高速逆流色譜法從小葉金錢(qián)草中分離制備三種黃酮苷類(lèi)化合物

宋道光,樊鑫宇,徐順連,熊雯豆,段向蘭,陳 志

(青海師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,青藏高原藥用動(dòng)植物資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,青海西寧 810008)

小葉金錢(qián)草(HydrocotylesibthorpioidesLam.)為傘形科天胡荽屬植物天胡荽[1],是中國(guó)傳統(tǒng)中藥之一,可全草入藥,具有抗炎、鎮(zhèn)痛、利膽等功效[2]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道可知,小葉金錢(qián)草含有黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、甾醇和香豆素類(lèi)等化學(xué)成分,通過(guò)柱層析分離手段,能夠分離得到黃酮苷類(lèi)成分[3-4]。黃酮苷成分富含酚羥基結(jié)構(gòu),因而具有抗氧化、清除自由基等多種重要的藥理活性,進(jìn)而在食品醫(yī)藥等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[5-6]。截至目前,小葉金錢(qián)草只作為民間用藥,尚未被中國(guó)藥典收錄,因此對(duì)小葉金錢(qián)草黃酮苷類(lèi)等化學(xué)成分及藥理活性的深入研究具有重要意義。

利用傳統(tǒng)及現(xiàn)代分離手段可實(shí)現(xiàn)復(fù)雜天然產(chǎn)物的提取和分離,如硅膠、反相硅膠(ODS)、葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20)、大孔吸附樹(shù)脂和制備性高效液相色譜等。雖然上述諸多方法可以實(shí)現(xiàn)許多化合物的分離,但存在所需溶劑多、分離時(shí)間長(zhǎng)以及對(duì)填料不可逆吸附等問(wèn)題。高速逆流色譜(high speed counter-current chromatography,HSCCC)依據(jù)化合物在兩相不互溶的溶劑中的分配系數(shù)不同,可以實(shí)現(xiàn)結(jié)構(gòu)極性相似及復(fù)雜天然產(chǎn)物的分離[7]。本研究采用高速逆流色譜分離小葉金錢(qián)草中的三種極性較大的黃酮苷類(lèi)成分,這對(duì)于進(jìn)一步研究小葉金錢(qián)草的化學(xué)成分及其活性提供分離方法及思路,為以后更好地開(kāi)發(fā)小葉金錢(qián)草提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

小葉金錢(qián)草 購(gòu)于西寧城北百信大藥房,經(jīng)青海師范大學(xué)植物學(xué)陳志教授鑒定,為傘形科天胡荽屬植物天胡荽,HydrocotylesibthorpioidesLam.;葡聚糖凝膠(Sephadex LH-20) 安徽博美生物科技有限公司;氯仿、正己烷、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、乙腈、甲酸(分析純),高效液相色譜所用的乙腈(色譜純) 天津市百世化工有限公司;水 二次蒸餾水。

RE.52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;真空脫氣過(guò)濾裝置 美國(guó)Waters公司;KJ-11030AL型超聲波清洗器 深圳市科潔超聲科技有限公司;Waters 600高效液相色譜儀 美國(guó)Waters公司;Waters 2998 PAD二極管陣列檢測(cè)器 美國(guó)Waters公司;Waters 2707自動(dòng)進(jìn)樣器 美國(guó)Waters公司;HSCCC TBE-300B型高速逆流色譜儀(柱體積300 mL) 中國(guó)上海同田生化技術(shù)有限公司;N2000雙通道色譜工作站 浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司;Bruker-500 MHz NMR(AVANCE III HD)核磁共振儀 瑞士Bruker公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小葉金錢(qián)草乙酸乙酯提取物及分離樣品的制備 將購(gòu)買(mǎi)的小葉金錢(qián)草藥材用中藥粉碎機(jī)粉碎,過(guò)40目篩。稱(chēng)取20 kg藥材粉末分次置于KJ-11030AL型超聲波清洗器中,按液料比10∶1 mL/g,加入70%(V/V)乙醇溶液,于60 ℃超聲提取1 h,過(guò)濾除去藥渣,將20 kg藥渣重復(fù)提取四次。合并提取液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到棕褐色粘稠浸膏。浸膏用蒸餾水混懸,依次用10倍量的石油醚、乙酸乙酯萃取5次。將乙酸乙酯萃取液濃縮得到小葉金錢(qián)草乙酸乙酯萃取物,4 ℃避光保存?zhèn)溆谩?/p>

取50 g乙酸乙酯萃取物,用50 mL甲醇溶解后用0.45 μm濾膜過(guò)濾,濾液上樣硅膠柱層析(5 cm×150 cm),然后分別用不同比例的氯仿-甲醇(50∶1、25∶1、10∶1、5∶1、2∶1、1∶3)進(jìn)行洗脫,每梯度各洗脫2柱體積,1/20柱體積為一餾分,10.0 mL/min流速洗脫。收集氯仿-甲醇1∶3洗脫液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑,得到硅膠分離樣品。硅膠分離樣品用蒸餾水溶解,并過(guò)0.45 μm濾膜并上Sephadex LH-20柱,分別用水、10%、20%、30%、40%、50%、75%、100%甲醇洗脫,每個(gè)比例洗脫2個(gè)柱體積,1/20柱體積為一餾分,1.0 mL/min流速洗脫,收集70%甲醇洗脫組份,旋蒸除去溶劑并于-70 ℃冷凍干燥24 h,得到Sephadex LH-20分離樣品。其余甲醇洗脫餾分的化學(xué)成分另做研究。

1.2.2 高效液相色譜分析條件 色譜柱:Waters 600 SunFireTMC18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸(15～40%乙腈,0～70 min),流速為1.0 mL/min,柱溫為25 ℃,檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm,進(jìn)樣10 μL分析。高效液相色譜(HPLC-PAD)紫外光譜掃描范圍:200～400 nm。

取一定量乙酸乙酯萃取物、硅膠柱分離樣品和Sephadex LH-20分離樣品,分別用乙腈溶解,經(jīng)0.45 μm針頭過(guò)濾器過(guò)濾后,進(jìn)行HPLC分析,色譜峰面積在色譜圖中所占比例即為化合物純度。

1.2.3 高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)的選擇

1.2.3.1 溶劑系統(tǒng)的確定 參考高速逆流色譜分離黃酮苷類(lèi)化合物的相關(guān)報(bào)道選擇溶劑系統(tǒng)[8-9],這些溶劑系統(tǒng)都包含正丁醇和水,并添加其他輔助溶劑如乙酸乙酯、正己烷等。按照溶劑極性的不同,配制體積比為1∶2∶2的乙酸乙酯-正丁醇-水,1∶1∶1的正己烷-正丁醇-水和1∶1∶1∶0.1的正己烷-正丁醇-水-冰乙酸系統(tǒng),考察此三個(gè)比例系統(tǒng)對(duì)分配系數(shù)K的影響。

1.2.3.2 正己烷-正丁醇-水系統(tǒng)比例的確定 按照正己烷-正丁醇-水-冰乙酸的體積比配制溶劑系統(tǒng),比例依次為:1∶1∶1∶0.1、1∶1.5∶1∶0.1和1∶1.7∶1∶0.1,分別考察正己烷和正丁醇對(duì)分配系數(shù)K的影響。

1.2.3.3 K值的測(cè)定 通過(guò)高效液相色譜測(cè)定目標(biāo)化合物在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)K。K值定義為上相中目標(biāo)化合物的色譜峰面積(S上)除以下相中目標(biāo)化合物的色譜峰面積(S下)(K=S上/S下)。篩選K值在0.2～5.0的溶劑系統(tǒng)用于高速逆流色譜。為達(dá)到好的分離效果,待分離化合物的分配系數(shù)K值應(yīng)在0.2～5.0之間,且相鄰兩化合物的分離度(a=K1/K2,K1>K2)應(yīng)該大于1.5[10]。

1.2.4 高速逆流色譜法分離制備小葉金錢(qián)草中的黃酮苷 按比例配制正己烷-正丁醇-水-冰乙酸(1∶1.7∶1∶0.1,V/V/V/V)兩相溶劑系統(tǒng),置于分液漏斗中充分振搖后,在室溫下靜置過(guò)夜。再將上下相進(jìn)行分離,并超聲脫氣20 min,上相為固定相(正己烷、正丁醇),下相為流動(dòng)相(水、冰乙酸)。以20 mL/min的流速將上相泵入主機(jī)。待主機(jī)中充滿上相后,啟動(dòng)主機(jī)正相旋轉(zhuǎn)按鍵FWD,調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800 r/min。再以2 mL/min的流速泵入超聲脫氣后的下相。待流動(dòng)相流出主機(jī)后,平衡數(shù)分鐘等待基線平穩(wěn)后,計(jì)算固定相保留率(Sf),計(jì)算方法為:Sf(%)=[(螺旋管體積-流出固定相體積)/螺旋管體積]×100。

開(kāi)啟TBD 2000檢測(cè)系統(tǒng),設(shè)置檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,采集數(shù)據(jù)。取Sephadex LH-20純化后的樣品100 mg,用20 mL上相溶解,由進(jìn)樣閥上樣,記錄色譜圖,收集各分離組分。

1.2.5 化合物核磁共振波譜表征 通過(guò)對(duì)已分離化合物進(jìn)行1H NMR和13C NMR譜圖的測(cè)定,將化合物1H NMR和13C NMR圖譜在MestReNova中處理,并對(duì)化學(xué)位移進(jìn)行積分和偶和常數(shù)(J)的計(jì)算。J的計(jì)算方法為:(低場(chǎng)化學(xué)位移-高場(chǎng)化學(xué)位移)×核磁兆數(shù)。1H NMR二重峰、雙二重峰(分別表示為d及dd)需計(jì)算J值,單峰(s)、三重峰(t)及以上不計(jì)算J值。通過(guò)與文獻(xiàn)化合物報(bào)道數(shù)據(jù)進(jìn)行1H NMR化學(xué)位移及J和13C NMR化學(xué)位移比對(duì),結(jié)果一致即確定化合物結(jié)構(gòu),結(jié)構(gòu)式通過(guò)ChemBioDraw 14.0畫(huà)出。

2 結(jié)果與討論

2.1 HPLC分析結(jié)果

按照1.2.2方法分析樣品:圖1(a)為小葉金錢(qián)草乙酸乙酯萃取物的HPLC色譜圖,小葉金錢(qián)草乙酸乙酯萃取物所含化學(xué)成分較為復(fù)雜,通過(guò)硅膠層析分離(圖1(b))可知,乙酸乙酯萃取物中的化學(xué)成分進(jìn)一步得到富集。而經(jīng)Sephadex LH-20純化后(圖1(c)),HPLC色譜峰較少,有利于分配系數(shù)摸索及溶劑系統(tǒng)的優(yōu)化選擇。由圖1(c)可知,峰1的保留時(shí)間為19.331 min,峰2的保留時(shí)間為24.427 min,峰3的保留時(shí)間為31.683 min。圖1(d)、圖1(e)和圖1(f)分別為峰1、峰2和峰3的紫外光譜,色譜峰在峰帶I:300～400 nm及峰帶II:220～280 nm有明顯紫外吸收,符合黃酮類(lèi)化合物紫外光譜吸收特征,即峰1、峰2和峰3為黃酮類(lèi)化合物[12]。通過(guò)HPLC對(duì)目標(biāo)組份進(jìn)行分析,三種化合物均實(shí)現(xiàn)了較好的基線分離。

圖1 小葉金錢(qián)草乙酸乙酯部位(a)、硅膠洗脫組份(b)、 Sephadex LH-20純化(c)的高效液 相色譜圖及峰1(d)、峰2(e)、峰3(f)的紫外光譜Fig.1 HPLC chromatogram of the EtOAc-soluble fractions(a),silica gel eluted fraction(b)and Sephadex LH-20 eluted fraction(c)of Hydrocotyle sibthorpioides Lam. and UV spectrum of peak1(d),2(e)and 3(f)

2.2 HSCCC溶劑系統(tǒng)的優(yōu)化

通過(guò)HSCCC分離天然產(chǎn)物,下列條件非常重要:兩相溶劑系統(tǒng)的分配系數(shù)適中,即待分離化合物的分配系數(shù)位于0.2～5.0之間;兩相溶劑分層時(shí)間短(一般小于30 s);固定相有較高的保留率。具備上述條件的溶劑系統(tǒng)方能實(shí)現(xiàn)好的分離效果[10]。

2.2.1 溶劑系統(tǒng)的確定 HPLC分析得知,分離化合物的極性較大,根據(jù)黃酮類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和文獻(xiàn)報(bào)道[8-9],本研究選擇了HSCCC適合分離大極性物質(zhì)的正丁醇體系,經(jīng)HPLC測(cè)定了化合物在不同體系中的分配系數(shù),各溶劑體系及相應(yīng)分配系數(shù)K值見(jiàn)表1。

表1 小葉金錢(qián)草提取物在不同溶劑體系中的分配系數(shù)KTable 1 Partition coefficients(K)of the extract of Hydrocotyle sibthorpioides Lam.in different two phase solvent systems

在初步的試驗(yàn)當(dāng)中,目標(biāo)化合物易溶于乙酸乙酯、正丁醇和水。從表1的數(shù)據(jù)可以看出,不選用乙酸乙酯系統(tǒng)的原因如下:1號(hào)和2號(hào)溶劑系統(tǒng)乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶2∶1、1∶4∶2,V/V/V)分配系數(shù)過(guò)大,所需分離時(shí)間較長(zhǎng);由1.2.3.3可知化合物分離度需大于1.5,而2、3號(hào)化合物分離度小于1.5;雖然減小乙酸乙酯的比例可以改善分離度,但乙酸乙酯系統(tǒng)兩相分層時(shí)間較長(zhǎng),且分離度仍小于正己烷體系。因此1、2、3號(hào)溶劑系統(tǒng)不適合作為高速逆流色譜溶劑系統(tǒng)。當(dāng)用正己烷替換系統(tǒng)中乙酸乙酯后,分配系數(shù)大大減小而分離度大大增加。

在正己烷體系當(dāng)中,物質(zhì)的分離度較大,但分配系數(shù)較小,通過(guò)增加正丁醇的比例,可以有效地增加分配系數(shù),與此同時(shí)分離度雖有所減小,但仍大于2。Chen T等[11]報(bào)道了在溶劑體系當(dāng)中添加酸可以改善物質(zhì)的分離程度,因此在4號(hào)系統(tǒng)中添加冰乙酸來(lái)改善物質(zhì)的分離,進(jìn)一步探索正己烷-正丁醇-水-冰乙酸溶劑比例。

2.2.2 正己烷-正丁醇-水-冰乙酸比例的確定 由表1中(3、4號(hào))可以發(fā)現(xiàn),添加冰乙酸雖然對(duì)目標(biāo)物的分離度幾乎沒(méi)有影響,但卻有效地增加了目標(biāo)化合物的分配系數(shù)。由表2可以看出,當(dāng)增加正丁醇比例時(shí),分配系數(shù)增加,分離度減小。在表2的2號(hào)溶劑比例下,3號(hào)化合物分配系數(shù)達(dá)到3。因分配系數(shù)越大,所需分離時(shí)間越長(zhǎng),色譜峰拖尾嚴(yán)重,所需流動(dòng)相越多,因此繼續(xù)增加正丁醇比例意義不大。綜上所述,通過(guò)調(diào)節(jié)正丁醇的比例,并添加冰乙酸輔助調(diào)節(jié)分配系數(shù),能夠在保證物質(zhì)的最大分離度的前提下,盡可能地縮短分離時(shí)間,節(jié)約溶劑,最終選擇正己烷-正丁醇-水-冰乙酸(1∶1.7∶1∶0.1,V/V/V/V)兩相溶劑系統(tǒng)分離目標(biāo)化合物。

表2 小葉金錢(qián)草提取物在正己烷-正丁醇-水-冰乙酸溶劑體系中的分配系數(shù) KTable 2 Partition coefficients(K)of the extract of Hydrocotyle sibthorpioides Lam. in n-hexane/n-BuOH/water/glacial acetic acidsolvent systems

2.3 HSCCC分離結(jié)果

采用溶劑系統(tǒng)正己烷-正丁醇-水-冰乙酸(1∶1.7∶1∶0.1,V/V/V/V),參照1.2.4中固定相保留率計(jì)算方法,Sf=[(300-112)]/300×100%=62.7%。按照1.2.4 的方法對(duì)1.2.1中得到的Sephadex LH-20純化樣品進(jìn)行高速逆流色譜分離,得到4個(gè)分離組分,見(jiàn)圖2。

圖2 小葉金錢(qián)草乙酸Sephadex LH-20 分離樣品的高速逆流色譜圖Fig.2 HSCCC chromatogram of the Sephadex LH-20 purified sample from EtOAc-soluble fractions of Hydrocotyle sibthorpioides Lam.

收集圖2中的各組分進(jìn)行HPLC分析。峰Ⅱ-Ⅳ樣品HPLC分析結(jié)果見(jiàn)圖3,其中峰Ⅱ圖3(a)、Ⅲ圖3(b)、Ⅳ圖3(c)為目標(biāo)化合物,分別對(duì)應(yīng)圖1(c)中的1、2和3號(hào)化合物。保留時(shí)間和純度分別為:峰Ⅱ-1號(hào),Rt=19.331 min,94.08%;峰Ⅲ-2號(hào),Rt=24.427 min,97.82%;峰Ⅳ-3號(hào),Rt=31.4683 min,92.98%。各色譜圖中小圖對(duì)應(yīng)各色譜峰的紫外吸收光譜,由紫外光譜分析得知,色譜峰紫外吸收在峰帶Ⅰ,300～400 nm及峰帶Ⅱ,220～280 nm有明顯紫外吸收,符合黃酮類(lèi)化合物紫外光譜吸收特征[12],故所分離得到的三種化合物為黃酮類(lèi)化合物。

圖3 峰Ⅱ(a)、Ⅲ(b)、Ⅳ(c)組分的 HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram of effluent fraction Ⅱ(a),Ⅲ(b)and Ⅳ(c)

2.4 結(jié)構(gòu)表征

所分離得到化合物冷凍干燥后稱(chēng)重得峰Ⅱ(1號(hào))化合物9.23 mg,峰Ⅱ(2號(hào))化合物8.98 mg和峰Ⅲ(3號(hào))化合物22.93 mg。經(jīng)1H NMR和13C NMR鑒定為峰II:楊梅素 3,3′-二-α-L-鼠李糖苷(化合物1)、峰Ⅲ:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(化合物2)和峰Ⅳ:芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(化合物3),其結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖4。

圖4 楊梅素 3,3′-二-α-L-鼠李糖苷(化合物1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷

化合物1的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)如下:1H NMR(DMSO-d6,500 MHz,ppm):δ 12.64(1H,s,5-OH),10.91(1H,s,7-OH),9.53(1H,s,5′-OH),9.19(1H,s,4′-OH),7.11(1H,d,J=1.9 Hz,2′-H),7.10(1H,d,J=1.9 Hz,6′-H),6.37(1H,d,J=1.9 Hz,8-H),6.21(1H,d,J=1.9 Hz,6-H),5.23(1H,s,3-rha-1-H),5.21(1H,s,3′-rha-1-H),3.49～3.96(4H,m,3-rha-2,3,4,5),3.13～3.96(4H,m,3′-rha-2,3,4,5),1.17(3H,d,J=6.2 Hz,3′-rha-CH3),0.83(3H,d,J=6.2 Hz,3-rha-CH3);13C-NMR(DMSO-d6,125 MHz,ppm):δ 178.3(C-4),164.9(C-7),161.8(C-5),157.9(C-9),156.9(C-2),146.5(C-3′),145.4(C-5′),111.6(C-2′),139.4(C-4′),134.7(C-3),120.1(C-1′),110.7(C-6′),104.6(C-10),102.3(C-1″),101.1(C-1?),99.2(C-6),94.0(C-8),72.4(C-4″),71.7(C-4?),71.1(C-3″),70.9(C-2″),70.9(C-3?),70.8(C-2″),70.6(C-2?),70.4(C-5″),70.0(C-5?),18.4(C-6?),17.9(C-6″)。根據(jù)已報(bào)道文獻(xiàn)比對(duì)[13],化合物1為楊梅素 3,3′-二-α-L-鼠李糖苷(Myricetin 3,3 ′-di-α-L-rhamnopyranoside)。

化合物2的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)如下:1H NMR(DMSO-d6,500 MHz,ppm):δ 13.00(1H,s,5-OH),9.99(1H,brs,4′-OH),9.44(1H,brs,3′-OH),7.45(1H,dd,J=2.1 Hz,8.4 Hz,6′-H),7.43(1H,d,J=2.1 Hz,2′-H),6.91(1H,d,J=8.25 Hz,5′-H),6.81(1H,d,J=2.0 Hz,8-H),6.76(1H,s,3-H),6.46(1H,d,J=2.0 Hz,6-H),5.27(1H,d,J=7.3 Hz,glc-1),3.08～4.02(4H,m,Glu A-2,3,4,5);13C-NMR(DMSO-d6,125 MHz,ppm):δ 182.4(C-4),170.8(C-6″),164.9(C-2),163.0(C-7),161.6(C-5),157.4(C-9),150.4(C-3′),146.3(C-4′),121.8(C-1′),119.6(C-6′),116.5(C-5′),114.0(C-2′),105.9(C-10),103.6(C-3),99.9(C-1″),99.7(C-6),95.0(C-8),76.2(C-5″),75.7(C-3″),73.3(C-2″),71.8(C-4″);根據(jù)已報(bào)道文獻(xiàn)比對(duì)[14],化合物2為木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Luteolin 7-O-β-D-glucuronide)。

化合物3的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)如下:1H NMR(DMSO-d6,500 MHz,ppm):δ 12.98(1H,s,5-OH),10.47(1H,brs,4′-OH),7.95(2H,d,J=8.5 Hz,2′,6′-H),6.95(2H,d,J=8.5 Hz,3′,5′-H),6.86(1H,s,3-H),6.86(1H,d,J=1.7 Hz,8-H),6.46(1H,d,J=1.7 Hz,6-H),5.25(1H,d,J=7.3 Hz,Glu A-1),3.29～3.99(4H,m,glc-2,3,4,5);13C-NMR(DMSO-d6,125 MHz,ppm):δ 182.4(C-4),171.1(C-6″),164.8(C-2),163.1(C-7),161.9(C-5),161.6(C-4′),157.4(C-9),129.1(C-2′,6′),121.4(C-1′),116.5(C-3′,5′),105.9(C-10),103.3(C-3),99.8(C-6),99.7(C-1″),95.1(C-8),76.3(C-5″),75.6(C-3″),73.3(C-2″),71.9(C-4″);根據(jù)已報(bào)道文獻(xiàn)比對(duì)[15],化合物3為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Apigenin 7-O-β-D-glucuronide)。

3 結(jié)論

本文建立了從小葉金錢(qián)草分離純化極性較大黃酮苷類(lèi)化合物的HSCCC分離方法,應(yīng)用高速逆流色譜法正己烷-正丁醇-水-冰乙酸(1∶1.7∶1∶0.1,v/v/v/v)兩相溶劑系統(tǒng),在轉(zhuǎn)速800 r/min、流速2 mL/min的條件下,從小葉金錢(qián)草中分離制備了三種黃酮苷類(lèi)化合物:楊梅素3,3′-二-α-L-鼠李糖苷,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷,純度均高于90%,為進(jìn)一步研究小葉金錢(qián)草的化學(xué)成分、藥效以及綜合利用奠定了一定的理論基礎(chǔ)。