健宮散對(duì)產(chǎn)后子宮炎奶牛生殖激素的影響

喬彥杰，張保軍，梁小瑞，王丹陽(yáng)，谷新利，劉賢俠

（石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832003）

隨著奶牛業(yè)的不斷發(fā)展，不孕癥防治引起更多重視，其中子宮炎是引起奶牛不孕癥的病癥之一。Tsousis等[1]報(bào)道，奶?；甲訉m內(nèi)膜炎會(huì)增加1.5 倍淘汰率；Goshen 等[2]報(bào)道，以色列奶?；甲訉m內(nèi)膜炎后其泌乳期產(chǎn)奶量平均降低300～500 kg，可見(jiàn)子宮炎嚴(yán)重影響奶牛的生產(chǎn)性能，易造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。激素是動(dòng)物內(nèi)分泌細(xì)胞合成的一類(lèi)化學(xué)物質(zhì)，通過(guò)傳遞信息來(lái)調(diào)節(jié)組織細(xì)胞，從而影響動(dòng)物機(jī)體的生理活動(dòng)。雌二醇（E2）能誘發(fā)母畜發(fā)情，使子宮頸松弛開(kāi)張，促進(jìn)滲出物排出，使腺體分泌增加，防止子宮感染[3]；崔世泉[4]報(bào)道，黃體生成素（LH）可以促進(jìn)黃體形成并維持黃體分泌雌激素和孕激素；祝曉麗[5]報(bào)道，促卵泡生成素（FSH）與E2、LH 的協(xié)同作用可促進(jìn)卵泡發(fā)育、成熟、排卵。

健宮散是由石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院中獸醫(yī)學(xué)研究室研制的超微粉散劑，采用活血化瘀、補(bǔ)血補(bǔ)氣的原則，可調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)。健宮散配方中有益母草、桃仁、川芎具有活血祛瘀、活血行氣作用[6-7]。本試驗(yàn)旨在研究健宮散對(duì)子宮炎奶牛E2、FSH、LH 的影響，探討健宮散治療奶牛子宮炎的作用機(jī)理，以期為中藥防治奶牛子宮炎提供技術(shù)支撐，也為該藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)于2017 年9 月—2018 年6 月在石河子西部牧業(yè)良繁中心奶牛場(chǎng)進(jìn)行。選取18 頭年齡、胎次、體況評(píng)分差異不顯著的荷斯坦奶牛，通過(guò)50s 型Tringa Vet 獸用便攜式B 超儀（荷蘭Piemed ICAL 公司生產(chǎn)）檢查，分為患病組、治療組、正常組，每組各6頭。治療組平均年齡為5～6 歲，患病組平均年齡5～6 歲，正常組平均年齡為4～5 歲。正常組體況評(píng)分在2.8～3.8，其中2、3、5 胎各2 頭。患子宮炎奶牛12 頭，6 頭作為治療組，6 頭作為患病組，其中2 胎和3 胎各3 頭、4 胎和5 胎及6 胎各2 頭，體況評(píng)分在2.9～4.5。

治療組每日灌服中藥健宮散400 g/ 頭，患病組與正常組灌服生理鹽水400 g/頭。健宮散由益母草、當(dāng)歸、川芎、五靈脂、桃仁、甘草等中藥組成。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 采血投藥時(shí)間 治療組在每天08:00—11:00 灌服健宮散400 g 1 次，連續(xù)1 個(gè)療程（7 d）。治療組灌服健宮散前通過(guò)尾靜脈采血1 次（一次性采血管購(gòu)自三門(mén)縣民生醫(yī)藥有限公司），用藥中期采血1 次（灌服中藥的第3 天），灌服健宮散結(jié)束后第1、4、7、11、15、20 天各采血1 次，每次10 mL/頭，共采血8 次。置于室溫析出血清，收集血清-80℃超低溫冰箱（美國(guó)賽默飛世爾科技公司生產(chǎn)）保存，待檢。正常組、患病組則每天灌服無(wú)菌生理鹽水400 g 1 次，灌藥時(shí)間與采血時(shí)間同治療組。

1.2.2 激素含量測(cè)定 采用雙抗夾心ELISA 法檢測(cè)血清E2、FSH 和LH 含量，檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自上海藍(lán)基生物科技有限公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 相關(guān)數(shù)據(jù)用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件中的One-Way ANNOVA 的運(yùn)算模塊進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan's 法進(jìn)行多重比較。結(jié)果以平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差形式表示，以P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

由表1 可知，用藥前正常組的E2水平與治療組、患病組差異顯著；用藥中、停藥后各時(shí)間點(diǎn)3 組之間E2水平差異顯著。停藥后1 d 患病組和正常組的FSH 水平差異不顯著。3 組停藥后4、7 d FSH 水平差異顯著；停藥后11 、15、20 d 治療組FSH 水平高于患病組（P＜0.05）。用藥前正常組LH 水平與治療組差異顯著，患病組與正常組、治療組差異不顯著；用藥中、停藥后1、4、7、11 d 3 組之間LH 水平差異顯著；停藥后15 d 治療組LH 水平高于正常組、患病組（P＜0.05）；停藥后20 d治療組LH 水平與患病組、正常組差異不顯著，患病組LH 水平與正常組差異顯著。

健宮散治療后，E2、FSH、LH 都顯著上升，E2出現(xiàn)2 個(gè)峰值，即在停藥后1 d 達(dá)到最高峰，峰值為1 438.33 pg/mL；停藥后7 d 達(dá)到第2 個(gè)高峰，峰值為1 288.93 pg/mL；FSH 在停藥后4 d 達(dá)到高峰，峰值為10.61 ng/mL；LH 在用藥中達(dá)到高峰，峰值為14.74 ng/mL。其中治療組E2、FSH、LH 的峰值顯著高于正常組、患病組，而LH 的峰值比正常組、患病組峰值提前。

3 討 論

3.1 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎的治則 中獸醫(yī)認(rèn)為，子宮內(nèi)膜炎屬濕熱帶下。濕為長(zhǎng)夏之氣，傷于濕者，帶下污穢，黏膩停滯；熱為陽(yáng)盛所生，迫津液外滲，消灼陰液[8-9]。實(shí)際生產(chǎn)中由于奶牛圍產(chǎn)期營(yíng)養(yǎng)不良、產(chǎn)犢努責(zé)過(guò)度消耗、產(chǎn)后護(hù)理不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體元?dú)馓潛p、寒邪郁結(jié)、氣血凝滯而發(fā)病[10]。根據(jù)中獸醫(yī)辨證論治的理論，應(yīng)理氣化瘀、清熱祛濕。中藥復(fù)方健宮散采用活血化瘀、補(bǔ)血補(bǔ)氣的原則，方中益母草、桃仁、川芎可活血祛瘀、活血行氣，五靈脂可疏通血脈、散瘀止痛，當(dāng)歸能補(bǔ)血養(yǎng)血、活血止痛，甘草能補(bǔ)脾益氣、清熱解毒[6-7]。因此，健宮散可調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)機(jī)體恢復(fù)，對(duì)奶牛子宮炎具有明顯治療效果。

3.2 健宮散治療奶牛產(chǎn)后子宮炎的激素變化

3.2.1 中藥復(fù)方治療前后E2的變化 E2是生理活性最強(qiáng)的一種雌激素，可促進(jìn)子宮平滑肌收縮，增加子宮血液循環(huán)和陰道內(nèi)黏液的分泌，從而抵御外界細(xì)菌污染，提高子宮的免疫能力[3]。劉相洋[11]報(bào)道，奶牛E2水平在整個(gè)發(fā)情周期有2 次分泌高峰且伴大卵泡出現(xiàn)，分別在發(fā)情的第4 天和第12 天。高樹(shù)等[12]報(bào)道，在奶牛的正常發(fā)情周期中E2有3～4次分泌高峰，到發(fā)情周期的后期E2分泌開(kāi)始升高，接近排卵時(shí)達(dá)到峰值。魏學(xué)良[13]報(bào)道，奶牛產(chǎn)后5 周E2水平出現(xiàn)最高峰，為51.2 pg/mL；胡路鋒[14]研究表明，奶牛子宮炎組E2水平在產(chǎn)后35 d 達(dá)到高峰660.49 pg/mL，而正常組E2水平在產(chǎn)后9 d 達(dá)到高峰645.11 pg/mL。本試驗(yàn)表明，患病組、正常組與治療組E2水平高峰均出現(xiàn)在停藥后1、7 d，且峰值顯著高于前人[13-14]報(bào)道的水平，可能原因：①與直腸、B 超檢查密集有關(guān)。通過(guò)直腸按摩奶牛內(nèi)部生殖器官，能夠改善局部血液循環(huán)與新陳代謝，增強(qiáng)有關(guān)激素的分泌，使生殖器官趨于正常活動(dòng)，達(dá)到發(fā)情受孕的效果[15]；②營(yíng)養(yǎng)情況、季節(jié)、胎次的差異[16]。有研究表明，胎衣不下是造成奶牛子宮炎的因素之一[17]，胎衣不下的奶牛血清中和胎盤(pán)中E2含量均低于胎衣正常排出的牛[18-19]。本試驗(yàn)表明，正常組E2水平顯著高于患病組，與朱永剛等[18]、牟瑞營(yíng)[19]研究結(jié)果一致，可能與部分奶牛存在胎衣不下有關(guān)。本試驗(yàn)中，治療組用藥前的E2水顯著低于正常組，停藥后E2水平顯著高于患病組、正常組，表明中藥復(fù)方健宮散具有升高子宮炎奶牛血液中E2含量的作用，這可能與健宮散方中含有益母草、甘草和當(dāng)歸等成分有關(guān)，通過(guò)藥物互相作用，調(diào)控E2合成與分泌，從而達(dá)到免疫力增強(qiáng)的效果。王若光等[20]報(bào)道，益母草具有雌激素樣作用，通過(guò)影響內(nèi)源性雌激素合成及代謝過(guò)程，促進(jìn)子宮恢復(fù)；陳蕙芳[21]報(bào)道，甘草兼有抗雌激素和雌激素活性功能，能影響雌激素代謝。體外甘草根提取物可促進(jìn)E2與雌激素受體結(jié)合，在雌激素應(yīng)答細(xì)胞中誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活性，增強(qiáng)E2誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性。鄧毅等[22]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸能顯著提高大鼠血清E2濃度。

表1 中藥復(fù)方治療奶牛產(chǎn)后子宮炎對(duì)E2、FSH、LH 影響

3.2.2 中藥復(fù)方治療前后FSH 的變化 FSH 是垂體分泌的一種糖蛋白類(lèi)激素，可調(diào)節(jié)性腺激素的合成和分泌，促進(jìn)卵泡發(fā)育和排卵[23-24]。姚路連[25]研究了奶牛圍產(chǎn)期血清FSH 水平的變化，發(fā)現(xiàn)在產(chǎn)后25 d FSH 水平達(dá)到峰值，為2.166 mIU/mL；高樹(shù)等[12]研究了奶牛子宮復(fù)舊期間FSH 動(dòng)態(tài)變化，發(fā)現(xiàn)FSH 在產(chǎn)后15 d 左右出現(xiàn)峰值，為7.74 mIU/mL；李桂芝等[26]研究發(fā)現(xiàn)在奶牛發(fā)情周期中FSH 水平出現(xiàn)2 個(gè)波峰，分別在第10～13 天（20.2 ng/mL）和第19～20 天（30.2 ng/mL）；魏學(xué)良[13]研究發(fā)現(xiàn)FSH 在產(chǎn)后2～3 周處于較高水平；胡路鋒[14]研究發(fā)現(xiàn)正常組奶牛FSH 濃度在產(chǎn)后第21 天達(dá)到峰值，為1.52 ng/mL，而子宮炎組奶牛FSH 濃度在產(chǎn)后第15 天降至最低，而后緩慢升高。本試驗(yàn)中患病組、治療組與正常組FSH 均呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，F(xiàn)SH 水平均于停藥后4 d 出現(xiàn)峰值，與魏學(xué)良[13]、胡路鋒[14]報(bào)道一致。胡路鋒[14]研究發(fā)現(xiàn)，產(chǎn)后13～25 d 正常組的FSH 濃度高于子宮炎組，與本試驗(yàn)結(jié)果一致，可能與健宮散中藥有效成分黃酮有關(guān)。李炳奇等[27]研究發(fā)現(xiàn)黃酮能顯著提高FSH 水平，增強(qiáng)垂體的內(nèi)分泌功能，促進(jìn)促性腺激素的合成和釋放，利于卵泡的發(fā)育和卵巢的排卵。歐陽(yáng)富龍等[28]研究發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥添加劑能提高圍產(chǎn)期奶牛血清FSH、LH 水平。陳楊超等[29]研究發(fā)現(xiàn)益母草能顯著促進(jìn)FSH 分泌。

3.2.3 中藥復(fù)方治療前后LH 的變化 LH 是受下丘腦激素GnRH 調(diào)節(jié)，協(xié)同F(xiàn)SH 促進(jìn)卵泡成熟并排卵的一種糖蛋白類(lèi)激素[24]。魏學(xué)良[13]研究發(fā)現(xiàn)奶牛LH 水平在產(chǎn)后第3 周上升。高樹(shù)等[12]研究奶牛子宮復(fù)舊期間LH動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn)LH 從產(chǎn)后第21 天開(kāi)始上升，到第24 天達(dá)峰值。姚路連[25]發(fā)現(xiàn)奶牛圍產(chǎn)期血清LH 含量在整體上呈現(xiàn)逐漸下降的變化趨勢(shì)，奶牛血清LH 含量從產(chǎn)前45 d 至產(chǎn)后10 d 緩慢下降，到產(chǎn)后20 d 急劇下降到0.108 mIU/mL，之后出現(xiàn)波動(dòng)的變化。李桂芝等[26]對(duì)奶牛發(fā)情周期中生殖激素濃度與卵泡發(fā)育進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)LH 水平出現(xiàn)2 個(gè)波峰，波峰分別在發(fā)情周期中第1～2 天和第12～13 天。本試驗(yàn)表明，用藥前治療組與正常組LH 水平差異顯著，正常組與患病組的LH 水平在停藥后1 d 達(dá)到高峰，與前人[12-13]研究結(jié)果一致；而治療組LH 水平在用藥中達(dá)到高峰，峰值為14.74 ng/mL，且治療組LH 水平顯著高于患病組；用藥后治療組與正常組差異不顯著?？赡茉蚴墙m散作用于下丘腦-垂體-卵巢軸，促進(jìn)FSH 和LH 的分泌，促進(jìn)卵泡的成熟和排卵，使得卵巢分泌的E2與孕激素協(xié)同，發(fā)動(dòng)下丘腦和垂體引起LH 釋放觸發(fā)排卵。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)中，中藥復(fù)方健宮散可以促進(jìn)性激素分泌，調(diào)節(jié)性激素代謝，提高E2、FSH 和LH 水平，因此對(duì)預(yù)防和治療奶牛子宮炎起到一定的作用。