鯽魚冬瓜皮湯改善腎病綜合征大鼠腎功能的實(shí)驗(yàn)研究

蔡亞宏 馮進(jìn) 陳新宇 何澤云 楊楠

〔摘要〕 目的 觀察鯽魚冬瓜皮湯聯(lián)合常規(guī)治療方法對腎病綜合征模型大鼠腎功能的保護(hù)作用。方法 將96只SD大鼠隨機(jī)分為4組，分別為正常組、模型組、治療組、對照組，對照組予以常規(guī)治療，治療組除常規(guī)治療外，按照臨床等效劑量予以鯽魚冬瓜皮湯，連續(xù)14 d為一療程，共治療2個療程。分別于治療前、治療2周及治療4周后，檢測大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)、24 h尿蛋白及肌酐、尿素氮、尿酸水平。結(jié)果 與治療前相比，對照組、治療組體質(zhì)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，對照組與治療組的體質(zhì)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但對照組和治療組相比，體質(zhì)量無明顯差異（P>0.05）。與模型組相比較，對照組遠(yuǎn)端小管排列較緊密，組織間可見少量炎性滲出;治療組較對照組減輕。經(jīng)過4周的治療后，治療組尿蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸水平較治療前顯著下降（P<0.05）;與模型組比，治療組指標(biāo)有顯著性改善（P<0.05）;治療組與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 采用鯽魚冬瓜皮湯聯(lián)合常規(guī)治療方法可有效改善腎病綜合征模型大鼠體質(zhì)量比，減少其24 h尿蛋白及肌酐、尿素氮、尿酸水平。

〔關(guān)鍵詞〕 腎病綜合征;鯽魚冬瓜皮湯;體質(zhì)量;尿蛋白;腎功能

〔中圖分類號〕R256.5;R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕B? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.06.008

〔Abstract〕 Objective To observe the protective effect of Crucian Carp and Chinese Wax Gourd Peel Soup combined with routine treatment on renal function in nephrotic syndrome rats. Methods A total of 96 SD rats were randomly divided into 4 groups： a normal group， a model group， a treatment group and a control group. The control group was given routine treatment. Except the routine treatment， the treatment group was also given Crucian Carp and Chinese Wax Gourd Peel Soup according to the clinical equivalent dosage. Continuous 14 d as 1 course of treatment， with a total of 2 courses of treatment. The pathomorphology of renal tissue， and the levels of 24 h urinary protein， creatinine， urea nitrogen and uric acid were measured before the treatment， 2 weeks after the treatment and 4 weeks after the treatment. Results Compared with the body mass before the treatment， the difference between the control group and the treatment group was statistically significant （P<0.05）. Compared with the model group， the difference in the body mass between the control group and the treatment group was statistically significant （P<0.05）， but there was no significant difference in the body mass between the control group and the treatment group （P>0.05）. Compared with the model group， the distal tubules of the control group were arranged more tightly， and there was a little inflammatory exudation between the tissues. And those in the treatment group was less sever than those in the control group. After 4 weeks of treatment， the levels of urinary protein， creatinine， urea nitrogen and uric acid in the treatment group were significantly decreased than those before the treatment （P<0.05）. Compared with the model group， there were significant differences in the treatment group （P<0.05）， and those in the treatment group was statistically significant from those in the model group （P<0.05）. Conclusion The Crucian Carp and Chinese Wax Gourd Peel Soup combined with routine treatment can effectively improve the body mass index of rats with nephrotic syndrome and reduce their levels of 24 h urinary protein， creatinine， urea nitrogen and uric acid.

〔Keywords〕 nephrotic syndrome; Crucian Carp and Chinese Wax Gourd Peel Soup; body mass; urinary protein; renal function

腎病綜合征（nephrotic syndrome， NS）是由于腎小球?yàn)V過膜對血漿蛋白質(zhì)通透性的增高，使血漿內(nèi)大量蛋白質(zhì)從尿中丟失，從而導(dǎo)致一系列病理生理變化的一種臨床綜合征[1]。目前，醫(yī)學(xué)界認(rèn)為除了相關(guān)的藥物治療之外，合理地安排飲食、營養(yǎng)可減輕蛋白尿和水腫以及改善高脂血癥。本研究試圖在對腎病綜合征規(guī)范化飲食研究的基礎(chǔ)上探討鯽魚冬瓜皮湯對腎病綜合癥模型大鼠的輔助治療作用，通過觀察大鼠24 h尿蛋白、腎功能及病理形態(tài)學(xué)變化，旨在構(gòu)建與中醫(yī)特色食療緊密結(jié)合的規(guī)范化飲食模式和具體操作的策略與方法體系，進(jìn)一步豐富護(hù)理中醫(yī)特色食療的研究成果，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動物

雄性SD大鼠由湖南中醫(yī)藥大學(xué)提供，體質(zhì)量（200±20）g，動物許可證編號：SYXK（湘）2015-0003。

1.2? 腎病綜合征大鼠模型制備及分組

采用大鼠加速腎毒血清腎炎模型[2]。選用尿蛋白陰性大鼠，嘌呤毒素腹腔注入，首劑100 mg/kg，以后每隔2周按25 mg/kg注射，計5次。正常組予等容量生理鹽水腹腔注射。據(jù)首次給藥后2周尿蛋白>150 mg/24 h者，隨機(jī)分模型組、治療組與對照組每組各24只，其中每個時相各8只。

1.3? 藥物及試劑

強(qiáng)的松（浙江仙琚制藥股份有限公司）;水合氯醛（上海國藥集團(tuán)）;Harris蘇木素、伊紅、3%過氧乙酸均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。

1.4? 主要儀器

TP-2200B型電子天平（湘儀天平儀器有限公司）;Z32HK型臺式冷凍離心機(jī)（美國Leica Microsystems有限公司）;XG1D型脈沖真空管滅菌鍋（山東新華醫(yī)療器械有限公司）;101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京市永光明醫(yī)療器械有限公司）。

1.5? 治療方法

對照組接受如下常規(guī)治療：每日給藥劑量根據(jù)70 kg成人每日服用強(qiáng)的松10 mg/（kg·d） 進(jìn)行換算，換算后得出大鼠等效劑量為0.9 mg/kg，每天灌胃4 mL，一天一次，從手術(shù)后24 h開始給藥，直到處死;治療組除常規(guī)治療外加用鯽魚冬瓜皮湯（去頭去尾鯽魚肉約150 g，帶皮冬瓜150 g，水800 mL，濃縮至160 mL。給藥劑量根據(jù)70 kg成人每日服用160 g劑量進(jìn)行換算，換算后得出大鼠等效生藥劑量14.4 g/kg，每天灌胃4 mL，從手術(shù)后24 h開始給藥，每天兩次，直到處死。連續(xù)14 d為一療程，共治療兩個療程。

1.6? 大鼠體質(zhì)量比較

觀察第1、14、28天大鼠體質(zhì)量變化。

1.7? 腎組織HE染色

采取術(shù)后新鮮腎組織材料，2 mm2厚度的組織塊立即浸入4 ℃ 4%多聚甲醛固定液6 h（固定液與組織塊的體積比為20∶1）。用1×PBS溶液浸泡固定后的組織塊12 h，多次置換固定液。組織塊依次浸入70%→85%→95%→無水乙醇，各30 min，每步2遍（應(yīng)置于搖床振蕩）。組織塊浸入二甲苯（脫乙醇，避免組織因失水過度而出現(xiàn)收縮與變形），30 min，2遍（置于搖床振蕩）。將2個裝有干凈已融石蠟的稱量瓶，置58 ℃烘箱。先用吸水紙吸去多余透明劑，將組織塊移入第一杯石蠟中，30 min后再將組織塊轉(zhuǎn)入第二杯蠟中繼續(xù)浸蠟1.5 h。使用組織自動包埋機(jī)對組織進(jìn)行包埋，將足量石蠟倒入融蠟缸中，提前2 h打開包埋機(jī)設(shè)置融蠟溫度60 ℃（融蠟溫度比蠟的熔點(diǎn)高兩度即可）待包埋機(jī)溫度穩(wěn)定，組織脫水透明完成可將組織置于包埋盒里放入包埋盒臺上踩下腳動流蠟開關(guān)進(jìn)行包埋。將蠟塊安裝到包埋底模，冷卻后開始修蠟。觀察大鼠在實(shí)驗(yàn)研究第1、14、28天腎小球、腎小管及腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)的病理形態(tài)學(xué)變化。

1.8? 尿液檢測

大鼠在實(shí)驗(yàn)研究的第1、14、28天被置于代謝籠收集24 h尿液，在此期間并不改變大鼠的進(jìn)食和飲水習(xí)慣，選固定時間將大鼠分別置于代謝籠，留取24 h尿液于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢查24 h尿蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸的排泄情況。

1.9? 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 20.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以“x±s”表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 大鼠體質(zhì)量情況

在實(shí)驗(yàn)過程中，治療前各組體質(zhì)量無明顯差異，在治療2周后，各組大鼠造模后大鼠體質(zhì)量增長均顯著減緩（P<0.05，P<0.01），其中模型組與正常組相比，具有明顯差異（P<0.01）。治療2周后，對照組、治療組與治療前相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與模型組比較而言，對照組與治療組的體質(zhì)量有變化（P<0.05），對照組和治療組相比，體質(zhì)量無明顯差異（P>0.05），治療4周后對照組和治療組體質(zhì)量有明顯差異（P<0.01）。見表1。

2.2? 腎組織HE染色

正常組的腎小球囊壁、腎小球基底膜、腎小管基底膜及近曲小管腔面刷狀緣均呈藍(lán)色，且結(jié)構(gòu)、形態(tài)正常（圖1A）;模型組可見腎小球球內(nèi)系膜細(xì)胞排列紊亂，組織間又明顯水腫（圖1B）;對照組遠(yuǎn)端小管排列較緊密，組織間可見少量炎性滲出（圖1C）;治療組可見球外系膜與球內(nèi)系膜細(xì)胞相延續(xù)，與球旁細(xì)胞、球內(nèi)系膜細(xì)胞之間縫隙較?。▓D1D）。見圖1。

2.3? 24 h尿蛋白檢測

結(jié)果表明，治療前各組尿蛋白定量無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性（P>0.05）。治療2周后，與正常組相比，模型組有顯著性差異（P<0.01）;對照組與治療組尿蛋白與治療前相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。治療4周后，與模型組相比，對照組和治療組24 h尿蛋白均明顯下降（P<0.05），其中治療組下降程度較對照組明顯，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4? 腎功能檢測

結(jié)果表明，治療前各組肌酐水平無統(tǒng)計學(xué)差異，具有可比性（P>0.05）。治療2周后，與正常組相比，模型組腎功能指標(biāo)有顯著性差異（P<0.01）;對照組、治療組肌酐水平均有所降低，較治療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。治療4周后，與對照組比，治療組腎功能各指標(biāo)下降更明顯，差異較具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。兩組尿素氮水平在治療過程中均呈下降趨勢，對照組治療4周后雖有下降趨勢，但與治療2周后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），而治療組尿素氮水平經(jīng)過4周的治療下降明顯，與治療前以及對照組同期比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

3 討論

腎病綜合征最常見的癥狀就是水腫，而水腫也是最容易被患者察覺的癥狀，很多患者的水腫部位最開始出現(xiàn)于眼瞼，隨著病情的進(jìn)展，水腫逐漸遍及全身，呈凹陷性，若患者出現(xiàn)低蛋白血癥時，往往會伴隨全身的水腫，或者水腫反復(fù)發(fā)作難以消退，還可伴有胸水、腹水，導(dǎo)致患者胸悶氣促、腹脹難忍、行動不便等不適，也加重了患者感染、貧血、低血容量、血栓等并發(fā)癥發(fā)生的機(jī)會[3-6]。目前，西醫(yī)治療以對癥支持治療（利尿消腫、減少尿蛋白、調(diào)脂）、抑制免疫與炎癥反應(yīng)（糖皮質(zhì)激素、細(xì)胞毒性藥物、環(huán)孢素等）等為主[7-9]。但長期使用西藥的毒副反應(yīng)較明顯，且腎功能不全是禁用激素的[10]。無論西醫(yī)或者中醫(yī)都認(rèn)為合理的飲食可以減輕腎臟負(fù)擔(dān)、維持身體營養(yǎng)、減輕或防止水腫，因此，如何通過合理的營養(yǎng)治療來控制和改善水腫是治療腎病綜合征水腫的重要內(nèi)容。

鯽魚冬瓜皮湯為湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院何澤云教授根據(jù)三十多年臨床工作經(jīng)驗(yàn)創(chuàng)制的治療水腫有效食療方，可用于糖尿病腎病水腫、肝硬化水腫、營養(yǎng)不良性水腫等?！毒霸廊珪つ[脹》曰[11]：“凡水腫等證，乃肺脾腎三臟相干之病……故其制在脾?！庇纱丝梢?，當(dāng)人體脾運(yùn)不健，肺失宣肅，腎不主水，三焦氣化功能障礙，則會出現(xiàn)水濕內(nèi)停的情況，從而發(fā)為水腫。脾虛而致其運(yùn)化功能的失職，使精微生化無源可來，導(dǎo)致尿中排出大量蛋白和血中白蛋白的含量減少的癥狀。鯽魚性平味甘，主要入脾、胃、大腸三經(jīng);具有培元?dú)庋a(bǔ)虛損、健益脾利水濕之功效。明·繆希壅《本草經(jīng)疏》[12]云：“鯽魚察土氣以生，故其味甘，其氣溫，無毒，是以能入胃，治胃弱不下食”，對于治療不思飲食、完谷不化，鯽魚是食療保健的頗宜之品。鯽魚乃血肉有情之品，既能填精補(bǔ)髓而升高血清蛋白，兼能益脾行水利濕消腫。若患者兼有水濕內(nèi)停不化之癥，其又無因滋補(bǔ)而傷胃的弊端，確為良選[13]。冬瓜性味微寒甘淡，主要入肺、心、脾三經(jīng)，具利水消腫，消暑止渴，解毒化痰之功效[14]。在機(jī)體水濕之邪泛濫肌膚體表、小便通行不利時多用冬瓜皮行消腫利尿的作用。何澤云教授認(rèn)為[15]，腎病綜合征其病機(jī)根本在于水液代謝的障礙，與肺、脾、腎臟功能失調(diào)有著很大的關(guān)聯(lián)性。鯽魚冬瓜皮湯有行水利尿消腫之功效，在輔助治療腎病綜合征水腫的臨床使用過程中發(fā)現(xiàn)鯽魚冬瓜皮湯的療效確切，制作簡單方便，食用安全，深受廣大腎病患者的珍愛。

本研究結(jié)果顯示，對照組、治療組與治療前及同期模型組相比，體質(zhì)量明顯升高;病理形態(tài)學(xué)觀察到與模型組相比，對照組遠(yuǎn)端小管排列較緊密，組織間可見少量炎性滲出，治療組較對照組減輕;經(jīng)過4周的治療后，治療組尿蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸水平與治療前及同期模型組顯著下降，且治療組與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異。采用鯽魚冬瓜皮湯聯(lián)合常規(guī)治療方法可有效減少腎病綜合征模型大鼠24 h尿蛋白及肌酐、尿素氮、尿酸水平。

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