CMA輔助診斷超三倍體核型引起的自然流產(chǎn)

袁鵬輝 方卉 姜育燊

自然流產(chǎn)是指非人為目的造成的胚胎及其附屬物脫離母體而終止妊娠。自然流產(chǎn)的病因十分復(fù)雜，在遺傳因素引起的自然流產(chǎn)病例中，主要為染色體數(shù)目的異常，如三體、單體和多倍體等，少量為結(jié)構(gòu)異常，如倒位、缺失和重復(fù)［1］。早期的流產(chǎn)檢測(cè)方法主要為核型分析和熒光原位雜交（FISH）。核型分析分辨率低，只能檢測(cè)＞5Mbp的染色體片段的改變，不能檢測(cè)雜合性缺失（LOH）。由于需要細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程，容易被母體細(xì)胞污染，部分活性較差的細(xì)胞生長(zhǎng)還可能會(huì)被抑制，核型分析無(wú)法得到準(zhǔn)確的核型結(jié)果［2］。而FISH檢測(cè)需要特定的熒光探針，只能對(duì)特定的染色體的已知位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，且一次只能檢測(cè)單一位點(diǎn)，不適用于全基因組的篩查［3-4］。染色體微陣列分析（CMA）可以在全基因組內(nèi)檢測(cè)染色數(shù)目異常，結(jié)構(gòu)異常（微缺失微重復(fù)）和雜合性缺失，也可以區(qū)分嵌合體，但不能不能檢測(cè)染色體平衡易位（相互易位、羅伯遜易位、倒位等）。

1 病例

患者女性，39歲，高齡產(chǎn)婦，孕周8周，因胚胎停育行刮宮流產(chǎn)，臨床主訴有反復(fù)不明原因流產(chǎn)史。采集患者流產(chǎn)絨毛組織，利用Affymetrix（昂飛）提供的CytoScan 750K芯片進(jìn)行染色體微陣列分析檢測(cè)。檢測(cè)核型結(jié)果復(fù)雜，具體結(jié)果為71，XXY，+13，+22，即胚胎核型整體為三倍體，另外又增加一條13號(hào)染色體和一條22號(hào)染色體，如圖1所示。

圖1 全基因組概覽圖

2 討論

自然流產(chǎn)是指孕周＜28周，胚胎重量＜1000g，非人為目的造成的胚胎及其附屬物脫離母體而終止妊娠。據(jù)統(tǒng)計(jì)，自然流產(chǎn)的發(fā)生率為15%～40%，其中＞80%為發(fā)生在12周以?xún)?nèi)的早期流產(chǎn)［5］。自然流產(chǎn)的病因復(fù)雜，除了遺傳因素以外，還包括子宮結(jié)構(gòu)因素、內(nèi)分泌因素、感染因素、環(huán)境因素、免疫因素等［1］。在自然流產(chǎn)病例中，胚胎染色體異常的檢出率大約為60%，并且隨著流產(chǎn)次數(shù)的增加，染色體異常的比例逐漸下降［1，6］。三倍體的發(fā)生率為1%～3%，胎兒很少能存活至出生［3］。超三倍體核型（hypertriploid），是指在三倍體基礎(chǔ)上又增加一條或多條染色體，染色體條數(shù)在70（＞3×23）和80（＜3×23+1/2×23）之間的核型。三倍體病例中，約6%的病例為超三倍體核型。

本例首次在流產(chǎn)胚胎組織中報(bào)道此種超三倍體復(fù)雜核型71，XXY，+13，+22。三倍體危害較大，胎兒很少能存活至出生，少數(shù)存活的嬰兒帶有多個(gè)嚴(yán)重出生缺陷，常見(jiàn)缺陷包括：生長(zhǎng)遲緩、先天性心臟缺陷、神經(jīng)管缺陷，三倍體嬰兒出生后常只能存活幾天［7］。

13號(hào)染色體三體（T13）綜合征，又稱(chēng)為帕陶綜合征，是導(dǎo)致自然流產(chǎn)的三體綜合征之一，13號(hào)染色體的胚胎活產(chǎn)率為33%［8］。存活至出生的患兒，在新生兒中所占的比例約為1/10000，13號(hào)染色體三體患兒的臨床表型多樣，有智力障礙、運(yùn)動(dòng)障礙、小頭畸形、眼部結(jié)構(gòu)性缺陷、脊髓缺陷、肌肉骨骼發(fā)育異常、泌尿生殖系統(tǒng)異常等［9］。

22號(hào)染色體三體（T22），是常見(jiàn)的引起自然流產(chǎn)的常染色體三體類(lèi)型，22號(hào)染色體三體引起的流產(chǎn)占所有自然流產(chǎn)病例的3%～5%［10］。但是，存活至出生的22號(hào)染色體三體患兒卻較為少見(jiàn)［11］。22號(hào)染色體三體患兒的臨床表現(xiàn)為頭小畸形、無(wú)耳廓、頸蹼、唇腭裂、指端發(fā)育不良等［11-12］。 超三倍體復(fù)雜核型71，XXY，+13，+22可以認(rèn)為是在正三倍體69，XXY的基礎(chǔ)上，又增加一條13號(hào)染色體和一條22號(hào)染色體，目前暫無(wú)該染色體異常類(lèi)型引起的流產(chǎn)或者患兒病例的報(bào)道。

在本病例中，由于樣本經(jīng)過(guò)低溫運(yùn)輸，難以進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，且培養(yǎng)過(guò)程易受母體細(xì)胞污染，故而采用核型分析進(jìn)行診斷的難度較大。而目前FISH常用的探針主要針對(duì)13號(hào)染色體、18號(hào)染色體、21號(hào)染色體、X染色體和Y染色體，不能準(zhǔn)確診斷該樣本，且需要多次實(shí)驗(yàn)，成本較高。而采用CMA方法，不需要細(xì)胞培養(yǎng)，一次實(shí)驗(yàn)，就能夠獲得樣本最初全部的染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)目信息。