LASP1在鼻咽癌組織中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系分析

摘要：目的：探究LASP1在鼻咽癌組織中的表達(dá)，并同時(shí)分析該蛋白對(duì)該類患者預(yù)后的影響。方法：選取2014年6月至2019年5月的50例鼻咽癌患者作為標(biāo)本來源，利用免疫組化法對(duì)其組織標(biāo)本中LASP1的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并利用Kaplan-Meier法分析該蛋白對(duì)患者預(yù)后預(yù)測(cè)的影響。結(jié)果：（1）鼻咽癌患者的N（分期）與TNM分期均屬于危險(xiǎn)因素，高、低表達(dá)之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（<0.05）。（2）LASP1為鼻咽癌患者的獨(dú)立預(yù)后因子，<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：通過分析LASP1的表達(dá)明確了對(duì)鼻咽癌患者預(yù)后的影響，為今后鼻咽癌的臨床診斷與治療提供了新的標(biāo)志物與靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：LASP1蛋白;鼻咽癌;表達(dá)與預(yù)后

【中圖分類號(hào)】R856 ???【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ???【文章編號(hào)】2107-2306（2019）06-059-02

目前惡性腫瘤已經(jīng)嚴(yán)重威脅到人們的身體健康以及生命安全，對(duì)于此類疾病，臨床中大多采用化學(xué)治療的方式。鼻咽癌是一類具有地域性的惡性腫瘤，多發(fā)于我國東南亞以及我國的南方地區(qū)，這種疾病的發(fā)病率占頭頸部惡性腫瘤的第一位。LASP1最初出現(xiàn)于乳腺癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)cDNA文庫中，又稱為MLN501。該蛋白能夠在機(jī)體中的肌動(dòng)蛋白聚集位置起到結(jié)構(gòu)支架的作用，同時(shí)能夠轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核中，發(fā)揮細(xì)胞核轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的能力。LASP1在食管癌、乳腺癌及鼻咽癌等多種腫瘤中的高表達(dá)使其能夠參與腫瘤遷移、粘附以及增殖等過程。通過前期研究發(fā)現(xiàn)通過遏制LASP1能夠有效遏制腫瘤的生長(zhǎng)以及轉(zhuǎn)移。但是在研究過程中發(fā)現(xiàn)目前缺少關(guān)于LASP1影響鼻咽癌預(yù)后預(yù)測(cè)結(jié)果的研究，因此本實(shí)驗(yàn)將研究LASP1在鼻咽癌組織中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1材料與方法

1.1一般資料

選取2014年6月至2019年5月的50例鼻咽癌患者作為標(biāo)本來源。所有患者均已在入院后接受HE染色檢查，并由病理科醫(yī)師進(jìn)行確診;此外TNM分析必須根據(jù)AJCC/UICC最新分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析。所有研究對(duì)象的隨訪時(shí)間從開始治療的第一天至死亡或最后一次復(fù)查為止。所有研究對(duì)象的鼻咽癌細(xì)胞株HNE1、SUNE1、CNE2、CNE1以及HONE1等均由本院放療科實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期保存。本研究已通過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1免疫組化實(shí)驗(yàn)

將鼻咽癌標(biāo)本蠟塊切成2μm薄片放在玻片上，脫臘及脫水后利用檸檬酸鈉緩沖溶液進(jìn)行沖洗。LASP1購自于Proteintech公司，在4℃的環(huán)境中孵育并過夜。經(jīng)過0.05%PBSTriton清洗后必須再次孵育，環(huán)境為室溫。隨后用同樣方式清洗后，將含有DAPI的封片劑進(jìn)行染色并封片。封片后于零下20℃的環(huán)境中避光保存，利用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀測(cè)。每張切片均取3個(gè)視野，使用ImageProPlus軟件分析免疫組化結(jié)果。其分析過程包括：選取圖片上的目標(biāo)分析區(qū)域，并檢測(cè)其積分光密度，隨后選取其有效區(qū)域的面積并進(jìn)行計(jì)算光密度平均值。期間使用的ABC染色試劑盒以及DAB顯色試劑盒均由Vector Laboration公司生產(chǎn)。

1.2.2Western Blot實(shí)驗(yàn)

利用Bio Rad Pro-tein Assay Kit試劑盒對(duì)LASP1蛋白樣品濃度進(jìn)行檢測(cè)，并利用Bio-Rad電泳槽將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。加入LASP1一抗并孵育過夜后加入對(duì)應(yīng)的二抗，孵育1h后根據(jù)超敏發(fā)光液試劑盒說明書將其顯影與定影，最后利用膠片掃描的方式存檔。

1.2.3Real-time PCR實(shí)驗(yàn)

首先提取細(xì)胞株總RNA，隨后利用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)錄結(jié)束后根據(jù)SYBR GreenqPCR SuperMix-UDG的操作說明書定量分析PCR。

1.3觀察指標(biāo)

（1）LASP1在鼻咽癌患者中的表達(dá);（2）LASP1與鼻咽癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

針對(duì)研究數(shù)據(jù)，采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料用[（%）]表示，運(yùn)用進(jìn)行檢驗(yàn)。同時(shí)利用多因素分析方式評(píng)估預(yù)后預(yù)測(cè)效果的影響因子。<0.05，代表差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1LASP1在鼻咽癌患者中的表達(dá)

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，分析患者的年齡、性別以及病理分期等因素分別在低表達(dá)及高表達(dá)中的表現(xiàn)可以證實(shí)，鼻咽癌患者的N（分期）TNM分期均屬于危險(xiǎn)因素，高低表達(dá)之間的差異比較顯著，<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。附表1。

2.3 LASP1與鼻咽癌患者預(yù)后的關(guān)系

從本次研究結(jié)果來看，眾多變量中僅LASP1為鼻咽癌患者的獨(dú)立預(yù)后因子，<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。附表2。

3討論

既往研究表示LASP1是細(xì)胞在運(yùn)動(dòng)過程中的一種關(guān)鍵蛋白分析，特別是在惡性腫瘤中其表達(dá)水平更高。LASP1作為細(xì)胞支架蛋白組成之一具有影響細(xì)胞遷移的作用。前期研究結(jié)果顯示LASP1含有LIM、NR和SH3結(jié)構(gòu)域，不僅能夠良好地在胞漿中表達(dá)，并且能夠與CXCR2和Vi-mentin等多種蛋白結(jié)合并參加腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞的遷移過程。本研究結(jié)果顯示，LASP1低表達(dá)患者的OS、DMFS、RFS水平均顯著低于LASP1高表達(dá)患者，證實(shí)LASP1在鼻咽癌發(fā)生進(jìn)展過程中占據(jù)重要地位。此外多因素研究結(jié)果表示LASP1高表達(dá)以及TNM分期是鼻咽癌患者OS的獨(dú)立預(yù)后因子，證明LASP1表達(dá)水平的高低能夠進(jìn)一步鑒別鼻咽癌患者預(yù)后的好壞。近幾年的研究結(jié)果顯示LASP1蛋白分子與CXCR12結(jié)合后能夠有效促進(jìn)LASP1細(xì)胞核轉(zhuǎn)位并激活細(xì)胞內(nèi)的甲基化過程，而本研究結(jié)果也表示LASP1主要表達(dá)范圍為鼻咽癌細(xì)胞胞漿，能夠借助與骨架蛋白結(jié)合的功能發(fā)揮作用，與上述結(jié)果基本一致。

綜上所述，LASP1在鼻咽癌組織中具有非常明顯的表達(dá)，并且其表達(dá)水平與患者的生存情況呈正相關(guān)，因此LASP1表達(dá)也是鼻咽癌患者的獨(dú)立預(yù)后因子。由此證實(shí)LASP1作為腫瘤促進(jìn)因子不僅能夠參與鼻咽癌的發(fā)展，而且能夠?yàn)楸茄拾┑呐R床治療指導(dǎo)提供有力依據(jù)。

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作者簡(jiǎn)介：黃金寧，男，1978年8月出生，本科學(xué)歷，民族：漢族;籍貫：廣東電白;研究方向：主要從事病理學(xué)診斷;職稱：主治醫(yī)師