沙棘油對(duì)鼠H₂₂肝癌影響的研究

劉雪梅 張亞婷 楊旭

摘要：目的：通過(guò)觀察沙棘油對(duì)小鼠腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響以探討沙棘油可能的抗腫瘤作用及其機(jī)制.方法：將12只經(jīng)右腋皮下接種1×106的H22腫瘤細(xì)胞的SPF級(jí)雄性小鼠分成沙棘油治療組和對(duì)照組，每組6只，在相同的環(huán)境中，分別給予治療組經(jīng)過(guò)沙棘油浸泡的鼠糧和飲用水，對(duì)照組給予未經(jīng)處理過(guò)的鼠糧和飲用水，喂養(yǎng)21天以稱瘤重、病理切片血管計(jì)數(shù).結(jié)果：沙棘油治療組小鼠的腫瘤0.646g血管數(shù)為3，而生理鹽水組小鼠的平均瘤重為0.9175g，血管數(shù)為5，（p<0.05）與對(duì)照組對(duì)比經(jīng)過(guò)沙棘油喂養(yǎng)的小鼠的腫瘤的重量、病理切片的血管數(shù)均要低.結(jié)論：沙棘油有一定抗腫瘤作用.

關(guān)鍵詞：沙棘油;H22肝癌細(xì)胞;抑制作用;腫瘤

中圖分類(lèi)號(hào)：R73-36? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? 文章編號(hào)：1673-260X（2019）04-0073-03

沙棘是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富的植物，它起源于我國(guó)的青藏高原地區(qū)，著名的藏族醫(yī)生玉妥·元丹貢布的《四部醫(yī)典》記錄了沙棘有化痰、清肺、祛濕、滋陰壯陽(yáng)的功效，其中數(shù)十處還講述了它在脾胃處發(fā)揮的作用，而且對(duì)燒傷的治療效果也十分明顯.沙棘于20世紀(jì)70年代被正式列入到中國(guó)藥典中，從此成為受中華人民共和國(guó)法律保護(hù)的藥材，也明確了它成為既能入藥又能保健的寶貴資源.沙棘油是從沙棘籽中提取的有機(jī)物，有記載說(shuō)沙棘的種子中含有極少量的油質(zhì)，能夠使人體血液得到相應(yīng)的補(bǔ)充，說(shuō)的就是沙棘油.從自然植物沙棘的果實(shí)中經(jīng)過(guò)細(xì)心挑選、精心提煉得到的沙棘油，其中包括有不飽和脂肪酸、黃酮、各種微量元素、生育酚及5-羥色胺等成分，而且生育酚具有保護(hù)皮膚的功效，而且還有能夠促進(jìn)癌細(xì)胞退化的生物活性物質(zhì)，例如花青素、苦木素、香豆素、5-羥色胺等，這些物質(zhì)使可能導(dǎo)致癌癥發(fā)生發(fā)展的某些客觀條件不能發(fā)揮作用，從而抑制腫瘤的生長(zhǎng).前蘇聯(lián)的研究學(xué)者對(duì)沙棘的各種成分以及它生物醫(yī)學(xué)價(jià)值做了更多的調(diào)查分析，研究表明其活性成份能夠達(dá)到200多種，在人類(lèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的植物物種中極為稀有，由此沙棘被人們稱作是神奇的果實(shí)、隨之開(kāi)展了前瞻性的研究，在醫(yī)藥方面做出了貢獻(xiàn)，前蘇聯(lián)國(guó)家政府對(duì)此給予大力支持，投入了大量的人力、物力，對(duì)此展開(kāi)了許多臨床相關(guān)方面的探討，研究表明沙棘的確具有一定的醫(yī)學(xué)藥用價(jià)值.沙棘油抗腫瘤研究已有成果，如果沙棘油能作為抗腫瘤藥物在臨床廣泛應(yīng)用，沙棘屬于天然植物，副作用小，成本低，會(huì)給廣大患者帶來(lái)福音，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立H22細(xì)胞瘤小鼠模型探討沙棘油的抗腫瘤作用及機(jī)制從而為沙棘開(kāi)發(fā)創(chuàng)造良好的經(jīng)濟(jì)前景提供依據(jù).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 細(xì)胞株：H22腫瘤細(xì)胞采購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù).

1.1.2 動(dòng)物：KM小鼠SPF級(jí).由斯貝福（北京）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供并飼養(yǎng).動(dòng)物使用許可證：SCXK（京）2011-0004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（京）2011-0004

1.1.3 沙棘油 （購(gòu)于沙漠之花 敖漢沙漠之花飲料有限責(zé)任公司位于在赤峰市敖漢旗，在2002年，由聯(lián)合國(guó)授予敖漢旗“全球環(huán)境500佳”的稱號(hào)，是全國(guó)沙棘生態(tài)建設(shè)示范縣，有“中國(guó)沙棘之都”之美稱.該公司是主要致力于沙棘的一系列產(chǎn)品研發(fā)，經(jīng)過(guò)不斷探索，迄今為止擁有了以沙棘汁、沙棘油、沙棘養(yǎng)生茶為主的一套商業(yè)體系.在2005年，沙棘系列的部分產(chǎn)品通過(guò)過(guò)了國(guó)家食品質(zhì)量安全認(rèn)證（QS150406014519），正式進(jìn)入銷(xiāo)售市場(chǎng).而且“沙漠之花”品牌飲品憑借綠色、天然等產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)通過(guò)十三運(yùn)組委會(huì)層層審查與嚴(yán)格篩選，成為內(nèi)蒙古自治區(qū)十三運(yùn)飲料唯一指定品牌.）

1.2 動(dòng)物及分組

1.2.1 12只健康昆明雄性小鼠被隨機(jī)分成兩組，即對(duì)照組和治療組.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 小鼠模型建立：取體重18g左右雄性昆明小鼠12只，將購(gòu)買(mǎi)的腫瘤細(xì)胞3000r離心10分鐘，棄上層培養(yǎng)基，重復(fù)離心提純后用生理鹽水將其稀釋至2ml，每只小鼠腋下注射0.2ml1×106的H22肝腫瘤細(xì)胞.

1.3.2 將小鼠隨機(jī)分成兩大實(shí)驗(yàn)組，即對(duì)照組和治療組，每組6只，在相同的環(huán)境中，分別給予治療組經(jīng)過(guò)沙棘油浸泡的鼠糧和飲用水，對(duì)照組給予未經(jīng)處理過(guò)的鼠糧和飲用水.

1.3.3 實(shí)驗(yàn)第21天，將小鼠處死后，取出腋下的腫瘤組織稱其重量，對(duì)比其外觀大小，電子表格下進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.

1.3.5 交專業(yè)病理科室并做切片檢查，顯微鏡下比較瘤組織中血管數(shù)量的差異.

2 結(jié)果

2.1 瘤體外觀

2.2 腫瘤組織病理切片對(duì)比

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 討論

惡性腫瘤這一類(lèi)疾病已經(jīng)得到人們足夠的關(guān)注.我國(guó)的首部字書(shū)《說(shuō)文解字》解釋“瘤”這字的時(shí)候說(shuō)：瘤，腫也.”與此同時(shí)“腫瘤是血液聚集形成的”這種說(shuō)法在當(dāng)時(shí)也被受推崇.而大量的研究表明，血管生成因子是新生血管的關(guān)鍵因素，而炎細(xì)胞即巨噬細(xì)胞為主的腫瘤細(xì)胞能產(chǎn)生血管生成因子誘導(dǎo)新生血管的產(chǎn)生.因此通過(guò)控制腫瘤血管的形成被看作為腫瘤治療的新方向.而腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為主要表現(xiàn)在無(wú)限性的生長(zhǎng)和向周邊組織浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[4]，腫瘤新生血管的形成是腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的必要前提.所以說(shuō)抗腫瘤的基礎(chǔ)是通過(guò)抑制腫瘤新生血管的形成.本實(shí)驗(yàn)表明在經(jīng)過(guò)沙棘油浸泡過(guò)的鼠糧喂養(yǎng)的小鼠中腫瘤的生長(zhǎng)明顯受到抑制，而在喂食沒(méi)經(jīng)過(guò)處理的鼠糧的小鼠中腫瘤的生長(zhǎng)情況相反，在治療組中對(duì)腫瘤新生血管的抑制效果顯著，所以推斷沙棘油阻礙腫瘤的生長(zhǎng)的原理是通過(guò)抑制腫瘤新生血管的形成發(fā)揮作用的.早在20世紀(jì)70年代Folkman教授就提出腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與血管新生過(guò)程密切相關(guān)[3].戚瑋琳等人在紅景天抑制乳腺癌血管新生的研究中得到結(jié)論表明，紅景天提取物是通過(guò)抑制癌細(xì)胞VEGA（促血管生成因子）表達(dá)，從而抑制血管新生[6].與此同時(shí)張海英等人也在桑黃靈芝UE-1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及血管新生的抑制作用的研究中表明桑黃靈芝UE-1具有明顯的抗腫瘤作用，黃靈芝UE-1的抗腫瘤作用很有可能是通過(guò)抑制腫瘤血管新生達(dá)成的[5].內(nèi)蒙古赤峰市敖漢旗盛產(chǎn)沙棘，已經(jīng)有報(bào)道沙棘油富含槲皮素等黃酮類(lèi)物質(zhì)及維生素C，有抗腫瘤作用.目前臨床上采用的抗腫瘤藥物主要細(xì)胞毒性藥物，這類(lèi)藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)具有選擇性差，不良反應(yīng)大及易產(chǎn)生耐藥的弊端.天然藥物抗腫瘤研究之所以成為新的研究熱點(diǎn)就是因?yàn)樗谝种苹蛳麥绨┘?xì)胞的同時(shí)，與細(xì)胞毒性藥物相比這些不良反應(yīng)會(huì)大大減少.陳世虎等人在抗腫瘤實(shí)驗(yàn)的調(diào)查研究中，分析得出結(jié)論，表明沙棘油靜脈聯(lián)合乳對(duì)CTX抗移植瘤具有增效減毒的作用[1].藥食同源，可以為腫瘤患者減少病痛.本實(shí)驗(yàn)可以為沙棘油的開(kāi)發(fā)與研究提供依據(jù).而韓春卉等人通過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果顯示沙棘油能夠增強(qiáng)小鼠NK細(xì)胞的活性，并且可以大大的提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬作用從而發(fā)揮抗腫瘤的功效[2].本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察瘤重級(jí)病理切片證明沙棘油有一定抑制腫瘤新生血管的形成，即抗腫瘤作用，其詳細(xì)的機(jī)制究竟是通過(guò)影響VEGA從而抑制血管的新生，還是直接作用于癌細(xì)胞，或者是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接發(fā)揮抗腫瘤的作用尚需要進(jìn)一步研究.

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