在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中養(yǎng)殖密度對紅鰭東方鲀應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化狀態(tài)的影響

張 龍，曲克明，張 鵬，汪 魯，李衛(wèi)東，朱建新

(1 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點實驗室，中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，山東 青島 266071；2上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306；3天津海升水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，天津 300000)

近年來，循環(huán)水養(yǎng)殖憑借其養(yǎng)殖密度高、養(yǎng)殖水體污染物質(zhì)量濃度可控、養(yǎng)殖廢水可循環(huán)利用以及環(huán)境友好的優(yōu)點，促進了水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，受到廣泛關(guān)注[1-2]；循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)還有利于養(yǎng)殖水體中廢物管理和營養(yǎng)物遷移轉(zhuǎn)化，可控制養(yǎng)殖生物的疾病發(fā)生[3-5]。然而，與網(wǎng)箱養(yǎng)殖和流水養(yǎng)殖模式相比，在生產(chǎn)中循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的應(yīng)用仍然是較少的，這主要與其較高的投資和運行成本有關(guān)[6]。這就要求養(yǎng)殖生產(chǎn)者選擇經(jīng)濟價值較高的魚種進行高密度養(yǎng)殖，提高魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量和效益，從而彌補循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的投資運行成本，但是較高的養(yǎng)殖密度很可能抑制養(yǎng)殖魚類的生長性能，增加死亡率。因此，在循環(huán)水養(yǎng)殖中選擇合適的放養(yǎng)密度十分重要。養(yǎng)殖密度一直被視為影響魚類健康和產(chǎn)量的重要因素，養(yǎng)殖密度不僅會改變養(yǎng)殖水體的水質(zhì)指標(biāo)，而且可以被視作一種應(yīng)激源，對魚類生理生化指標(biāo)產(chǎn)生重要影響[7]。就生理角度而言，魚類較好的生長性能可以通過一些生理生化指標(biāo)表現(xiàn)出來，如血液血漿的生化指數(shù)。當(dāng)魚體較健康和生存條件較為適宜時，魚體血漿皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度通常是較低的，乳酸和葡萄糖水平處在正常范圍[8]。據(jù)劉寶良等[9]報道，在較高養(yǎng)殖密度條件下，大菱鲆肝臟抗氧化酶活性降低，而丙二醛水平增加。因此，檢測密度脅迫條件下魚類應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化狀態(tài)的變化對改善魚類健康具有至關(guān)重要的意義[10]。

紅鰭東方鲀(Takifugurubripes)憑借其較高的營養(yǎng)和商業(yè)價值，成為日本和中國較為普遍的養(yǎng)殖品種。一些研究已證明循環(huán)水養(yǎng)殖紅鰭東方鲀的可行性[11-12]，目前有關(guān)循環(huán)水養(yǎng)殖條件下密度脅迫對紅鰭東方鲀應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化狀態(tài)影響的研究較少。因此，本文研究養(yǎng)殖密度在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)對紅鰭東方鲀的生長性能、應(yīng)激反應(yīng)、抗氧化狀態(tài)以及養(yǎng)殖水體水質(zhì)影響，以期為提高紅鰭東方鲀的養(yǎng)殖產(chǎn)量、改善其生長環(huán)境提供理論支撐。此外，本研究還通過硝酸鹽氮急性處理試驗，探究不同硝酸鹽氮質(zhì)量濃度(1.0、 25.0、100.0 和150.0 mg/L)對紅鰭東方鲀應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化狀態(tài)的影響，以確定循環(huán)水養(yǎng)殖過程中水體硝酸鹽氮質(zhì)量濃度變化對紅鰭東方鲀生長的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗設(shè)施和養(yǎng)殖生物

循環(huán)水養(yǎng)殖試驗系統(tǒng)設(shè)計如圖1所示，主要由養(yǎng)殖池(9個，養(yǎng)殖水體30 m3/個)和水處理設(shè)備組成。水處理設(shè)備包括弧形篩、循環(huán)水泵、蛋白分離器、曝氣池、紫外消毒設(shè)備、生物濾池、液氧和羅茨鼓風(fēng)機等。生物濾池為浸沒式，可以容納水體126 m3，以聚丙烯材質(zhì)的彈性刷狀生物填料為生物膜載體。養(yǎng)殖試驗開始之前，生物濾池生物膜已經(jīng)培養(yǎng)完成。該養(yǎng)殖系統(tǒng)在之前的研究中已經(jīng)被成功應(yīng)用于紅鰭東方鲀的養(yǎng)殖[13]。本試驗所用的紅鰭東方鲀(300 g/尾)和試驗設(shè)施均由天津海升水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司提供。

圖1 紅鰭東方鲀循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)工藝流程圖

1.2 試驗設(shè)計

將紅鰭東方魨(規(guī)格300 g，共14 700尾)隨機分為3個密度組：12.5 kg /m3、16.5 kg /m3和20.0 kg /m3，分別標(biāo)記為L組、M組和H組。各個密度組處理3個重復(fù)。在試驗期間，每天投喂商品飼料3次(8:00，16:00和 22:00)，各個密度處理組日投喂量約占魚體總質(zhì)量的3.0%，根據(jù)紅鰭東方鲀攝食和體質(zhì)量情況進行適時適量調(diào)整，本試驗共進行50 d。

在試驗過程中測定一些重要的水質(zhì)指標(biāo)、魚體應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)和抗氧化能力指標(biāo)，以及魚體生長性能。水質(zhì)指標(biāo)包括水溫、pH、溶氧、鹽度、氨氮、亞硝酸鹽氮和硝酸鹽質(zhì)量濃度，每10 d測定1次。魚體應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)包括魚體血漿葡萄糖(GLU)、乳酸(LAC)、膽固醇(CHO)和皮質(zhì)醇(COR)質(zhì)量濃度；抗氧化能力指標(biāo)包括魚體肝臟總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-px)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量。上述指標(biāo)在試驗開始20 d、30 d、40 d和50 d在各養(yǎng)殖池隨機抽取10尾紅鰭東方鲀測定；試驗結(jié)束時在各個養(yǎng)殖池內(nèi)隨機抽取30尾鲀對其生物學(xué)體長和體質(zhì)量進行測量，統(tǒng)計各個養(yǎng)殖池內(nèi)魚體數(shù)量，以計算養(yǎng)殖紅鰭東方鲀的生長率、存活率以及飼料轉(zhuǎn)化率。

通過硝酸鹽氮急性處理試驗，探究不同硝酸鹽氮質(zhì)量濃度對紅鰭東方鲀應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化的影響。在試驗過程中，利用硝酸鈉和天然海水配置不同質(zhì)量濃度的硝酸鹽氮，其質(zhì)量濃度分別被控制在(1.0±0.3)、 (25.0±1.4)、(100.0±2.6)和(150.0 ± 3.3 )mg/L。試驗將平均規(guī)格為300 g的20條紅鰭東方鲀放入180 L含不同質(zhì)量濃度硝酸鹽氮的養(yǎng)殖槽中48 h進行急性毒理試驗，水體pH為7.7，溫度22 ℃。試驗結(jié)束后，每個養(yǎng)殖池內(nèi)隨機取出5條魚進行應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)和抗氧化能力指標(biāo)的測定。

1.3 取樣

在試驗開始20 d、30 d、40 d和50 d，從養(yǎng)殖池內(nèi)隨機抽取紅鰭東方鲀進行血漿和肝臟取樣操作，但在取樣之前需要禁食24 h。紅鰭東方鲀的血液通過注射器從魚體尾靜脈抽取，加入抗凝劑，經(jīng)3 000 r/ min的離心處理后獲得血漿，將處理好的血漿儲存在液氮中以備用；肝臟通過解剖獲得，選取部分儲存在液氮中待用。

1.4 分析方法

1.4.1 水質(zhì)分析

1.4.2 生長性能參數(shù)

在試驗結(jié)束后，分別使用游標(biāo)卡尺、電子天平和電子秤測量各養(yǎng)殖池內(nèi)紅鰭東方鲀的生物學(xué)體長、體質(zhì)量，并分別計算其特定增長率、存活率以及飼料轉(zhuǎn)化率，公式如下：

TSGR= 100%×(lnW1- lnW0)/t

(1)

CSR= 100%×(S1/S0)

(2)

ZFCR= 100%×(Wf/Wi)

(3)

式中，TSGR—特定增長率，%/d ；CSR—存活率；ZFCR—飼料轉(zhuǎn)化率；W1—魚體終體質(zhì)量， g；W0—魚體初始體質(zhì)量， g ；t—試驗天數(shù)， d；S1—養(yǎng)殖開始魚體數(shù)量，尾；S0—養(yǎng)殖末期魚體數(shù)量，尾；Wf—飼料利用干重，kg；Wi—魚類增加總質(zhì)量，kg。

1.4.3 應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)測試

取紅鰭東方鲀的血漿樣品加入9倍體積冰冷的生理鹽水(0.9%)，制成10%的血漿稀釋樣品，分裝到2 mL的離心管，進行應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)測定。血漿樣品的GLU、 LAC、CHO和COR質(zhì)量濃度均使用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定，測定步驟參考試劑說明書。

1.4.4 抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化指標(biāo)測定

取紅鰭東方鲀肝臟樣品，剪碎，加入9倍體積冰冷的生理鹽水(0.9%)，制成10%的勻漿，在4 ℃條件下，3 500 r/min離心15 min，取出上清液，分裝到2 mL的離心管，進行抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化測定。肝臟樣品的T-AOC、SOD、GSH-px、GSH和MDA含量均使用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定，測定步驟參考試劑說明書。

1.4.5 數(shù)據(jù)分析

所有數(shù)據(jù)均用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，使用SPSS 軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析、差異顯著性檢驗分析，用t檢驗計算P值，當(dāng)P<0.05時為差異顯著，P<0.01時為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 不同養(yǎng)殖密度對養(yǎng)殖水體水質(zhì)的影響

表1 紅鰭東方鲀在不同養(yǎng)殖密度下養(yǎng)殖水體水質(zhì)理化參數(shù)

圖2 不同養(yǎng)殖密度下水體中硝酸鹽氮質(zhì)量濃度變化

3.2 不同養(yǎng)殖密度對鲀生長性能的影響

不同養(yǎng)殖密度紅鰭東方鲀在循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)的生長參數(shù)見表2。由表2可知，不同養(yǎng)殖密度鲀從初體質(zhì)量300.00 g分別生長至585.50、576.40和542.30 g，H組與L組、M組的終體質(zhì)量、特定生長率、餌料轉(zhuǎn)化率之間存在顯著性差異(P<0.05)，且 H組鲀終體質(zhì)量、特定生長率、餌料轉(zhuǎn)化率高于L組、M組，但各密度組鲀的存活率不存在顯著性差異(P>0.05)。

表2 不同養(yǎng)殖密度對紅鰭東方鲀生長性能的影響

注：同行上標(biāo)不同字母表示差異顯著

3.3 不同養(yǎng)殖密度對鲀血漿理化指標(biāo)的影響

在試驗期間，養(yǎng)殖密度對紅鰭東方鲀的血液血漿理化指標(biāo)的改變具有重要影響(圖3)。在試驗第40天和50天，H組鲀血漿皮質(zhì)醇質(zhì)量濃度顯著高于M組和L組(P<0.05)；在試驗第50天，H組鲀血漿葡萄糖質(zhì)量濃度顯著低于M組和L組(P<0.05)，而H組鲀血漿乳酸濃度顯著高于L組(P<0.05)，但與M組鲀血漿乳酸質(zhì)量濃度則無顯著性差異(P>0.05)。

注：不同小寫字母表示差異顯著，下同

3.4 不同養(yǎng)殖密度對鲀肝臟抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化的影響

在紅鰭東方鲀養(yǎng)殖末期，養(yǎng)殖密度對鲀抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化具有重要影響(圖4)。其中，H組鲀肝臟總抗氧化能力顯著低于L組和M組(P<0.05)，但H組鲀肝臟SOD和GSH-px活性顯著低于L組(P<0.05)，這也許表明H組鲀肝臟的抗氧化能力較低。同時，H組鲀肝臟MDA含量顯著高于L組和M組(P<0.05)。

圖4 不同養(yǎng)殖密度對紅鰭東方鲀抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化的影響

3.5 不同質(zhì)量濃度對鲀血漿理化指標(biāo)的影響

圖5 不同硝酸鹽氮質(zhì)量濃度對紅鰭東方鲀血漿理化指標(biāo)的影響

3.6 不同質(zhì)量濃度對鲀肝臟抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化的影響

4 討論

4.1 養(yǎng)殖密度對循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)水體水質(zhì)變化

圖6 不同硝酸鹽氮質(zhì)量濃度對紅鰭東方鲀抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化的影響

4.2 不同養(yǎng)殖密度對鲀生長性能的影響

4.3 不同養(yǎng)殖密度對鲀應(yīng)激反應(yīng)的影響

魚類應(yīng)激反應(yīng)一般是由養(yǎng)殖水環(huán)境改變、人類活動、魚類運輸和發(fā)病以及養(yǎng)殖密度增加等因素引起的。其中，較高養(yǎng)殖密度通常被視為魚類集約化養(yǎng)殖過程中的一種慢性應(yīng)激源，對養(yǎng)殖魚體的生理生化指標(biāo)產(chǎn)生重要影響。魚類血液皮質(zhì)醇和葡萄糖含量是反映魚類抗應(yīng)激能力的重要檢測指標(biāo)。當(dāng)魚類受到應(yīng)激壓力時，魚類的下丘腦-垂體-腎間組織軸(HPI)被激活，引起頭腎細(xì)胞中皮質(zhì)醇激素的合成與釋放。魚類交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)也會受到刺激，引起腎上腺髓質(zhì)的嗜鉻細(xì)胞釋放兒茶酚胺。兒茶酚胺可以促進機體肝臟、骨骼肌和心肌內(nèi)糖原的分解，產(chǎn)生大量葡萄糖供機體短時間供能。在本試驗中，紅鰭東方鲀在高密度長期脅迫條件下血漿皮質(zhì)醇分泌量增加，促使葡萄糖消耗量增加，這就導(dǎo)致養(yǎng)殖后期高密度試驗組鲀血漿葡萄糖質(zhì)量濃度下降，這與Braun等[17]和Fotedar[20]的研究結(jié)果相吻合。本試驗中密度脅迫所消耗的葡萄糖絕大部分通過厭氧糖酵解生成乳酸，促使鲀血漿乳酸水平升高，這與Fotedar[20]研究結(jié)果相一致，而紅鰭東方鲀血漿理化指標(biāo)改變很可能是由高密度條件下魚類的空間擁擠效應(yīng)所引起的。為使魚類適應(yīng)擁擠效應(yīng)所帶來的應(yīng)激壓力和恢復(fù)正常的生理狀態(tài)，魚類需要消耗大量能量，糖異生能力增強，這也許對魚類的生長產(chǎn)生不利影響。因此，在紅鰭東方鲀集約化養(yǎng)殖中必須選擇適當(dāng)?shù)酿B(yǎng)殖密度，以降低鲀在高密度脅迫條件下應(yīng)激壓力發(fā)生的概率。

4.4 不同養(yǎng)殖密度對鲀抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化的影響

氧自由基反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)是機體新陳代謝活動的重要組成部分。在正常情況下，需氧動物的基本代謝會產(chǎn)生大量氧自由基和活性氧分子(ROS)，以維持生物機體生理生化活動和免疫功能。然而，當(dāng)生物機體內(nèi)氧自由基和ROS過多時，它們就會攻擊生物的抗氧化系統(tǒng)，造成機體抗氧化能力減弱、抗氧化酶活性和抗氧化物質(zhì)含量降低。T-AOC、SOD、GSH-px、GSH和MDA等是衡量生物機體免疫機能的重要指標(biāo)。其中，SOD是降解活性氧自由基的第一道防線，可以將超氧陰離子自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫，然后由過氧化氫酶將過氧化氫轉(zhuǎn)化為水和氧氣；GSH-px可以清除細(xì)胞內(nèi)的過氧化氫和過氧化物；GSH為一類小分子抗氧化劑，可以清除氧自由基和解毒親電體，維持巰基-二硫鍵的平衡和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。在本試驗中，當(dāng)紅鰭東方鲀養(yǎng)殖密度在20.0 kg/m3時，肝臟T-AOC、SOD和GSH-px水平明顯降低，這表明鲀在高密度脅迫條件下產(chǎn)生大量氧自由基和活性氧分子，需要消耗大量抗氧化酶和抗氧化活性物質(zhì)，導(dǎo)致其總抗氧化能力降低，這與Braun 等[17],Trenzado等[24]的研究結(jié)果相一致。紅鰭東方鲀在高密度條件下持續(xù)產(chǎn)生大量的自由基，而過多的自由基會攻擊生物膜，生成脂質(zhì)過氧化物，并最終分解成MDA。在本試驗中，在較高密度條件下紅鰭東方鲀肝臟MDA含量顯著升高，這與Sahin 等[25]、王博文等[26]研究結(jié)果相吻合。紅鰭東方鲀的脂質(zhì)過氧化很可能是由密度脅迫引起的。但在以前的非洲鯰、大菱鲆密度脅迫試驗中，魚體在高密度條件下未發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)過氧化的現(xiàn)象，這可能與試驗條件和養(yǎng)殖生物不同有關(guān)[10,12]。

4.5 不同質(zhì)量濃度對鲀應(yīng)激反應(yīng)的影響

4.6 不同質(zhì)量濃度對鲀抗氧化能力和脂質(zhì)過氧化的影響

5 結(jié)論

[2] VERDEGEM M C J,BOSMA R H,VERRETH J A J.Reducing water use for animal production through aquaculture[J].Water Resources Development,2006,22(1):101-113.

[3] PIEDRAHITA R H.Reducing the potential environmental impact of tank aquaculture effluents through intensification and recirculation[J].Aquaculture,2003,226(1/4):35-44.

[4] SUMMERFELT S T,SHARRER M J,TSUKUDA S M,et al.Process requirements for achieving full-flow disinfection of recirculating water using ozonation and UV irradiation[J].Aquacultural Engineering,2009,40(1):17-27.

[5] TAL Y,SCHREIER H J,SOWERS K R,et al.Environmentally sustainable land-based marine aquaculture[J].Aquaculture,2009,286(1/2):28-35.

[6] SCHNEIDER O,BLANCHETON J P,VARADI L,et al.Cost price and production strategies in European recirculation systems[C].Conference:Aqua 2006:Linking Tradition & Technology Highest Quality for the Consumer,Firenze (Florence),Italy,9-13 May 2006.2006:855-855.

[7] ARLINGHAUS R,COOKE S J,SCHWAB A,et al.Fish welfare:a challenge to the feelings‐based approach,with implications for recreational fishing[J].Fish and Fisheries,2007,8(1):57-71.

[8] TURNBULL J,BELL A,ADAMS C,et al.Stocking density and welfare of cage farmed Atlantic salmon:application of a multivariate analysis[J].Aquaculture,2005,243(1/4):121-132.

[9] ADAMS C E,TURNBULL J F,BELL A,et al.Multiple determinants of welfare in farmed fish:stocking density,disturbance,and aggression in Atlantic salmon (Salmosalar)[J].Canadian journal of fisheries and aquatic sciences,2007,64(2):336-344.

[10]LIU B,JIA R,HAN C,et al.Effects of stocking density on antioxidant status,metabolism and immune response in juvenile turbot (Scophthalmusmaximus)[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part C:Toxicology & Pharmacology,2016,190:1-8.

[11]KIKUCHI K,IWATA N,FURUTA T,et al.Growth of tiger pufferTakifugurubripesin closed recirculating culture system[J].Fisheries Science,2006,72(5):1042-1047.

[12]WANG Q L,ZHANG H T,REN Y Q,et al.Comparison of growth parameters of tiger puffer Takifugu rubripes from two culture systems in China[J].Aquaculture,2016,453:49-53.

[13]朱建新,劉慧,徐勇,等.循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)生物濾器負(fù)荷掛膜技術(shù)[J].漁業(yè)科學(xué)進展,2014,35(4):118-124.

[14]CHEN S,LING J,BLANCHETON J P.Nitrification kinetics of biofilm as affected by water quality factors[J].Aquacultural engineering,2006,34(3):179-197.

[15]VAN RIJN J,TAL Y,SCHREIER H J.Denitrification in recirculating systems:theory and applications[J].Aquacultural engineering,2006,34(3):364-376.

[16]GOOD C,DAVIDSON J.A review of factors influencing maturation of Atlantic salmon,Salmo salar,with focus on water recirculation aquaculture system environments[J].Journal of the World Aquaculture Society,2016,47(5):605-632.

[17]BRAUN N,DE LIMA R L,BALDISSEROTTO B,et al.Growth,biochemical and physiological responses ofSalminusbrasiliensiswith different stocking densities and handling[J].Aquaculture,2010,301(1/4):22-30.

[18]曹陽,李二超,陳立僑,等.養(yǎng)殖密度對俄羅斯鱘幼魚的生長,生理和免疫指標(biāo)的影響[J].水生生物學(xué)報,2014,38(5):968-974.

[19]FOSS A,KRISTENSEN T,?TLAND ?,et al.Effects of water reuse and stocking density on water quality,blood physiology and growth rate of juvenile cod (Gadusmorhua)[J].Aquaculture,2006,256(1/4):255-263.

[20]FOTEDAR R.Water quality,growth and stress responses of juvenile barramundi (LatescalcariferBloch),reared at four different densities in integrated recirculating aquaculture systems[J].Aquaculture,2016,458:113-120.

[21]HAN K,MATSUI S,FURUICHI M,et al.Effect of stocking density on growth,survival rate,and damage of caudal fin in larval to young puffer fish,Takifugu rubripes[J].Aquaculture Science,1994,42(4):507-514.

[22]KOTANI T,WAKIYAMA Y,IMOTO T,et al.Effect of initial stocking density on larviculture performance of the ocellate puffer,Takifugu rubripes[J].World Aquacult.Soc.2009,40:383-393.

[23]NAKAMURA I.Kumamoto Prefectural Fisheries Research Center[J].Nihon Suisan Gakkaishi,1994,60 (6):813-814.

[24]TRENZADO C E,MORALES A E,DE LA HIGUERA M.Physiological changes in rainbow trout held under crowded conditions and fed diets with different levels of vitamins E and C and highly unsaturated fatty acids (HUFA)[J].Aquaculture,2008,277(3/4):293-302.

[25]SAHIN K,YAZLAK H,ORHAN C,et al.The effect of lycopene on antioxidant status in rainbow trout (Oncorhynchusmykiss) reared under high stocking density[J].Aquaculture,2014,418:132-138.

[26]王博文,王建國,李愛華,等.擁擠脅迫后鯽魚血液皮質(zhì)醇和溶菌酶水平的變化及對病原的敏感性[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2004,11(4):408-412.

[27]GUILLETTE JR L J,EDWARDS T M.Is nitrate an ecologically relevant endocrine disruptor in vertebrates?[J].Integrative and Comparative Biology,2005,45(1):19-27.

[28]HAMLIN H J,MOORE B C,EDWARDS T M,et al.Nitrate-induced elevations in circulating sex steroid concentrations in femaleSiberiansturgeon(Acipenserbaeri) in commercial aquaculture[J].Aquaculture,2008,281(1/4):118-125.

[29]郭勤單,王有基,呂為群.溫度和鹽度對褐牙鲆幼魚滲透生理及抗氧化水平的影響[J].水生生物學(xué)報,2014,38(1):58-67.

[30]ALIKO V,OIRJO M,SULA E,et al.Antioxidant defense system,immune response and erythron profile modulation in gold fish,Carassius auratus,after acute manganese treatment[J].Fish & shellfish immunology,2018,76:101-109.

[31]BERNTSEN M H G,AATLAND A,HANDY R D.Chronic dietary mercury exposure causes oxidative stress,brain lesions,and altered behaviour in Atlantic salmon (Salmosalar) parr[J].Aquatic Toxicology,2003,65(1):55-72.

[32]ROMEO M,BENNANI N,GNASSIA-BARELLI M,et al.Cadmium and copper display different responses towards oxidative stress in the kidney of the sea bass Dicentrarchus labrax[J].Aquatic Toxicology,2000,48(2/3):185-194.

[33]THOMAS P,WOFFORD H W.Effects of cadmium and Aroclor 1254 on lipid peroxidation,glutathione peroxidase activity,and selected antioxidants in Atlantic croaker tissues[J].Aquatic toxicology,1993,27(1/2):159-177.