峰面積歸一化法計算各組分的相對質量分數(shù)，對相對質量分數(shù)大于0.01%的揮發(fā)性成分進行積分并鑒定，利用Wiley7Nist05、NIST05 這2 種質譜數(shù)據(jù)進行計算機檢索比對，而后進行人工圖譜解析，確定化合物結構。

2 結果與分析

應用HS-SPME 技術，收集止痛化癥膠囊中的揮發(fā)性成分，熱脫附后經(jīng)GC-MS 分析，共檢出70 個色譜峰，SPME-GC-MS 分析總離子流圖見圖1。

圖1 固相微萃取止痛化癥膠囊揮發(fā)性總離子流Fig.1 Total ion current chromatogram of volatile components from zhengtong-huazheng capsules by SPME

通過HPMSD化學工作站，檢索NIST02.L標準質譜圖庫，結合人工圖譜解析，共鑒定出70 種化學成分，已鑒定的化合物主要包括烯烴、有機酸、醛、酮、酯、雜環(huán)和芳香類化合物，占總流出峰面積的98.27%，采用面積歸一化法確定各組分的相對含量見表1。其中，含量較高的揮發(fā)性成分分別是 5-甲基-2-糠醛（18.47%）、焦粘醛（16.23%）、2-乙酰吡咯（7.17%）、醋酸（5.79%）、薄荷酮（4.84%）、1-（2-呋喃基）乙酮（4.58%）等。

表1 止痛化癥膠囊揮發(fā)性成分的SPME-GC-MS 分析結果Table 1 Analysis of volatile components of zhengtong-huazheng capsules by SPME-GC-MS

續(xù)表1

3 結論

本研究首次采用SPME-GC-MS 技術，分析止痛化癥膠囊中的揮發(fā)性成分，共鑒定了70 種化合物。結果表明，止痛化癥膠囊揮發(fā)性成分中以烯烴、有機酸、醛、酮、酯、雜環(huán)和芳香類化合物為主，含量較高的單體成分有5-甲基-2-糠醛（18.47%）、焦粘醛（16.23%）、2-乙酰吡咯（7.17%）、醋酸（5.79%）、薄荷酮（4.84%）、1-（2-呋喃基）乙酮（4.58%）等。其中，糠醛類物質化學性質活潑，5-甲基-2-糠醛和焦粘醛是重要的食品工業(yè)香料組分，也是醫(yī)藥、農藥、香水等的重要中間體，更是重要的抗癌藥物[15]；醋酸等有機酸類化合物藥理作用廣泛，在心血管疾病中有廣泛的應用，具有抗炎癥反應、抑制血小板聚集、抗血栓、抗氧化、誘導腫瘤細胞凋亡等功效[16]，可能與止痛化癥膠囊益氣活血、散結止痛的功效相關[17]；薄荷酮屬于單萜類化合物，具有抗病毒、抗炎、利膽、促滲等作用[18-19]。

綜上所述，本研究首次采用SPME-GC-MS 技術，測定了止痛化癥膠囊揮發(fā)性成分的含量，較為全面地對其揮發(fā)性成分進行分析，結果表明，止痛化癥膠囊的揮發(fā)性成分豐富，為止痛化癥膠囊的進一步研究和質量控制提供了科學依據(jù)。