致癌、抑癌，還是別的什么？ 認(rèn)識(shí)p53基因的40年

李昂

摘? 要? 回顧1979年前后發(fā)現(xiàn)P53蛋白的歷史過程，以及此后對(duì)該基因研究中的一些標(biāo)志性的成果和應(yīng)用。結(jié)合不同時(shí)期的社會(huì)背景和分子生物學(xué)的整體發(fā)展?fàn)顩r，對(duì)P53研究中的工作方法、思維范式及其影響給出了一定解釋。

關(guān)鍵詞? ?p53? 抑癌基因? 分子生物學(xué)史

中圖分類號(hào)? ?N09

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? ?A

位于人類基因組第17染色體短臂的p53基因（也稱tp53），屬于最早被發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制基因（或抑癌基因）之一。它編碼的 P53蛋白（具有393個(gè)氨基酸，此處“P”大寫表示蛋白）能調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和避免細(xì)胞癌變發(fā)生，因此被稱為基因組守護(hù)者。自1979年該基因被發(fā)現(xiàn)以來，人們對(duì)它的理解經(jīng)歷了一次徹底反轉(zhuǎn)，相關(guān)的研究范式也歷經(jīng)若干重要轉(zhuǎn)變。最初曾認(rèn)為p53是個(gè)致癌基因，但它作為抑癌基因的本質(zhì)被揭示出來之后，對(duì)其作用機(jī)理和參與生理過程的研究大量涌現(xiàn)。2009年，已經(jīng)可以從Pubmed①中檢索到將近5萬篇相關(guān)文章，而到2019年達(dá)到近10萬篇，在以單個(gè)基因?yàn)閷?duì)象的研究中，穩(wěn)居發(fā)表物排行榜之首[1]。那么，對(duì)這個(gè)研究最多的基因，我們都知道了些什么，又是怎么知道的呢？本文嘗試對(duì)這個(gè)紛繁的過程做一梳理，借此管窺分子生物學(xué)發(fā)展之一斑。

一? ?前史

細(xì)胞癌變（惡性增生）是人類出現(xiàn)之前就存在于動(dòng)物界的現(xiàn)象[2]。在漫長的歷史進(jìn)程中，由于人類普遍壽命不長，癌癥并非主要的致死疾病。對(duì)它的認(rèn)知雖然可以追溯到古埃及（[3]，p.23），并且在現(xiàn)代之前的多位名醫(yī)著述中都能找到記載，但水平畢竟受時(shí)代的限制①。工業(yè)革命之后，一方面隨著人均壽命延長，癌癥發(fā)病率升高;另一方面歐洲主要國家的醫(yī)療衛(wèi)生體系逐漸完善，醫(yī)院從中世紀(jì)那種依附于教會(huì)、單純看護(hù)病人的場所，發(fā)展成具有教育和研究功能的機(jī)構(gòu)，對(duì)腫瘤、癌癥這類疾病，才終于開始形成基于現(xiàn)代科學(xué)的認(rèn)識(shí)。

18世紀(jì)，法國建立了世界上第一所腫瘤醫(yī)院②，法國政府還為尋求癌癥的病因和療法設(shè)立了獎(jiǎng)金。英國醫(yī)生希爾（John Hill，1716—1775）和波特（Percivall Pott，1714—1788）相繼提出某些環(huán)境中的化學(xué)品可能是引起癌癥的原因[4]。法國醫(yī)生德蘭（Henri Fran?ois Le Dran，1685—1770）則第一個(gè)推測原發(fā)腫瘤通過淋巴擴(kuò)散到身體其它部位后才會(huì)致命[5]。19世紀(jì)，費(fèi)爾肖（Rudolf Virchow，1821—1904）的細(xì)胞病理學(xué)理論③為現(xiàn)代癌癥研究奠定了一個(gè)重要基礎(chǔ)。20世紀(jì)初，一些主要工業(yè)國的人口壽命達(dá)到了50歲，癌癥研究逐漸成為顯學(xué)，專門機(jī)構(gòu)陸續(xù)建立起來。例如，1902年成立的英國癌癥研究基金會(huì)（兩年后更名為帝國癌癥研究基金會(huì)，ICRF）④、1937年美國依據(jù)國家癌癥法案設(shè)立的國家癌癥研究所（NCI）等。大量經(jīng)費(fèi)被用以尋找癌癥病因以及研究診療方法。不過，在相當(dāng)長的一段時(shí)間里，人們的認(rèn)識(shí)并沒有顯著提高——很大程度上只是就不同化學(xué)制劑驗(yàn)證希爾和波特的理論。而治療的方案除了手術(shù)切除，只有實(shí)驗(yàn)性的X光照射⑤。直到勞斯（Peyton Rous，1879—1970）的病毒致癌說引起學(xué)界重視，才開辟了一條更富啟發(fā)性的進(jìn)路，并使癌癥機(jī)理的研究從細(xì)胞向分子層面深入。

事實(shí)上，勞斯早在1911年的論文中就提出：病毒感染有可能導(dǎo)致正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞[6]。不過當(dāng)時(shí)病毒對(duì)很多人來說還只是一種理論上的存在，沒辦法直接進(jìn)行觀察。兩次世界大戰(zhàn)的爆發(fā)無疑對(duì)各領(lǐng)域?qū)W術(shù)研究的走向和進(jìn)程都產(chǎn)生了重要影響，病毒與癌癥的關(guān)系在此期間并不是個(gè)受關(guān)注的領(lǐng)域。二戰(zhàn)后隨著噬箘體①成為分子遺傳學(xué)的一個(gè)重要研究工具，人們對(duì)病毒的興趣逐漸提高。而電子顯微鏡的發(fā)明，則讓這種比細(xì)菌更小的有機(jī)體終于暴露在人類的視野下②。20世紀(jì)50年代，幾種重要的人類病毒（如水痘帶狀皰疹病毒）被分離鑒定;而1952年脊髓灰質(zhì)炎在美國的嚴(yán)重疫情則促使更多人員經(jīng)費(fèi)投入到病毒學(xué)這個(gè)新興的熱門領(lǐng)域。勞斯在半個(gè)世紀(jì)前工作的重要性也終于獲得了確認(rèn)，并于1966年獲得了諾貝爾醫(yī)學(xué)生理學(xué)獎(jiǎng)。他的獲獎(jiǎng)激發(fā)了不少研究者對(duì)病毒與癌癥關(guān)系的興趣。加上1971年尼克松簽署了新的美國國家癌癥法案，據(jù)此擴(kuò)大了NCI的研究范圍和工作職權(quán)，并制定了國家癌癥研究計(jì)劃，一場轟轟烈烈的“抗癌戰(zhàn)爭”就此拉開序幕。

二? ?發(fā)現(xiàn)

20世紀(jì)70年代之前，癌癥研究大多集中于病源學(xué)（例如將吸煙與肺癌聯(lián)系起來的研究）和經(jīng)驗(yàn)性治療方法。然而，勞斯的影響令很多研究小組都忽然對(duì)致癌病毒感興趣起來[7]。一些人推測癌癥可能與基因有關(guān)。不過，要知道這個(gè)時(shí)候基因工程還處于襁褓中，人們能夠?qū)蜻M(jìn)行的操作非常有限，而且過程復(fù)雜費(fèi)時(shí)。如果利用致癌病毒，想要驗(yàn)證這個(gè)猜想還是可能的，畢竟病毒只攜帶有限的幾個(gè)基因。

事實(shí)上，早在20世紀(jì)初，德國發(fā)育生物學(xué)家博韋里（Theodor Boveri，1862—1915）就提出過遺傳物質(zhì)的變化與癌癥相關(guān)的概念[8]。1969年，美國NCI的研究人員第一次在論文中正式使用了“致癌基因”（oncogene）一詞[9]。1970年，加州大學(xué)伯克利分校的馬丁（G. Steve Martin）博士首次在會(huì)議中報(bào)告分離出了勞氏肉瘤病毒（RSV，即上述勞斯發(fā)現(xiàn)的病毒）中的致癌基因，這是第一個(gè)被確認(rèn)的致癌基因，被稱為Src（[3]，p.32）。與此同時(shí)，很多研究小組也都在開展相關(guān)研究。加利福尼亞大學(xué)舊金山分校的畢肖普（Michael Bishop）和瓦慕斯（Harold Varmus）團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)：包括人類在內(nèi)的許多生物體中都有與Src同源的基因，他們認(rèn)為病毒中的癌基因來源于一種細(xì)胞生物的正?；颍ㄔ┗颍?，病毒在其宿主細(xì)胞中復(fù)制時(shí)將其重組進(jìn)了自己的基因組[10]。這個(gè)發(fā)現(xiàn)在1976年發(fā)表后，對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制的認(rèn)識(shí)產(chǎn)生了重要影響，人們很快就找到了多種不同的癌基因，畢肖普和瓦慕斯也因此獲得1989年諾貝爾生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

不過，勞氏肉瘤病毒作為實(shí)驗(yàn)工具有一大不足——它主要侵染禽類，而不是哺乳動(dòng)物[11]。在后來的研究中，更為常用的一種病毒是簡稱SV40的猿猴空泡病毒40（Simian vacuolating virus 40）。這是一種DNA病毒，1960年首次發(fā)現(xiàn)于用來生產(chǎn)脊髓灰質(zhì)炎疫苗的獼猴腎臟細(xì)胞中，因其使受感染細(xì)胞產(chǎn)生異常數(shù)量的液泡而得名。它在獼猴中通常處于不引起癥狀的休眠態(tài)，但是在鼠類中會(huì)引發(fā)多種腫瘤，因此被廣為用于建立實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。

SV40表達(dá)的蛋白中，最初有兩個(gè)被認(rèn)為與將正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞的過程有關(guān)，分別稱為大T和小t抗原。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，觀察到它們與小鼠的未知蛋白結(jié)合[12]。因此，鑒定這些未知蛋白就成了研究腫瘤形成機(jī)制的重要一步。

較早開展相關(guān)研究的有紐約州立大學(xué)石溪分校的特格特邁爾（P. Tegtmeyer）所在的團(tuán)隊(duì)。20世紀(jì)70年代中期，他們使用SV40轉(zhuǎn)化細(xì)胞的提取物來制備抗血清，再用其免疫沉淀SV40感染細(xì)胞的蛋白質(zhì)，然后通過凝膠電泳分離沉淀下來的蛋白質(zhì)（混合物）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中包括有分子量為50 kDa的蛋白質(zhì)，后來認(rèn)為就是P53②，可惜他們當(dāng)時(shí)并沒有關(guān)注于此③。而另外六組研究人員，很快獨(dú)立觀察到了這種蛋白存在的更多證據(jù)，于是在1979年涌現(xiàn)出一系列關(guān)于這種分子的報(bào)道。

首先發(fā)表的是倫敦帝國理工學(xué)院的萊恩（David P. Lane，1952—）和克勞福德（Lionel V. Crawford，1932—）。他們的實(shí)驗(yàn)思路與上述特格特邁爾的很相似，但是因?yàn)榻鉀Q了制備抗血清的技術(shù)問題，大大減少了血清和細(xì)胞提取物之間免疫反應(yīng)中的非特異性沉淀。他們使用純化的大T抗原生產(chǎn)抗T血清，然后與來自SV40轉(zhuǎn)化小鼠的細(xì)胞提取物進(jìn)行免疫沉淀，獲得了兩種蛋白質(zhì)：大T抗原和分子量為53 kDa的蛋白質(zhì)。他們推斷53 kDa蛋白是由細(xì)胞編碼的，因?yàn)镾V40基因組太小，除了已知蛋白之外不太可能有空間再編碼這么大的蛋白。這篇關(guān)于大T結(jié)合宿主蛋白（P53）的報(bào)告發(fā)表在1979年3月的《自然》雜志上[13]。

而此時(shí)，在大西洋的另一邊，普林斯頓大學(xué)的萊文（Arnold Levine，1939—）實(shí)驗(yàn)室和紐約斯隆-凱特琳紀(jì)念醫(yī)院的奧德（Lloyd Old，1933—2011）研究組也在進(jìn)行著類似的工作，他們?cè)赟V40轉(zhuǎn)化的不同動(dòng)物細(xì)胞、人類癌細(xì)胞、以及用化學(xué)或放射性方法轉(zhuǎn)化的癌細(xì)胞中都觀察到了類似的蛋白，分別發(fā)表在兩個(gè)月后的《細(xì)胞》和《美國科學(xué)院院刊》上[14， 15]。

接著，紐約大學(xué)醫(yī)學(xué)院的卡羅爾（R. B. Carroll）團(tuán)隊(duì)和法國國家癌癥研究所的梅（Pierre May）等人，各自獨(dú)立發(fā)現(xiàn)了在不同類型的癌細(xì)胞中，存在與大T抗原結(jié)合的約55kDa/50kDa的蛋白質(zhì)，分別發(fā)表在8月的《病毒學(xué)》和《病毒學(xué)雜志》上[16， 17]。最后，在10月的《細(xì)胞》上，是倫敦帝國理工學(xué)院泊查（Eva Paucha，1949—1988）小組的研究[18]。此外，1980年的《病毒學(xué)雜志》上還有一篇麻省理工的洛特（Varda Rotter）為第一作者的文章，不過絕少被提到[19]。

總的來說，上述發(fā)現(xiàn)得益于前面十幾年病毒學(xué)知識(shí)的積累以及免疫學(xué)方法的成熟。雖然大部分結(jié)果是從SV40轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系做出的，不過在用其它方式誘導(dǎo)產(chǎn)生的癌細(xì)胞和自然發(fā)生的癌細(xì)胞中也都找到了P53蛋白。當(dāng)然，科學(xué)家們沒有立即認(rèn)識(shí)到這些發(fā)現(xiàn)之間的聯(lián)系，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都給各自的蛋白取了不同的名字并在后續(xù)發(fā)表的論文中繼續(xù)使用了一陣，因此在這個(gè)年輕的領(lǐng)域里制造了些混亂。幸而幾年后他們總算認(rèn)識(shí)到每個(gè)團(tuán)隊(duì)都在研究相同的蛋白質(zhì)。1983年，在英國的瑪麗·居里研究所召開了第一次以這個(gè)蛋白為主題的研討會(huì)，期間，不同研究小組的代表討論后決定用“P53”來命名他們各自獨(dú)立發(fā)現(xiàn)的這個(gè)蛋白質(zhì)[1]。此后，P53研討會(huì)大約每兩年召開一次，規(guī)模不斷擴(kuò)大。

事后看來，這個(gè)發(fā)現(xiàn)的思路并不復(fù)雜。不過在分子生物學(xué)技術(shù)尚屬粗放的70年代，實(shí)驗(yàn)中獲得的產(chǎn)物和分析的對(duì)象經(jīng)常是一些混合物。純化抗原以及制備特異性更強(qiáng)的血清，是當(dāng)時(shí)的工作難點(diǎn)。所以在同一年份爆發(fā)式的發(fā)現(xiàn)P53蛋白，首先是問題集中，其次當(dāng)時(shí)研究手段也只有那么幾種。大多數(shù)團(tuán)隊(duì)的工作都是基于SV40介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化，唯一的例外是一項(xiàng)關(guān)于腫瘤誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)的血清學(xué)研究[15]。一定程度上也反映出20世紀(jì)70年代癌癥研究的主流集中在病毒病因?qū)W，同時(shí)對(duì)腫瘤免疫反應(yīng)的研究仍在繼續(xù)。

三? ?反轉(zhuǎn)

雖然科學(xué)家對(duì)P53的發(fā)現(xiàn)感到興奮，但一開始只是把它當(dāng)作一種普通的致癌基因。當(dāng)然，這也是一個(gè)合乎邏輯的推論。因?yàn)椋谇耙粋€(gè)時(shí)期的實(shí)驗(yàn)中，觀察到的現(xiàn)象主要包括：（1）P53與SV40病毒的主要致癌蛋白（T抗原）結(jié)合，暗示它是大T抗原作用途徑的下游效應(yīng)物;（2）P53在許多種類的癌細(xì)胞中高水平表達(dá)。

那么，要進(jìn)一步研究它是如何起作用的，首先就得拿到cDNA①克隆?？寺。╟lone）一詞廣義上是指利用生物技術(shù)由無性生殖產(chǎn)生與原個(gè)體有完全相同基因組之后代的過程。作為名詞的時(shí)候，意思是擁有相同遺傳組成的不同個(gè)體。在分子生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)或生態(tài)學(xué)等不同語境里，一個(gè)克隆可以指：選擇性地復(fù)制出的一段DNA序列（或包含這樣一段DNA的細(xì)菌所形成的菌落）、一個(gè)細(xì)胞或是個(gè)體。如今，分子克隆是個(gè)相對(duì)簡單的技術(shù)，不過在20世紀(jì)80年代初，還是個(gè)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，又充滿挑戰(zhàn)的辛苦活兒②。并且，因?yàn)橐玫街亟MDNA技術(shù)，雖然阿西洛馬會(huì)議③已經(jīng)過去了幾年，人們對(duì)此仍然存在一些倫理爭議。

盡管如此，前輩分子生物學(xué)家們還是滿懷熱忱地投入到了克隆癌基因的工作中。到1982年為止，至少已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了10個(gè)癌基因[20]。那一年，若干個(gè)研究組相繼克隆到了人的ras基因④。同年，俄羅斯科學(xué)院的査莫科夫（Peter Chumakov）第一個(gè)克隆到了來自小鼠的p53基因[21]。不過，由于他的文章是用俄語發(fā)表的，在P53圈子之外很少為人所知。差不多同時(shí)，以色列維斯曼研究所的歐仁（Moshe Oren）也獨(dú)立拿到了他的小鼠p53克隆[22]，這是他在萊文實(shí)驗(yàn)室時(shí)啟動(dòng)的工作，真正完成花了2年半的時(shí)間（[3]，p.60）。

之后，事情開始逐漸變得容易一些。因?yàn)?983年，PCR技術(shù)⑤誕生了;不久，DNA測序也實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化。這些新技術(shù)令20世紀(jì)80年代中期的生物學(xué)圈子非常興奮，P53的研究此時(shí)也進(jìn)入了建構(gòu)時(shí)期，在1984—1985年間，幾個(gè)研究組相繼克隆了人類的p53基因，并得到了基因全長的克隆[1]。人們普遍認(rèn)為它是一個(gè)重要性和作用機(jī)制有待揭示的致癌基因，為其研究開發(fā)了大量動(dòng)物模型和工具[1]。

不過，其實(shí)也有一些實(shí)驗(yàn)結(jié)果不甚符合這個(gè)觀點(diǎn)，比如1984年沃爾夫（David Wolf）和洛特的研究，他們發(fā)現(xiàn)在一個(gè)小鼠白血病細(xì)胞系中，p53基因是被逆轉(zhuǎn)錄病毒插入失活的[23， 24]。后來其他人也在小鼠細(xì)胞中觀察到類似的現(xiàn)象[25]。此外，洛特等人還發(fā)現(xiàn)，在白血病來源的人類細(xì)胞系HL60中，p53的編碼區(qū)幾乎被刪除了，無法產(chǎn)生P53蛋白。對(duì)這個(gè)結(jié)果最簡單的解釋是：p53的丟失催生了癌變，暗含的意思就是——正常p53的功能是防止癌癥所必需的[1]。這些提示P53可能是腫瘤抑制因子的線索，事后看來很明顯，但當(dāng)時(shí)要么被忽視，要么被用另外的方式解釋，很大程度上是因?yàn)?，腫瘤抑制基因在20世紀(jì)80年代中期還只是一種假設(shè)。

腫瘤抑制基因的概念來源于20世紀(jì)60—70年代的一些細(xì)胞雜交實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中觀察到，腫瘤細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)變異或損失，可被其他細(xì)胞的遺傳物質(zhì)修補(bǔ)或替代，并使腫瘤細(xì)胞的致癌特性丟失或延緩。由此推測，腫瘤細(xì)胞內(nèi)丟失了可抑制腫瘤生長的DNA[26， 27]。不過，這種基因的存在，直到20世紀(jì)80年代中期，才通過對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的研究證實(shí)。視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤是嬰幼兒中常見的惡性腫瘤，具有明顯的家族遺傳傾向。關(guān)注腫瘤遺傳因素的研究者，很早就注意到了這個(gè)研究對(duì)象。1971年，卡納德森（AG. Knudson）提出了關(guān)于這一類基因的“兩次打擊”理論，認(rèn)為：只有一個(gè)基因的兩個(gè)等位基因位點(diǎn)均受到變異或損傷時(shí)，基因的正常表達(dá)和功能才完全丟失。相對(duì)于導(dǎo)致癌基因病變的“一次性突變”學(xué)說，需要兩次打擊，才能使抑癌基因失活。因此，抑癌基因?qū)儆陔[性基因[28]。1983年，研究者發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者中的13號(hào)染色體發(fā)生了缺失，這就意味著抑制腫瘤發(fā)生的基因被刪除，從而確定了視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤易感基因（retinoblastoma susceptibility gene， RB1）作為一個(gè)腫瘤抑制基因，同時(shí)也證實(shí)了上述推測的重要性。1986年，RB1基因克隆成功。在隨后的幾年中，研究人員又發(fā)現(xiàn)了一些腫瘤抑制基因，例如人們比較熟悉的、與乳腺癌相關(guān)的BRCA1基因等。

此時(shí)，圍繞p53的工作也集中在克隆測序階段，各地的實(shí)驗(yàn)室獲得了很多不同來源的p53克隆，并用于驗(yàn)證其在細(xì)胞中的功能。最先意識(shí)到問題的是萊文實(shí)驗(yàn)室——他們的一個(gè)p53克隆完全無法像其他克隆那樣將正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞。他們最后對(duì)這個(gè)克隆以及之前使用過的，包括從其他實(shí)驗(yàn)室獲得的p53克隆進(jìn)行了測序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)沒有兩個(gè)克隆在序列上是相同的，這說明先前實(shí)驗(yàn)中的克隆至少有一些（如果不是全部的話）實(shí)際上在p53編碼區(qū)攜帶了突變。當(dāng)來源于正常組織的小鼠野生型p53的序列被測定之后（1988），這一點(diǎn)得到了確鑿的證明。這樣一來事情就比較明朗了——癌細(xì)胞中的p53經(jīng)常是突變的（包括許多實(shí)驗(yàn)室使用的cDNA克隆），并且只有攜帶突變的p53 cDNA能夠在實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮轉(zhuǎn)化作用，野生型的p53不行[1]。

在約翰霍普金斯，另一個(gè)研究腫瘤分子生物學(xué)的重鎮(zhèn)，佛格施坦因（Bert Vogelstein）實(shí)驗(yàn)室證明：在人類結(jié)直腸腫瘤中，野生型p53等位基因常常因突變，缺失或兩者兼有而失去功能。也就是說癌細(xì)胞不能保有正常的p53。這是一個(gè)里程碑式的發(fā)現(xiàn)[29]。同時(shí)，萊文和歐仁實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立開展的功能分析表明：在表達(dá)癌基因c-myc和H-Ras的培養(yǎng)細(xì)胞中，野生型p53的過表達(dá)能夠有效地抑制轉(zhuǎn)化（與腫瘤來源的P53突變體的轉(zhuǎn)化活動(dòng)形成鮮明對(duì)比），即作為腫瘤抑制基因在起作用[30]。這兩項(xiàng)研究均發(fā)表于1989年，標(biāo)志了P53研究的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。

早先病毒學(xué)家的理論給癌癥研究帶來了一種主流思路，即：細(xì)胞癌變是一種獲得性的性狀（而非基因功能缺失造成的）。抑癌基因的發(fā)現(xiàn)則帶來了一種研究范式的轉(zhuǎn)換，破除了p53是致癌基因的思維壁壘。當(dāng)然，必須指出的是，20世紀(jì)80年代初期克隆基因的效率很低。因此在當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，從P53蛋白豐度高的細(xì)胞中提取相應(yīng)的mRNA，是很自然的想法?？上攵畛醭晒Λ@得cDNA克隆的幾組人馬，使用的都是來自被轉(zhuǎn)化的細(xì)胞（癌細(xì)胞）而不是正常組織細(xì)胞中RNA。

四? ?大熱門

在把p53當(dāng)做癌基因研究了10年之后，發(fā)現(xiàn)它其實(shí)是個(gè)腫瘤抑制基因，并且，是在人類癌癥中最常發(fā)生突變的一個(gè)[31]。那么進(jìn)一步鑒定P53在癌癥、發(fā)育和其它生理過程中的作用，對(duì)于攻克癌癥的意義是顯而易見的。因此，在20世紀(jì)90年代，P53吸引了大量研究，甚至可以說誕生了一個(gè)新的研究領(lǐng)域。

回到以色列維斯曼研究所任職的洛特，在其對(duì)歷次P53研討會(huì)的回顧中，曾經(jīng)做了一個(gè)生動(dòng)的比喻：1988年的 P53就像一只丑小鴨，大家對(duì)它是什么都還很困惑。而到了1991年的會(huì)上，它已經(jīng)變成了眾人眼中的白天鵝①。那個(gè)時(shí)候，人們已經(jīng)明確了有一種野生型P53蛋白和許多突變型P53蛋白。之前的十幾年，研究的都是p53突變基因。那么正常的p53在細(xì)胞中本來是起什么作用的呢？

其實(shí)早在1983年，就發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的P53水平與快速細(xì)胞生長本身有關(guān)，推測它是一種與細(xì)胞周期有關(guān)的蛋白[32]。事實(shí)上，許多癌基因和抑癌基因都涉及到細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)過程，比如上文提到的（視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤）RB蛋白。而接下來的一些研究則證明，P53是一種轉(zhuǎn)錄因子。

轉(zhuǎn)錄因子是指能夠結(jié)合在某個(gè)基因上游特異核苷酸序列上的蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)能調(diào)控該基因的轉(zhuǎn)錄。它們通常至少具有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域與效應(yīng)結(jié)構(gòu)域這兩個(gè)功能區(qū)①。1989年，紐約州立大學(xué)石溪分校的菲爾茲（Stanley Fields）和博士生宋玉圭（Ok-Kyu Song）開發(fā)了一種稱為酵母雙雜交的實(shí)驗(yàn)體系，用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)分子存在相互作用②。隨即，多個(gè)實(shí)驗(yàn)室利用此方法于1990年獨(dú)立證明了P53蛋白能夠發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的功能[33， 34， 35]。

接著，通過總結(jié)1991—1992年間的一系列報(bào)道（以及之前的部分工作），確定P53在修復(fù)DNA損傷中的重要作用[36]。不過，更重要的一項(xiàng)工作是發(fā)現(xiàn)了P53與MDM2蛋白之間的負(fù)反饋調(diào)控回路。MDM2是一種泛素連接酶，最初在小鼠中發(fā)現(xiàn)它與P53蛋白形成復(fù)合物，并且可以抑制P53作為轉(zhuǎn)錄因子的活性[37]。后來知道當(dāng)P53蛋白濃度高時(shí)，就會(huì)啟動(dòng)MDM2基因表達(dá)，MDM2與P53結(jié)合后，將其與泛素連接。連接了泛素的P53遂進(jìn)入蛋白降解過程，由此形成負(fù)反饋調(diào)節(jié)，使正常細(xì)胞中的P53蛋白一直維持在一個(gè)較低的基礎(chǔ)水平。此后，又發(fā)現(xiàn)許多其他分子參與P53蛋白的反饋調(diào)控環(huán)路，說明其擁有一個(gè)網(wǎng)絡(luò)化的調(diào)控系統(tǒng)[38]。

MDM2-P53負(fù)反饋環(huán)路，是細(xì)胞中調(diào)節(jié)P53濃度的重要機(jī)制，在1992年提出后，就被眾多系統(tǒng)生物學(xué)家和計(jì)算機(jī)生物學(xué)家所關(guān)注。并成為研究信號(hào)通路內(nèi)調(diào)控途徑的經(jīng)典模型。在實(shí)用研究領(lǐng)域，該環(huán)路也是眾多大有希望的抗癌藥物的作用靶點(diǎn)[38]。

此外，1992年的另一項(xiàng)里程碑是獲得了p53基因敲除的小鼠模型[39]。構(gòu)建基因敲除（或突變）的生物模型，是研究某個(gè)基因功能的重要實(shí)驗(yàn)方法。其基本思路是：用生物技術(shù)手段在某個(gè)模式生物中使感興趣的基因失活，觀察其生理和表型的變化，由此推測該基因的功能;后續(xù)還可以在這個(gè)模型中重新導(dǎo)入該基因或其產(chǎn)物，驗(yàn)證前面的推測。這代表了分子生物學(xué)研究的一種范式，很多科學(xué)家致力于此類工作。在90年代，這是一項(xiàng)很有難度的工作，如果某個(gè)實(shí)驗(yàn)室建立了一個(gè)重要的突變體模型，往往意味著確立了在該領(lǐng)域的領(lǐng)先地位。

基于上述進(jìn)展，及其日益高漲的熱度，1993年，《科學(xué)》雜志將P53評(píng)為年度分子[40]。1994年，歐美的一些學(xué)者聯(lián)合構(gòu)建了一個(gè)數(shù)據(jù)庫。通過文獻(xiàn)檢索，匯集了p53基因中的2，500多個(gè)突變。存放在EMBL數(shù)據(jù)庫中，并以電子形式免費(fèi)提供[41]。后來，其它一些組織也建立了自己的P53數(shù)據(jù)庫①。

不同的突變體，表現(xiàn)不同的生理特征。通過對(duì)它們的研究，可以對(duì)單個(gè)基因做精細(xì)的解讀。在此，也許不應(yīng)該拿太多的知識(shí)細(xì)節(jié)來轟炸讀者，不過值得一提的是，在這些前期工作中，也有中國的貢獻(xiàn)，即發(fā)現(xiàn)在黃曲霉素所引發(fā)的肝癌中，存在特異位點(diǎn)的P53突變[42]。此項(xiàng)工作的思路由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院的孫宗棠醫(yī)生提出，樣品采集自江蘇啟東地區(qū)。但受實(shí)驗(yàn)條件所限，當(dāng)時(shí)只能與美國學(xué)者合作進(jìn)行②。

2009年，《自然-綜述》組織了一個(gè)關(guān)于P53的特刊，描述當(dāng)時(shí)對(duì)這一領(lǐng)域的理解。簡單說，P53在許多信號(hào)傳導(dǎo)途徑中起著節(jié)點(diǎn)的作用，從而調(diào)節(jié)從生殖、發(fā)育到維持基因組穩(wěn)定性（DNA修復(fù)）和細(xì)胞老化、凋亡的各種重要生物活性。一些證據(jù)表明P53的單體或二聚體可以與同一家族的另外兩種蛋白P63或P73形成雜四聚體，這三種轉(zhuǎn)錄因子產(chǎn)生的組合可能具有更加復(fù)雜的調(diào)控功能[1]。由于其在協(xié)調(diào)細(xì)胞周期對(duì)DNA損傷和其它應(yīng)激信號(hào)的反應(yīng)中至關(guān)重要，P53蛋白在避免癌癥發(fā)生的機(jī)制中扮演了細(xì)胞守護(hù)者的角色。在超過半數(shù)的人類癌癥中，都會(huì)發(fā)現(xiàn)p53基因的突變[43]。這也是它受到特別關(guān)注的原因。

此后的10年里，關(guān)于P53不斷有新的調(diào)控因子、信號(hào)通路、代謝途徑被發(fā)現(xiàn)、解釋，并從中提出新的抗癌策略。文獻(xiàn)數(shù)量增加了數(shù)萬篇，并且隨著新的基因編輯技術(shù)成熟完善，構(gòu)建動(dòng)物模型變得更加方便、精確，可以料想研究文獻(xiàn)的產(chǎn)生速度還將進(jìn)一步提升。在維基百科這樣的大眾知識(shí)來源中，已經(jīng)給出了P53與上百種其他生物分子相互作用的鏈接。但是，對(duì)普通人來說，最關(guān)心的大概還是：知道了這些，到底對(duì)攻克癌癥有什么用呢？

五? ?基于P53的癌癥治療

鑒于P53在癌癥中的核心角色，圍繞其開發(fā)抗癌藥物和治療方法，在工業(yè)界和學(xué)術(shù)界都是一個(gè)重要的努力方向。早在1996年的P53研討會(huì)上，就已經(jīng)開始討論基于P53的療法。那一年，德克薩斯大學(xué)安德森癌癥中心的杰克羅斯（J. A. Roth）等人率先嘗試了在人體內(nèi)進(jìn)行p53基因治療。他們通過直接注射表達(dá)人p53的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，治療非小細(xì)胞肺癌[44]。其思路簡單說就是用病毒載體將正常的p53基因?qū)氚┌Y患者體內(nèi)，希望它能補(bǔ)償突變的p53所導(dǎo)致的功能缺失。后來的研究表明，使用腺病毒載體，更適合控制成本進(jìn)行大規(guī)模規(guī)范化生產(chǎn)。德克薩斯州的Introgen Therapeutics公司就是采用了這個(gè)方法。其產(chǎn)品名為Advexin，在美國進(jìn)行了不少臨床試驗(yàn)，對(duì)多種癌癥都報(bào)道了頗有希望的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。然而，在2008年最后的審批環(huán)節(jié)該公司卻撤回了申請(qǐng)，產(chǎn)品未能上市①，公司隨后破產(chǎn)。

實(shí)際上，世界各地有好多機(jī)構(gòu)都曾經(jīng)開展過這方面的研究。幸運(yùn)的是，同類藥物在中國受到了官方支持。1998年3月，在深圳成立了賽百諾基因技術(shù)有限公司，研發(fā)“重組人P53 腺病毒注射液”。同年12 月，這個(gè)藥物獲得國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)進(jìn)入Ⅰ期臨床試驗(yàn)。接著的幾期臨床試驗(yàn)?zāi)酥辽a(chǎn)都得到了來自科技部的項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)支持②。2003年，產(chǎn)品名為“今又生”（Gendicine）的重組Ad-p53腺病毒注射液獲得藥監(jiān)局頒發(fā)的新藥證書，2004年1月和3月，又陸續(xù)獲得準(zhǔn)字號(hào)生產(chǎn)批文和藥品GMP認(rèn)證，成為世界上第一個(gè)獲得官方批準(zhǔn)上市的基因治療新藥，作為治療頭頸癌的基因治療產(chǎn)品進(jìn)入商業(yè)市場[45]。使用這個(gè)產(chǎn)品的病例不時(shí)在科學(xué)期刊上有報(bào)道[46]，讓西方人頗感扭曲和受到挑戰(zhàn)的是，2009年Introgen Therapeutics進(jìn)入破產(chǎn)程序之際，賽百諾公司卻得到美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)，開始了在美國的臨床試驗(yàn)[47]。

與基因治療相比，更常規(guī)的新藥研發(fā)進(jìn)路是尋找一些以P53系統(tǒng)為標(biāo)靶的小分子藥物。比如抑制P53-Mdm2蛋白相互作用的Nutlins，以及可以使腫瘤細(xì)胞內(nèi)突變的P53蛋白改變構(gòu)象以恢復(fù)其正常功能的PRIMA1[47]。這些是比較成熟，已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)的。然而大部分基于P53的新型抗癌療法，都還在實(shí)驗(yàn)初期。部分問題是P53參與了如此多的細(xì)胞過程，提高其效果可能會(huì)導(dǎo)致不必要的副作用?？偟膩碚f，治療的思路很多，據(jù)2015年的統(tǒng)計(jì)，至少有114家公司正在積極開發(fā)針對(duì)P53信號(hào)通路的藥物③。除了治療上的應(yīng)用，P53基因的表達(dá)狀態(tài)也是癌癥前期診斷的重要指標(biāo)之一。

相對(duì)于早期腫瘤分子生物學(xué)家的謹(jǐn)慎[48]，隨著對(duì)P53調(diào)控途徑的了解愈加充分，現(xiàn)在越來越多的人開始對(duì)其應(yīng)用前景表示樂觀，并對(duì)一些新的研究方向做出了展望[49]。但爭論仍在繼續(xù)，認(rèn)知也在對(duì)觀念的不斷重新審視中獲得推進(jìn)。

六? ?結(jié)語

過去40年對(duì)P53研究的歷史，以豐富的例證說明了發(fā)現(xiàn)新知識(shí)的過程是如何充滿意外，以及研究范式和新的方法論突破如何使我們以完全不同的方式感知相同的事實(shí)①。同時(shí)還可以看到對(duì)一個(gè)分子的深入研究如何引領(lǐng)了一個(gè)相當(dāng)大的學(xué)科領(lǐng)域的發(fā)展。

可以說，p53是人們目前了解最多的一個(gè)基因，也恰恰因此，它為人們打開了更多的未知。2009年在紀(jì)念P53發(fā)現(xiàn)30周年的文章中，稱一個(gè)理性時(shí)代才剛剛開始，在其研究真正成熟之前，還將有很多個(gè)第一次[50]。2019年5月②，在紀(jì)念P53發(fā)現(xiàn)40周年的會(huì)議上，吳家睿教授又引用莎士比亞的名言“凡是過往、皆為序章”（What’s past is prologue），來表達(dá)對(duì)未來發(fā)展的期待。誠如會(huì)議中有學(xué)者所說：對(duì)P53的認(rèn)識(shí)，有如盲人摸象，看到了多樣的局部，但還沒有揭開真實(shí)完整的全貌。

如前所述，從文獻(xiàn)數(shù)量來看，關(guān)于P53的新發(fā)現(xiàn)并未隨著時(shí)間的增長而下降，并且很多都發(fā)表在普通生物學(xué)者所仰視的CNS級(jí)③刊物上。參與過P53研究的團(tuán)隊(duì)也越來越龐大。當(dāng)我們置身其中的時(shí)候，每一步進(jìn)展都曾經(jīng)帶來巨大的喜悅和希望。但不久之后回顧，很多當(dāng)時(shí)令人激動(dòng)萬分的發(fā)現(xiàn)，就只是大屏幕上的一個(gè)小小的像素。這種以還原論為指導(dǎo)的生命科學(xué)研究現(xiàn)狀，大概還要維持一段時(shí)間。以生命現(xiàn)象之復(fù)雜多樣，能否達(dá)到像物質(zhì)科學(xué)中那樣精準(zhǔn)的規(guī)律性認(rèn)識(shí)，仍屬未知。

伊芙琳·凱勒（F. Keller）在《基因的世紀(jì)》（The Century of the Gene）中，對(duì)主導(dǎo)20世紀(jì)遺傳學(xué)研究的還原論思想提出挑戰(zhàn)，試圖推動(dòng)生物學(xué)家創(chuàng)造一套比“基因”概念更能處理生物組織之復(fù)雜性的術(shù)語[51]。雖然，她的建議當(dāng)時(shí)（以及現(xiàn)在都）沒有可操作性，但是，結(jié)合P53的認(rèn)識(shí)歷程，也許對(duì)現(xiàn)代分子生物學(xué)的基本方法進(jìn)行反思也是有必要的。

在人類認(rèn)識(shí)p53的40年中，出現(xiàn)了很多現(xiàn)象級(jí)的人物和教科書式的案例，筆者受能力所限，做此粗疏的整理，聊作紀(jì)念之外，也期待更多學(xué)人關(guān)注。

參考文獻(xiàn)

[1] Levine， J.， Oren， M.. The first 30 years of P53： growing ever more complex[J]. Nature Reviews Cancer， 2009， 9（10）： 749—758.

[2] Rothschild， M.， Tanke， H.， Helbling， M.， Martin， D.. Epidemiologic study of tumors in dinosaurs[J]. Naturwissenschaften， 2003， 90： 495—500.

[3] Armstrong， S.. P53， the gene that cracked the cancer code[M]. London and New York： Bloomsbury Sigma， 2014.

[4] Hajdu， I.. A note from history： Landmarks in history of cancer， part 2[J]. Cancer， 2011， 117（12）： 2811—2820.

[5] Faguet， B.. A brief history of cancer： Age-old milestones underlying our current knowledge database[J]. International Journal of Cancer， 2015， 136： 2022—2036.

[6] Rous， P.. A sarcoma of the fowl transmissible by an agent separable from the tumor cells[J]. The Journal of Experimental Medicine， 1911， 13： 397—411.

[7] What Price the Crusade for Cancer Research？[J]. Nature New Biology， 1971， 230（16）： 225—226.

[8] Calkins， N.. Book Review： Zur Frage der Entstehung maligner Tumoren[J]. Science， 1914， 40（1041）： 857—859.

[9] Huebner， R.， Todaro， G.. Oncogenes of RNA tumor viruses as determinants of cancer[J]. Proc. Nat. Acad. Sci， 1969， 64： 1087—1094.

[10] Stehelin， D.， Varmus， E.， Bishop， M.， Vogt， K.. DNA related to the transforming gene（s） of avian sarcoma viruses is present in normal avian DNA[J]. Nature， 1976， 260： 170—173.

[11] Tsuchida， N.， Murugan， K.， Grieco， M.. Kirsten Ras* oncogene： Significance of its discovery in human cancer research[J].? Oncotarget， 2016， 7（29）： 46717—46733.

[12] Tegtmeyer， P.， Schwartz， M.， Collins， K.， Rundell， K.. Regulation of Tumor Antigen Synthesis by Simian Virus 40 Gene A[J]. Journal of Virology， 1975， （6）： 168—178.

[13] Lane， P.， Crawford， V.. T antigen is bound to a host protein in SV40-transformed cells[J]. Nature， 1979， 278（5701）： 261—263.

[14] Linzer， I.， Levine， J.. Characterization of a 54K dalton cellular SV40 tumor antigen present in SV40-transformed cells and uninfected embryonal carcinoma cells[J]. Cell， 1979， 17： 43—52.

[15] DeLeo， B.， Jay， G.， Appella， E.， Dubois， C.， Law， W.， Old， J.. Detection of a transformation-related antigen in chemically induced sarcomas and other transformed cells of the mouse[J]. PNAS， 1979， 76（5）： 2420—2424.

[16] Melero， A.， Stitt， T.， Mangel， F.， Carroll， B.. Identification of new polypeptide species （48-55K） immunoprecipitable by antiserum to purified large T antigen and present in SV40-infected and -transformed cells[J]. Virology， 1979， 93： 466—480.

[17] Kress， M.， May， E.， Cassingena， R.， May， P.. Simian virus 40-transformed cells express new species of proteins precipitable by anti-simian virus 40 tumor serum[J]. Journal of Virology， 1979， 31： 472—483.

[18] Smith， E.， Smith， R.， Paucha， E.. Characterization of different tumor antigens present in cells transformed by simian virus 40[J]. Cell， 1979， 18： 335—346.

[19] Rotter， V.， Witte， N.， Coffman， R.， Baltimore， D.. Abelson murine leukemia virus-induced tumors elicit antibodies against a host cell protein， P50[J].? Journal of Virology， 1980， 36： 547—555.

[20] Reddy， P.， Reynolds， K.， Santos， E.， Barbacid， M.. A point mutation is responsible for the acquisition of transforming properties by the T24 human bladder carcinoma oncogene[J]. Nature，1982， 300（5888）： 149—152.

[21] Chumakov， M.， Iotsova， S.， Georgiev， P.. Isolation of a plasmid clone containing the mRNA sequence for mouse nonviral T-antigen[J]. Doklady Akademii Nauk SSSR （in Russian）， 1982， 267（5）： 1272—1275.

[22] Oren， M.， Levine， J..? Molecular cloning of a cDNA specific for the murine p53 cellular tumor antigen[J]. PNAS， 1983， 80（1）： 56—59.

[23] Wolf， D.， Rotter， V.. Inactivation of P53 gene expression by an insertion of Moloney murine leukemia virus-like DNA sequences[J]. Mol Cell Biol， 1984， 4： 1402—1410.

[24] Wolf， D.， Rotter， V.. Major deletions in the gene encoding the P53 tumor antigen cause lack of P53 expression in HL-60 cells[J]. PNAS， 1985， 82： 790—794.

[25] David， Y.， Prideaux， R.， Chow， V.， Benchimol， S.， Bernstein， A.. Inactivation of the P53 oncogene by internal deletion or retroviral integration in erythroleukemic cell lines induced by Friend leukemia virus[J]. Oncogene， 1988， 3： 179—185.

[26] Harris， H.， Miller， J.， Klein， G.， Worst， P.， Tachibana， T.. Suppression of malignancy by cell fusion[J]. Nature， 1969， 223： 363—368.

[27] Stanbridge， J.. Suppression of malignancy in human cells[J]. Nature， 1976， 260： 17—20.

[28] Knudson， G.. Mutation and Cancer： Statistical Study of Retinoblastoma[J]. PNAS， 1971， 68（4）： 820—823.

[29] Baker， J.. et al. Chromosome 17 deletions and P53 gene mutations in colorectal carcinomas[J]. Science， 1989， 244： 217—221.

[30] Finlay， A.， Hinds， W.， Levine， J.. The P53 proto-oncogene can act as a suppressor of transformation[J]. Cell， 1989， 57： 1083—1093.

[31] Vogelstein， B.， Sur， S.， Prives， C.. P53： The Most Frequently Altered Gene in Human Cancers[J]. Nature Education， 2010， 3（9）： 6.

[32] Winchester， G.. Tumor vorology： P53 protein and control of growth[J]. Nature， 1983， 303： 660—661.

[33] Raycroft， L.， Wu HY， Lozano， G.. Transcriptional Activation by Wild-Type But Not Transforming Mutants of the P53 Anti-Oncogene[J]. Science， 1990， 249（4972）： 1049—1051.

[34] Fields， S.， Jang SK. Presence of a potent transcription activating sequence in the P53 protein[J]. Science， 1990， 249（4972）： 1046—1049.

[35] O’Rourke， W.， Miller， W.， Kato， J.， Simon， J.， Chen DL， Dang CV， Koeffler， P.. A potential transcriptional activation element in the P53 protein[J]. Oncogene， 1990， 5（12）： 1829—1832.

[36] Kastan， B.， Kuerbitz， J.. Control of G1 arrest after DNA damage[J]. Environmental Health Perspectives， 1993， 101（Suppl 5）： 55—58.

[37] Momand， J.， Zambetti， P.， Olson， C.， George， D.， Levine， J.. The mdm-2 oncogene product forms a complex with the P53 protein and inhibits P53-mediated transactivation[J]. Cell， 1992， 69（7）： 1237—1245.

[38] Brady， A.，? Attardi， D.. P53 at a glance[J]. Journal of Cell Science， 2010， 123（15）： 2527—2532.

[39] Donehower， A.. et al. Mice deficient for P53 are developmentally normal but susceptible to spontaneous tumours[J]. Nature， 1992， 356： 215—221.

[40] Koshland， E.. Molecule of the year[J]. Science， 1993， 262（5142）： 1953.

[41] Hollstein， M.， Rice， K.， Greenblatt， S.， Soussi， T.， Fuchs， R.， S?rlie， T.， Hovig， E.， Smith-S?rensen， B.， Montesano， R.， Harris， C.. Database of P53 gene somatic mutations in human tumors and cell lines[J]. Nucleic Acids Res， 1994， 22（17）： 3551—3555.

[42] Hsu， C.， Metcalf， A.， Sun， T.， Welsh， A.， Wang NJ， Harris， C.. Mutational hotspot in the P53 gene in human hepatocellular carcinomas[J]. Nature， 1991， 350： 427—428.

[43] Toledo， F.， Wahl， M.. Regulating the P53 pathway： in vitro hypotheses， in vivo veritas[J]. Nature Reviews Cancer， 2006， （6）： 909—923.

[44] Roth， A.， Nguyen， D.， Lawrence， D.， Kemp， L.， Carrasco， H.， Ferson， Z.， Hong WK， Komaki， R.， Lee JJ， Nesbitt， C.. et al. Retrovirus-mediated wild-type P53 gene transfer to tumors of patients with lung cancer[J]. Nature Medicien， 1996， 2： 985—991.

[45] Pearson， S.， Jia H， Kandachi， K.. China approves first gene therapy[J]. Nature Biotechnology， 2004， 22： 3—4.

[46] Zhang WW. et al. The First Approved Gene Therapy Product for Cancer Ad-p53 （Gendicine）： 12 Years in the Clinic[J]. Human Gene Therapy， 2018， 29（2）： 160—179.

[47] Lane， P.， Cheok， F.， Lain， S.. P53-based Cancer Therapy[J]. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology， 2010， 2： 1—24.

[48] Angier， N.. Natural Obsessions[M]. Boston： Houghton Mifflin， 1988.12.

[49] Levine， J.， Hu W， Feng Z. The P53 pathway： what questions remain to be explored？[J]. Cell Death and Differentiation， 2006， 13： 1027—1036.

[50] Soussi， T.. The history of P53[J]. EMBO reports， 2010， 11（11）： 822—826.

[51] Keller， F.. The Century of the Gene [M]. Harvard University Press， 2002.

Oncogene， Tumor Suppressor， or Something Else？

40 years of? p53 studies

LI Ang

Abstract： This paper mainly reviews the historical process of the discovery of P53 protein in 1979 and some landmark achievements in the study of this gene along with applications derived from them. Social and knowledge backgrounds are provided for better understanding of the study of P53 in the context of the development of molecular biology. While how experiment methods and working paradigms effect P53 studies have been explained to some extent.

Keywords： p53， tumor suppressor， history of molecular biology