化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)對(duì)雞血藤飲片煮散質(zhì) 量體系進(jìn)行探索

陶愛波

摘要：分析雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系應(yīng)用化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)探索情況發(fā)現(xiàn)：化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)對(duì)雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系有較好的識(shí)別檢測(cè)功能，同時(shí)雞血藤煮散飲片的浸出率、質(zhì)量均一性均較高。

關(guān)鍵詞：雞血藤飲片;DNA條形碼分子鑒定技術(shù);化學(xué)指紋圖譜法;質(zhì)量體系

雞血藤飲片是臨床上較常用的中藥，其功效主要包括活血、補(bǔ)血、通絡(luò)等，在月經(jīng)不調(diào)、血虛等疾病的治療上有較好的療效[1]。雞血藤主要來源于自然環(huán)境，但近年來的過度采摘，導(dǎo)致資源儲(chǔ)備量下降，進(jìn)而進(jìn)一步影響雞血藤藥材的質(zhì)量，導(dǎo)致其重要的化學(xué)成分含量存在很大差異，從而對(duì)臨床藥物的穩(wěn)定性、應(yīng)用效果均產(chǎn)生直接的影響。雞血藤飲片煮散可有效減少雞血藤藥材的使用量，但對(duì)于該中藥識(shí)別溯源存在很大的困難度，故需一種易于鑒定、檢測(cè)方式[2]。因此為了分析雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系應(yīng)用化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)探索情況，特選取雞血藤飲片200g作為研究對(duì)象行對(duì)比分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取雞血藤飲片200g作為研究對(duì)象，將雞血藤原飲片作為對(duì)照組（100g），將余下雞血藤飲片粉碎后過篩得到雞血藤煮散飲片，將其作為觀察組（100g）。

1.2方法

化學(xué)指紋圖譜法：應(yīng)用高效液相色譜儀系統(tǒng)（美國Waters2695型），選擇Empower色譜工作站、W2998 DAD 檢測(cè)器，建立色譜條件，制備表兒茶素（中國藥品生物制品鑒定所，生產(chǎn)批號(hào)：110878-200102，含量：≥98%）對(duì)照品溶液，將其置于4℃冰箱中，保存?zhèn)溆?，制備雞血藤飲片（康美藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：160301031）供試品溶液;DNA條形碼分子鑒定技術(shù)取對(duì)照組與觀察組飲片樣本，應(yīng)用液氮磨碎，并應(yīng)用植物DNA提取試劑盒提取基因組總DNA，ITS2序列擴(kuò)增應(yīng)用正向引物、反向引物進(jìn)行擴(kuò)增，PCR模板DNA為2.0μL，反應(yīng)體系為25μL，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物應(yīng)用1.2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，并應(yīng)用PCR 儀（美國Applied Biosystems公司，型號(hào)：2720Thermal Cycler）雙向測(cè)序PCR產(chǎn)物。雞血藤飲片，雞血藤煮散飲片與雞血藤原飲片采用標(biāo)準(zhǔn)湯劑煎煮法進(jìn)行提取，分別加水浸泡、煮沸、過濾，再加水煎煮、過濾，減壓旋蒸，蒸干，計(jì)算出膏率。

1.3觀察指標(biāo)

①對(duì)比兩組患者表兒茶素RSD、出膏率、表兒茶素含量、指紋圖譜相似度以及相對(duì)峰面積。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用“”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，樣本率的比較采用χ2檢驗(yàn);以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

觀察組表兒茶素RSD顯著低于對(duì)照組;觀察組出膏率、表兒茶素含量、指紋圖譜相似度以及相對(duì)峰面積顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體見表1。

3 討論

雞血藤飲片煮散通過粉碎雞血藤，使其成為一定的粒度，再應(yīng)用水與之共煎，過濾沉渣，取上述汁，制成煮散，來進(jìn)一步提高雞血藤藥材煎煮效率，節(jié)約雞血藤用量，但雞血藤飲片煮散過程中由于需要粉碎，導(dǎo)致雞血藤藥材形態(tài)遭到破壞，使臨床上無法對(duì)該藥物進(jìn)行鑒別，故提供精準(zhǔn)的雞血藤識(shí)別與檢測(cè)，提高臨床用藥療效穩(wěn)定性尤為重要，為探究雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系應(yīng)用化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)探索情況，特做此研究分析[3]。

本研究表明，觀察組表兒茶素RSD顯著低于對(duì)照組;觀察組出膏率、表兒茶素含量、指紋圖譜相似度以及相對(duì)峰面積顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果顯示表與雞血藤原飲片相比，雞血藤飲片煮散的兒茶素RSD值明顯降低，指紋圖譜相似度顯著升高，說明后者質(zhì)量均一性較高，同時(shí)出膏率顯著升高，表明雞血藤飲片煮散可有效提高該藥材有效成分的煎出率。與雞血藤原飲片比較，雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化工藝，微小化、均勻化處理雞血藤飲片的形狀、規(guī)格，使其呈顆粒型，高效的分裝、調(diào)劑、煎煮，藥液過濾速度適度，使雞血藤飲片質(zhì)量更加穩(wěn)定化，澄清度尚可，有效提高臨床雞血藤用藥的穩(wěn)定。與雞血藤原飲片指紋圖譜相比，雞血藤飲片煮散相對(duì)峰面積有所增高，指紋圖譜相似度更佳，證實(shí)應(yīng)用化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)可保證雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系的質(zhì)量，解決了辨藥之難的問題，提供了飲片煮散的鑒定、檢測(cè)的可靠技術(shù)，便于雞血藤飲片煮散推廣、應(yīng)用。此外，與雞血藤原飲片比較，雞血藤飲片煮散可在保證療效的同時(shí)，還可有效降低雞血藤藥物用量，提高雞血藤資源的合理利用率，并提高甾體、黃酮類等雞血藤藥效物質(zhì)的溶出，保證藥物質(zhì)量的穩(wěn)定性。

綜上所述，對(duì)于雞血藤飲片煮散質(zhì)量體系來說，應(yīng)用化學(xué)指紋圖譜法及DNA條形碼分子鑒定技術(shù)具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，可實(shí)現(xiàn)飲片的質(zhì)量均一化、標(biāo)準(zhǔn)化工藝制備、自動(dòng)化生產(chǎn)，為中醫(yī)臨床療效提供可靠保障。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[J].北京﹕中國醫(yī)藥科技出版社，2015：194.

[2] 舒順利，應(yīng)軍，劉軍民，等. 雞血藤化學(xué)成分研究. 中藥新藥與臨床藥理，2012，23（2）：184-186.

[3] 陳士林，黃志海，丘小惠，等. 中藥精準(zhǔn)煮散飲片[J].世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2016，18（9）：1430-1440.