血清ANGPTL 2聯(lián)合EGFR對(duì)乳腺癌患的診斷價(jià)值研究*

屈 睿，胡紅心，朱紅勝

(蘇州市立醫(yī)院檢驗(yàn)科,江蘇蘇州 215000)

目前乳腺癌早期篩查和輔助診斷最具特異性的血清學(xué)生物標(biāo)志物為糖鏈抗原153(CA153)，但僅30%-50%的乳腺癌患者CA153水平出現(xiàn)明顯升高，而且結(jié)腸癌、肺癌、子宮頸癌和胰腺癌等疾病的患者也可出現(xiàn)CA153水平的升高，故CA153在乳腺癌的輔助診斷應(yīng)用中具有一定的局限性[1]。乳腺癌臨床治療中亟待解決的問題為早期診斷困難和術(shù)后易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移[2]。因此，尋找預(yù)測(cè)乳腺癌發(fā)病的血清學(xué)標(biāo)記物成為提高乳腺癌早期診斷率和尋找臨床分子治療靶點(diǎn)的研究熱點(diǎn)。有大量研究表明表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，是乳腺癌早期診斷、預(yù)后評(píng)估和分子治療靶點(diǎn)[3-4]。血管生成素樣蛋白-2(ANGPTL-2)是類似于血管生成素的糖蛋白，有研究表明其與癌癥存在密切相關(guān)性，可作為癌癥的預(yù)后或者預(yù)測(cè)性生物標(biāo)志物以及極有可能作為癌癥治療的新靶點(diǎn)[5]。目前，國內(nèi)外關(guān)于ANGPTL-2對(duì)乳腺癌患者的臨床價(jià)值研究報(bào)道較少，故本研究擬通過檢測(cè)乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平的變化，探討這兩項(xiàng)指標(biāo)在乳腺癌診斷中的價(jià)值及相關(guān)性，以期為乳腺癌的輔助診斷提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 將2017年10月至2018年10月本院經(jīng)組織病理學(xué)確診為初診乳腺癌的患者120例納入研究并作為乳腺癌組，年齡25～62歲，平均年齡(35.75±7.61)歲，其中浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌87例，浸潤(rùn)性小葉癌8例，導(dǎo)管內(nèi)原位癌25例。根據(jù)乳腺癌TNM分期(第7版)[6]進(jìn)行臨床分期，Ⅰ期患者12例，Ⅱ期患者55例，Ⅲ期患者53例。選取同時(shí)期本院收治的可手術(shù)切除治療的乳腺良性病變患者120例作為良性組，年齡24～61歲，平均年齡(36.11±6.93)歲，其中導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤37例，乳腺纖維腺瘤83例。另外，選取同期于本院進(jìn)行健康體檢的健康女性80例作為對(duì)照組，年齡23～63歲，平均年齡(34.81±7.52)歲。3組人群年齡、基礎(chǔ)疾病等一般資料方面具有可比性(P>0.05)。所有納入研究者知情且愿意參與本研究，簽署知情同意書。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)知情并審核批準(zhǔn)。

1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 乳腺癌組和良性組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均為初診并經(jīng)病理組織學(xué)確診；(2)所有患者術(shù)前均未進(jìn)行藥物治療、化療或放療等；(3)所有患者的臨床病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)患有結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌等其他惡性腫瘤和其他腫瘤并發(fā)乳腺轉(zhuǎn)移者；(2)心、肺、肝、腎功能、血脂、血糖異常者；(3)患有自身免疫性疾病者、甲狀腺疾病和妊娠者；(4)病理資料和病歷資料不完善者。

1.3方法 (1)收集患者的臨床及病理資料，分析統(tǒng)計(jì)患者的臨床和病理特征。(2)所有受試者均于治療前或者體檢當(dāng)日清晨空腹采集靜脈血5 mL，置于不含抗凝劑的紅帽真空采血管中，3 000 r/min離心10 min后，取上清進(jìn)行各指標(biāo)檢測(cè)。EGFR檢測(cè)采用ELISA法，試劑盒購于美國R&D公司，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。ANGPTL-2檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光法，儀器使用德國羅氏Cobas e601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀及其配套試劑進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.13組患者EGFR和ANGPTL-2水平的比較 3組患者血清EGFR和ANGPTL-2平均水平由高到低均依次為乳腺癌組、良性組、對(duì)照組，3組間血清ANGPTL-2水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，良性組和乳腺癌組血清EGFR水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組患者EGFR和ANGPTL-2水平的比較

注：與對(duì)照組比較,*P<0.05；與良性組比較,△P<0.05

2.2乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平與臨床病理特征的關(guān)系 腫瘤直徑≥5 cm患者血清ANGPTL-2水平明顯高于腫瘤直徑<5 cm的患者(P<0.05)，而EGFR水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；血清EGFR和ANGPTL-2水平隨著TNM分期的增加而呈升高趨勢(shì)，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；腫瘤有轉(zhuǎn)移患者的血清EGFR和ANGPTL-2水平顯著高于腫瘤無轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，見表2。

表2 乳腺癌患者EGFR和ANGPTL-2水平與臨床病理特征的關(guān)系

注：與腫瘤直徑<5 cm比較,*P<0.05；，與TNMⅠ期比較,△P<0.05；與TNM分期Ⅱ期比較,▲P<0.05；與腫瘤無轉(zhuǎn)移組比較,#P<0.05

2.3血清EGFR和ANGPTL-2水平對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值分析 繪制ROC曲線分析得出血清EGFR、ANGPTL-2以及二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌診斷的曲線下面積(AUC)分別為0.841、0.897、0.936，敏感度分別為：85.6%、80.2%、82.3%，特異度分別為62.5%、85.0%、90.2%，見圖1。

圖1 血清EGFR、ANGPTL-2以及二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌診斷的ROC曲線

2.4血清EGFR和ANGPTL-2水平在乳腺癌患者中的相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平呈正相關(guān)(r=0.52，P<0.001)，見圖2。

圖2 相關(guān)性分析

3 討 論

乳腺癌是一種發(fā)生發(fā)展機(jī)制涉及多種因素的高度異質(zhì)性惡性腫瘤，是世界范圍內(nèi)最常見的女性癌癥，也是女性癌癥死亡的最主要原因[7]。隨著人口老齡化、環(huán)境的變化和診斷技術(shù)的改進(jìn)，乳腺癌的發(fā)病率近年來呈升高趨勢(shì)，發(fā)病人群也呈年輕化，但其發(fā)病早期癥狀和體征不典型，易誤診和漏診[8]。故尋求新的檢測(cè)指標(biāo)用于乳腺癌的早期診斷和病情判斷有著重要意義。

腫瘤細(xì)胞或者腫瘤微環(huán)境的細(xì)胞分泌因子表達(dá)的改變是癌癥發(fā)生和進(jìn)展的關(guān)鍵事件。有研究報(bào)道，ANGPTL蛋白家族成員在細(xì)胞癌變和轉(zhuǎn)移發(fā)展等不同階段通過自分泌或者旁分泌等形式進(jìn)行活性調(diào)節(jié)[9]。ENDO等[10]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移性乳腺癌者血清ANGPTL-2水平顯著高于健康人或?qū)Ч茉话┗蚍寝D(zhuǎn)移性浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者，雌激素受體和孕激素受體陰性患者血清ANGPTL-2水平可反映組織學(xué)分級(jí)，尤其是“三陰”患者。而且，ENDO等[11]還檢測(cè)了攜帶MDA-MB231細(xì)胞的體內(nèi)乳腺癌移植免疫缺陷雌性小鼠血清ANGPTL-2水平的變化，結(jié)果顯示乳腺癌細(xì)胞分泌ANGPTL-2的水平隨著細(xì)胞增殖和腫瘤進(jìn)展而增加，驗(yàn)證了乳腺癌患者血清ANGPTL-2水平的變化趨勢(shì)。MASUDA等[12]發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞源性ANGPTL-2可能通過上調(diào)腫瘤細(xì)胞CXCR4的表達(dá)來增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)CXCL12信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的應(yīng)答，從而增加骨轉(zhuǎn)移，提示這可能為治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌提供了新的治療方法。本課題組發(fā)現(xiàn)乳腺癌組患者血清ANGPTL-2水平明顯高于良性組和對(duì)照組，腫瘤直徑≥5 cm患者血清ANGPTL-2水平明顯高于腫瘤直徑<5 cm患者，血清ANGPTL-2水平隨著TNM分期的增加而呈升高趨勢(shì)，腫瘤有轉(zhuǎn)移患者的血清ANGPTL-2水平顯著高于腫瘤無轉(zhuǎn)移患者。這與李峻[13]等的研究結(jié)果相符合，提示血清ANGPTL-2水平與乳腺癌的臨床病理特征存在相關(guān)性，可作為判斷乳腺癌腫瘤大小、臨床分期和轉(zhuǎn)移的潛在標(biāo)志物，為乳腺癌的臨床治療效果評(píng)估和預(yù)后判斷提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

EGFR為單鏈跨膜糖蛋白，可通過MAPK/EPK、PI3K-Akt和PLC-IP3/DAG等信號(hào)通路而產(chǎn)生Ras、PARP和Raf等細(xì)胞效應(yīng)因子而參與調(diào)控乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移和治療[14]。張功學(xué)等[15]的研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌癌組織中EGFR陽性表達(dá)和組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，組織學(xué)分級(jí)越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者,其EGFR陽性表達(dá)率越高。本研究結(jié)果顯示乳腺癌組患者血清EGFR水平明顯高于良性組和對(duì)照組，且其水平隨著TNM分期的增加而呈升高趨勢(shì)，腫瘤有轉(zhuǎn)移患者的血清EGFR水平顯著高于腫瘤無轉(zhuǎn)移患者。這表明血清EGFR水平與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展存在密切相關(guān)性。

目前尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)血清EGFR和ANGPTL-2在乳腺癌患者中的相關(guān)性以及二者聯(lián)合對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值的文獻(xiàn)報(bào)道。本研究探討了血清EGFR和ANGPTL-2聯(lián)合檢測(cè)對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清EGFR和ANGPTL-2對(duì)乳腺癌的診斷均具有較高的診斷價(jià)值，ANGPTL-2對(duì)乳腺癌的單獨(dú)診斷效價(jià)高于EGFR，二者聯(lián)合可明顯提高診斷效能。本研究還首次報(bào)道了乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平呈正相關(guān)性，這表明二者間具有某種關(guān)聯(lián)或者分子機(jī)制的聯(lián)系。

本研究雖然檢測(cè)了血清EGFR和ANGPTL-2在乳腺癌患者中的變化及其與臨床病理特征的關(guān)系，并探討了其單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值，以及分析了二者間的關(guān)系，但仍存在不足之處，如存在樣本量較少，未進(jìn)行組織水平含量檢測(cè)以及進(jìn)行二者間相互關(guān)聯(lián)的分子機(jī)制研究，這些將在后續(xù)的研究中逐一進(jìn)行完善。

4 結(jié) 論

乳腺癌患者血清EGFR和ANGPTL-2水平升高，與臨床病理特征存在密切聯(lián)系，且二者間呈正相關(guān)性，對(duì)乳腺癌具有較高的診斷價(jià)值，聯(lián)合檢測(cè)可提高對(duì)乳腺癌的診斷效能。