理沖生髓飲對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞周期和凋亡影響

付楊 楊莉莉 韓鳳娟

摘要 目的：探討理沖生髓飲對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞周期和凋亡影響。方法：以卵巢癌SKOV3細(xì)胞為研究對(duì)象，采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞抑制作用，Annexin V-FITC法檢測(cè)SKOV3細(xì)胞凋亡情況，細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑測(cè)定SKOV3細(xì)胞周期變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SKOV3細(xì)胞中CD44+CD117+細(xì)胞比例。結(jié)果：與空白組比較，24 h和48 h順鉑組SKOV3細(xì)胞凋亡率明顯增加，G0/G1期細(xì)胞比例降低，S期細(xì)胞比例升高，CD44+CD117+細(xì)胞比例明顯增加，與順鉑組比較，24 h和48 h理沖生髓飲聯(lián)合順鉑組SKOV3細(xì)胞凋亡率明顯增加，G1期細(xì)胞比例降低，S期細(xì)胞比例升高，CD44+CD117+細(xì)胞比例明顯降低，其中理沖生髓飲中劑量組聯(lián)合順鉑組作用效果最強(qiáng)。結(jié)論：理沖生髓飲具有抗腫瘤作用，其機(jī)制可能是增加順鉑對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡，調(diào)控細(xì)胞周期阻滯，降低卵巢癌SKOV3細(xì)胞中干細(xì)胞數(shù)量。

關(guān)鍵詞 理沖生髓飲;卵巢癌SKOV3細(xì)胞;卵巢癌干細(xì)胞;細(xì)胞周期;細(xì)胞凋亡

Abstract Objective：To explore the effects of Lichong Shengsui decoction on cycle and apoptosis of ovarian cancer SKOV3 cells.Methods：Taking ovarian cancer SKOV3 cells as the research objects，the inhibitory effect of different concentrations of cisplatin on SKOV3 cells was detected by CCK-8 method.The apoptosis of SKOV3 cells was detected by Annexin V-FITC method.The cycle changes of SKOV3 cells was detected with the cell cycle and apoptosis detection reagents，and the ratio of CD44+CD117+ cells in SKOV3 cells was detected by flow cytometry.Results：Compared with the blank group，the apoptosis rate of SKOV3 cells in the cisplatin group was significantly increased in the 24 h and 48 h.The proportion of cells in G0/G1 phase was decreased，the proportion of cells in S phase cells was increased，and the proportion of CD44+ CD117+ cells was significantly increased.Compared with the cisplatin group，the apoptosis rate of SKOV3 cells in Lichong Shengsui Decoction combined with cisplatin was significantly increased in the 24 h and 48 h.The proportion of cells in G1 phase was decreased，the proportion of cells in S phase was increased，and the proportion of CD44+CD117+cells was significantly decreased.Among them，the middle dose of Lichong Shengsui Decoction combined with cisplatin group had the strongest effects.Conclusion：Lichong Shengsui Decoction has anti-tumor effect，and its mechanism maybe increase the apoptosis of ovarian cancer SKOV3 cells by cisplatin，regulate cell cycle arrest and decrease the number of stem cells in ovarian cancer SKOV3 cells.

Key Words Lichong Shengsui Decoction; Ovarian cancer SKOV3 cells; Ovarian cancer stem cells; Cell cycle; Cell apoptosis

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.06.008

卵巢癌死亡率居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤第一位，病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確。據(jù)統(tǒng)計(jì)全世界范圍內(nèi)每年有將近20萬例患者被診斷為卵巢癌，12.5萬例患者死亡[1]。理想的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)輔以系統(tǒng)的鉑類藥物為基礎(chǔ)的化療是卵巢癌的規(guī)范性治療方案，盡管患者對(duì)腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和化療最初治療反應(yīng)良好，而多數(shù)患者會(huì)因復(fù)發(fā)最終導(dǎo)致死亡，對(duì)鉑類制劑的敏感程度決定卵巢癌患者最終疾病進(jìn)展，化療耐藥是卵巢癌復(fù)發(fā)和治療失敗的最主要原因之一[2-3]。自20世紀(jì)70年代腫瘤干細(xì)胞學(xué)說提出以來，腫瘤干細(xì)胞被認(rèn)為是腫瘤治療失敗的根本原因，干細(xì)胞特殊的生物學(xué)特性存在決定了腫瘤干細(xì)胞成為腫瘤治療過程中的巨大障礙。有研究者提出，消滅腫瘤干細(xì)胞的多能性和自我更新能力可阻止上皮性卵巢癌疾病的進(jìn)展和消除化療耐藥及其引起的復(fù)發(fā)[4，5]。因此，靶向消滅卵巢癌干細(xì)胞成為科研工作者的一個(gè)研究方向。課題組基于“溫煦腎陽，搜剔胞絡(luò)瘀滯”提出理沖生髓飲組方，該組方臨床研究發(fā)現(xiàn)可減輕卵巢癌化療患者化療反應(yīng)、提高機(jī)體免疫力，進(jìn)而達(dá)到抗腫瘤作用，然而作用機(jī)制并不明確。基于此本研究探討理沖生髓飲對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖、凋亡以及亞細(xì)胞表型影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD大鼠，雌性，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，飼養(yǎng)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)婦科藥理實(shí)驗(yàn)室，溫度（25±2）℃，濕度45%～50%。

1.1.2 藥物 理沖生髓飲有效藥物組成：莪術(shù)、三棱、人參、黃芪、水蛭、浙貝母、鹿茸、淫羊藿，中藥購(gòu)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥局。

1.1.3 試劑與儀器 青霉素和鏈霉素溶液（美國(guó)hyclone公司，批號(hào)：J170012）、胰蛋白酶（美國(guó)hyclone公司，批號(hào)：J180025）、1640培養(yǎng)液（美國(guó)hyclone公司，批號(hào)：AD17321268）;胎牛血清（美國(guó)gibco公司，批號(hào)：1989478）;CCK-8試劑盒（日本Dojindo公司，批號(hào)：LQ727）;FITC Mouse Anti-Human CD44（美國(guó)BD公司，批號(hào)：5275777），PE Mouse Anti-Human CD117（美國(guó)BD公司，批號(hào)：5153811）;APC Mouse Anti-Human CD133（美國(guó)BD公司，批號(hào)：5160823188）;Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（天津三箭生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：AGZ20）和細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：0101419190308）;光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司，型號(hào)：IX51）;酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司，型號(hào)：Infinite M200 Pro）;人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株（上海中橋新舟生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：ZQ0074）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備

1.2.1.1 卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)分組 卵巢癌細(xì)胞SKOV3用含10%FBS的1640培養(yǎng)基置于37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，3～4 d進(jìn)行傳代處理，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究，實(shí)驗(yàn)分為：空白組：正常培養(yǎng)基培養(yǎng)、順鉑組：10 μg/mL順鉑、理沖生髓飲低劑量+順鉑組：10%含藥血清+10 μg/mL順鉑，理沖生髓飲中劑量+順鉑組：10%含藥血清+10 μg/mL順鉑，理沖生髓飲高劑量+順鉑組：10%含藥血清+10 μg/mL順鉑，共5組。

1.2.1.2 理沖生髓飲含藥血清制備 SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為空白組、理沖生髓飲低、中、高劑量組，每組8只，理沖生髓飲低劑量組予有效組分2.66 g/kg（相當(dāng)于中藥飲片8.55 g/kg），中劑量組給予有效組分5.32 g/kg（相當(dāng)于中藥飲片17.1 g/kg），高劑量組予有效組分10.64 g/kg（相當(dāng)于中藥飲片34.2 g/kg），蒸餾水稀釋有效組分;空白組予同體積蒸餾水，連續(xù)灌胃7 d。于末次給藥結(jié)束2 h眼眶取血，室溫下靜置30 min，離心機(jī)3 500 r/min 4 ℃離心10 min，抽取血清0.22 μm無菌條件下過濾2次，56 ℃恒溫水浴鍋滅活30 min，置-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 給藥方式 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期卵巢癌skov3細(xì)胞以104接種于24孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)12 h，再分別加入不同濃度含藥血清及順鉑干預(yù)24 h或者48 h，收集細(xì)胞用于后期實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.2.3.1 CCK-8檢測(cè)順鉑對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖抑制作用 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人卵巢癌SKOV3細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為104/mL加入96孔培養(yǎng)板，每孔加入100 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育待細(xì)胞鋪滿瓶底后加入順鉑濃度梯度為0 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、25 μg/mL、30 μg/mL，每孔加入含順鉑的培養(yǎng)液100 μL，每個(gè)濃度重復(fù)5個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，干預(yù)結(jié)束后每孔加入10 μL的CCK-8繼續(xù)孵育4 h，酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm處的吸光度值。根據(jù)吸光度值計(jì)算順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞抑制率，求算IC50值。

1.2.3.2 Annexin V-FITC法檢測(cè)理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞的凋亡情況影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人卵巢癌SKOV3細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為104/mL加入6孔培養(yǎng)板，每孔加入2 000 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，實(shí)驗(yàn)分為空白組、順鉑組、順鉑+低劑量組、順鉑+中劑量組和順鉑+高劑量組，每孔加入2 000 μL含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h，胰酶進(jìn)行消化收集細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，PBS洗滌2次，1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入195 μL Annexin V-FITC結(jié)合液輕輕重懸細(xì)胞，加入5 μL Annexin V-FITC，輕輕混勻，加入10 μL碘化丙啶染色液，混勻，室溫避光孵育20 min，孵育完成進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

1.2.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞周期調(diào)控影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人卵巢癌SKOV3細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為104/mL加入6孔培養(yǎng)板，每孔加入2 000 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，實(shí)驗(yàn)分為空白組、順鉑組、順鉑+低劑量組、順鉑+中劑量組和順鉑+高劑量組，每孔加入2 000 μL含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h，胰酶進(jìn)行消化收集細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，加入1 mL冰浴預(yù)冷70%乙醇，輕輕吹打混勻，4 ℃固定2 h。1 000 r/min離心3～5 min，沉淀細(xì)胞，加入1 mL冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，1 000 r/min左右離心3～5 min離心棄上清，每管細(xì)胞樣品中加入染色緩沖液0.5 mL，PI染色液25 μL，RNase A 10 μL，重懸細(xì)胞，37 ℃避光溫浴30 min，用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長(zhǎng)488 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。采用MODFIT分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。

1.2.3.4 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞中CD44+CD117+的比例 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期人卵巢癌SKOV3細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為104/mL加入6孔培養(yǎng)板，每孔加入2 000 μL置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育24 h，實(shí)驗(yàn)分為空白組、順鉑組、順鉑+低劑量組、順鉑+中劑量組和順鉑+高劑量組，每孔加入2 000 μL含有相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，胰酶進(jìn)行消化收集細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，PBS洗滌2次，1 000 r/min離心5 min，棄上清，加入100 μL PBS重懸細(xì)胞，加入20 μL FITC小鼠抗人CD44、5 μL PE小鼠抗人CD117、10 μL APC小鼠抗人CD133，混勻，避光孵育20 min，孵育結(jié)束后，加入2 mL PBS洗滌細(xì)胞，1 000 r/min離心5 min棄上清，加入500 μL PBS重懸細(xì)胞，上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所得計(jì)量數(shù)據(jù)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖抑制作用影響 顯微鏡下觀察不同濃度的順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖及形態(tài)影響，隨著順鉑濃度的升高貼壁細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，凋亡細(xì)胞呈懸浮狀態(tài)并且伴有細(xì)胞形態(tài)的改變。見圖1。不同濃度順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞抑制作用影響，從圖中可以看出SKOV3細(xì)胞存活率隨著順鉑濃度的增加而降低，與順鉑濃度呈負(fù)相關(guān)，根據(jù)曲線進(jìn)行擬合算出順鉑的IC50值為23.19 μg/mL。見圖2。

2.2 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡影響與空白組比較，藥物處理24 h和48 h的順鉑組SKOV3細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），順鉑聯(lián)合低劑量組、順鉑聯(lián)合中劑量組和順鉑聯(lián)合高劑量組SKOV3細(xì)胞凋亡率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與順鉑組比較，藥物處理24 h的順鉑聯(lián)合低劑量組、順鉑聯(lián)合中劑量組SKOV3細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），順鉑聯(lián)合高劑量組SKOV3細(xì)胞凋亡沒有明顯變化;藥物處理48 h的順鉑聯(lián)合中劑量組、順鉑聯(lián)合高劑量組SKOV3細(xì)胞凋亡率明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），順鉑聯(lián)合低劑量組SKOV3細(xì)胞凋亡沒有明顯變化。見表1、圖3。

2.3 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞周期影響藥物干預(yù)24 h的流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示第1個(gè)高峰為G0/G1期、凹谷為S期、第2峰為G2/M期，其顯示區(qū)域的峰面積的比例就是各周期的比例。與空白組比較，順鉑組中G0/G1期細(xì)胞數(shù)量有所降低（P<0.05），G2/M期細(xì)胞數(shù)量有所增加（P>0.05），S期細(xì)胞數(shù)量明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與順鉑組比較，理沖生髓飲中、低劑量聯(lián)合順鉑組中G0/G1期細(xì)胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），理沖生髓飲低劑量聯(lián)合順鉑中G2/M期細(xì)胞數(shù)量明顯降低（P<0.05），理沖生髓飲中劑量聯(lián)合順鉑組中G2/M期細(xì)胞數(shù)量略有增加（P>0.05），S期細(xì)胞數(shù)量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。理沖生髓飲高劑量聯(lián)合順鉑組中G0/G1期細(xì)胞數(shù)量明顯降低（P<0.05），S期細(xì)胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），G2/M期細(xì)胞數(shù)量略有增加（P>0.05）。見表2、圖4。

藥物干預(yù)48 h的流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示與空白組比較，順鉑組中G0/G1期、G2/M期和S期細(xì)胞數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與順鉑組比較，理沖生髓飲高、中、低劑量聯(lián)合順鉑組中G0/G1期細(xì)胞數(shù)量明顯降低（P<0.05），S期細(xì)胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），理沖生髓飲低、中劑量聯(lián)合順鉑組中G2/M期細(xì)胞數(shù)量明顯降低（P>0.05），理沖生髓飲高劑量聯(lián)合順鉑組中G2/M期細(xì)胞數(shù)量明顯升高（P>0.05）。見表3、圖4。

2.4 理沖生髓飲聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV3細(xì)胞中CD44+CD117+細(xì)胞比例 CD44+CD117+細(xì)胞分布于右上象限，熒光信號(hào)越多表明細(xì)胞比例越大。與空白組比較，順鉑組中CD44+CD117+細(xì)胞數(shù)量明顯升高（P<0.05），與順鉑組比較，理沖生髓飲低、中、高劑量聯(lián)合順鉑組中CD44+CD117+細(xì)胞數(shù)量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。其中理沖生髓飲中劑量聯(lián)合順鉑組中CD44+CD117+細(xì)胞數(shù)量降低最為明顯。見表4、圖5。

3 討論

王秀霞教授針對(duì)卵巢癌“腎陽虛衰，血瘀于胞”病機(jī)以及“久病入于絡(luò)”，確立“溫煦腎陽，搜剔胞絡(luò)瘀滯”的治療原則，反復(fù)推敲確立理沖生髓飲組方。理沖生髓飲組方由人參、鹿茸、黃芪、淫羊藿、水蛭、莪術(shù)、三棱、浙貝母組成，其中三棱、莪術(shù)為君藥。從藥物作用來說，張壽甫老先生認(rèn)為“三棱、莪術(shù)性近和平，而以治女子瘀血，雖堅(jiān)如鐵石亦能徐徐消除，而猛烈開破之品轉(zhuǎn)不能建此奇功，此三棱、莪術(shù)獨(dú)具之良能也”，“……若與參、術(shù)、耆諸藥并用大能開胃進(jìn)食，調(diào)血和血”[6]。三棱、莪術(shù)不僅能消癥，且配合人參、黃芪可改善卵巢癌患者食欲不振情況，提高機(jī)體免疫力[7];水蛭破瘀血而不傷新血，《本經(jīng)》曰：“水蛭最善食人之血，而性又遲緩善入。遲緩則生血不傷，善入則堅(jiān)積易破，借其力以消既久之滯，自有利而無害也”，可搜剔胞絡(luò)之瘀滯;浙貝母軟堅(jiān)散結(jié);人參、鹿角霜、黃芪、淫羊藿益氣溫陽補(bǔ)腎，提高機(jī)體免疫力[8-9]。卵巢癌發(fā)病屬正虛邪實(shí)，過用攻伐恐犯虛虛之戒，緩攻緩消，攻補(bǔ)兼施，寓補(bǔ)于攻，寓攻于補(bǔ)，方能奏效，基于此理沖生髓飲全方藥物性溫或平，味多甘辛苦，共奏溫煦腎陽、流行脈絡(luò)、搜剔胞絡(luò)瘀滯之功效。

細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動(dòng)的基本過程，它控制著細(xì)胞從靜止期向生長(zhǎng)增殖期轉(zhuǎn)化。哺乳動(dòng)物的細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂周期分為4個(gè)階段，即G1期、S期、G2期、M期，在細(xì)胞周期過程中通過細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)來保證細(xì)胞周期事件忠實(shí)性及按序完成[10]，腫瘤是在環(huán)境因素和遺傳因素共同作用下引起的細(xì)胞周期紊亂、細(xì)胞失控性生長(zhǎng)的一類疾病，失控性生長(zhǎng)是各種腫瘤共同的生物學(xué)特征，其主要分子機(jī)制是細(xì)胞周期紊亂導(dǎo)致細(xì)胞增殖過多和凋亡過少[11-12]，其中S期的DNA合成和G2/M期的細(xì)胞有絲分裂對(duì)維持腫瘤細(xì)胞的惡性增殖尤為重要。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)理沖生髓飲有效組分聯(lián)合順鉑可顯著提高SKOV3細(xì)胞的凋亡率，在順鉑作用下，SKOV3細(xì)胞細(xì)胞周期主要分布于G1期，理沖生髓飲有效組分中劑量聯(lián)合順鉑干預(yù)48 h時(shí)G1期細(xì)胞減少、S期細(xì)胞增多，總凋亡率可達(dá)96.03%，而順鉑組總凋亡率僅為84.81%，作用最為顯著。理沖生髓飲聯(lián)合順鉑可以通過提高S期細(xì)胞比例，增加細(xì)胞凋亡，促進(jìn)順鉑的抗腫瘤作用，該研究結(jié)果與劉念的研究結(jié)果相似[13]。

CD44+CD117+細(xì)胞是由CD44和CD177共同結(jié)合來標(biāo)記卵巢癌干細(xì)胞[14]。CD44是透明質(zhì)酸受體，與細(xì)胞遷移有關(guān)，是乳腺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的干細(xì)胞標(biāo)記物[15];CD117也被稱為c-kit，是酪氨酸激酶Ⅲ型受體，被認(rèn)為是干細(xì)胞因子受體，且具有抗凋亡作用。CD44+CD117+細(xì)胞對(duì)順鉑具有耐藥性，且100個(gè)CD44+CD117+細(xì)胞就可在體內(nèi)形成腫瘤[16]。研究表明，降低CD44+CD117+細(xì)胞的比例可減輕腫瘤進(jìn)展、增強(qiáng)順鉑敏感性[17-18]。本研究應(yīng)用理沖生髓飲干預(yù)卵巢癌SKOV3細(xì)胞，24 h后發(fā)現(xiàn)順鉑對(duì)CD44+CD117+細(xì)胞具有富集作用，順鉑作用下CD44+CD117+細(xì)胞比例明顯高于空白組，理沖生髓飲中劑量聯(lián)合順鉑降低CD44+CD117+細(xì)胞比例作用最為明顯。該結(jié)果表明理沖生髓飲能夠降低順鉑對(duì)卵巢癌干細(xì)胞的富集作用，靶向降低卵巢癌干細(xì)胞CD44+CD117+比例，通過對(duì)卵巢癌干細(xì)胞的靶向作用達(dá)到治療卵巢癌的目的。綜上所述，理沖生髓飲聯(lián)合順鉑能夠增加卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡，影響調(diào)控細(xì)胞周期，降低CD44+CD117+細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而增加抗腫瘤作用及逆轉(zhuǎn)多藥耐藥。

參考文獻(xiàn)

[1]Torre LA，Bray F，Siegel RL，et al.Global cancer statistics，2012[J].CA Cancer J Clin，2015，65（2）：87-108.

[2]Eisenhauer EA，Vermorken JB，van Glabbeke M.Predictors of response to subsequent chemotherapy in platinum pretreated ovarian cancer：a multivariate analysis of 704 patients[J].Ann Oncol，1997，8（10）：963-968.

[3]Meinhold-Heerlein I，Hauptmann S.The heterogeneity of ovarian cancer[J].Arch Gynecol Obstet，2014，289（2）：237-239.

[4]于風(fēng)勝，李藝，崔恒.卵巢癌干細(xì)胞及卵巢癌治療[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2014，30（1）：14-17.

[5]王文靜，吳韶飛，郭飄婷，等.熊果酸對(duì)卵巢癌干細(xì)胞荷瘤裸鼠耐藥的逆轉(zhuǎn)作用[J].上海中醫(yī)藥雜志，2016，50（5）：70-76.

[6]張錫純.醫(yī)學(xué)衷中參西錄·下冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：120.

[7]程堃.理沖生髓飲對(duì)卵巢癌術(shù)后化療患者減毒增效作用的臨床研究[D].哈爾濱：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[8]辛宇，邱智東，董金香，等.中藥治療卵巢癌研究進(jìn)展[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘，2018，18（21）：21-22.

[9]郝悅，張新.中醫(yī)藥治療卵巢癌研究進(jìn)展[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2011，25（7）：35-36.

[10]Funk JO，Kind P.Cell cycle control，genetic instability and cancer[J].Hautarzt，1997，48（3）：157-165.

[11]Otto T，Sicinski P.Cell cycle proteins as promising targets in cancer therapy[J].Nat Rev Cancer，2017，17（2）：93-115.

[12]曹亞.細(xì)胞周期與腫瘤[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)：生理、病理科學(xué)與臨床分冊(cè)，2002，22（2）：103-105.

[13]劉念，江彩霞，劉力，等.黃連素對(duì)人卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J].中國(guó)婦幼保健，2018，33（4）：911-914.

[14]Zhang S，Balch C，Chan MW，et al.Identification and characterization of ovarian cancer-initiating cells from primary human tumors[J].Cancer Res，2008，68（11）：4311-4320.

[15]Burgos-Ojeda D，Rueda BR，Buckanovich RJ.Ovarian cancer stem cell markers：prognostic and therapeutic implications[J].Cancer Lett，2012，322（1）：1-7.

[16]Ffrench B，Gasch C，O′Leary JJ，et al.Developing ovarian cancer stem cell models：laying the pipeline from discovery to clinical intervention[J].Mol Cancer，2014，13：262.

[17]Amy PN Skubitza，Elizabeth P Taras，Kristin LM Boylan，et al.Targeting CD133 in an in vivo ovarian cancer model reduces ovarian cancer progression[J].Gynecol Oncol，2013，130（3）：579-587.

[18]Zhang R，Zhang P，Wang H，et al.Inhibitory effects of metformin at low concentration on epithelial-mesenchymal transition of CD44+CD117+ovarian cancer stem cells[J].Stem Cell Res Ther，2015，6：262.

（2018-11-01收稿 責(zé)任編輯：王明）