基于線粒體COI基因序列的武漢地區(qū)常見麥蚜蚜種鑒定

楊鈺慧 謝佳燕 吳聰

摘要：【目的】采用線粒體COI基因序列分析武漢地區(qū)常見麥蚜蚜種的遺傳組成，探討基于COI基因序列作為常見麥蚜蚜種分子鑒定的可行性，為田間麥蚜的有效識(shí)別和綜合治理提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā坎杉錆h市田間和實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的3種麥蚜（禾谷縊管蚜、麥長(zhǎng)管蚜和麥二叉蚜），擴(kuò)增其COI基因后進(jìn)行測(cè)序，并進(jìn)行遺傳距離檢測(cè)及聚類分析?！窘Y(jié)果】3種麥蚜COI基因片段核苷酸組成中堿基C和G的總含量低于堿基A和T的總含量，其中含量最低的堿基為G，具有明顯的堿基偏倚性;不同麥蚜的種內(nèi)遺傳距離均小于0.010，種間遺傳距離約是種內(nèi)遺傳距離的10倍;聚類分析結(jié)果表明，蚜科的所有物種聚為一支，之后又形成3個(gè)分支，分屬于蚜科的3種麥蚜。【結(jié)論】3種麥蚜的分子鑒定與形態(tài)學(xué)分類結(jié)果一致，表明采用COI基因序列可對(duì)武漢地區(qū)常見麥蚜蚜種進(jìn)行有效鑒定。

關(guān)鍵詞： 麥蚜;COI基因序列;物種鑒定;蚜科

中圖分類號(hào)： S435.122.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2019）08-1742-06

Identification of wheat aphid species in Wuhan based on mitochondrial COI gene sequence

YANG Yu-hui， XIE Jia-yan*， WU Chong

（School of Biology and Pharmaceutical Engineering， Wuhan Polytechnic University， Wuhan? 430023， China）

Abstract：【Objective】This experiment used mitochondrial COI sequences to analyze the genetic composition of co-mmon wheat aphids species in Wuhan， investigated the feasibility of COI gene sequence as molecular identification for common wheat aphid species， and provided reference for effective identification and integrated management of wheat aphids in the field. 【Method】Samples of three different wheat aphids species[Rhopalosiphum padi（Linnaeus）， Macrosiphum avenae（Fabricius） and Schizaphis graminum] in the field in Wuhan and cultivated in the laboratory were collec-ted. The COI gene were amplified and sequenced. Genetic distance and the clustering were also analyzed. 【Result】In the nucleotide of COI gene fragment of the three wheat aphids，the total content of base C and base G was lower than the total content of base A and base T. The content of base G was the lowest and showed obvious base bias. All intraspecific genetic distances of these aphid species were lower than 0.010， and interspecific genetic distance was ten times more than intraspecific genetic distance of these aphid species. The analysis of clustering showed that all species of Aphidinae were clustered one clade， and then it formed three small clades which were individually clustered by different wheat aphids. 【Conclusion】The molecular identification of these wheat aphids in the field is consistent with the morphological classification. The results suggests that COI gene sequence can identify effectively the common wheat aphids in Wuhan.

Key words： wheat aphid; COI gene sequence; species identification; Aphidinae

0 引言

【研究意義】農(nóng)業(yè)害蟲所產(chǎn)生的直接和間接破壞對(duì)人類維持作物生產(chǎn)力和營(yíng)養(yǎng)安全等產(chǎn)生了重要影響。麥蚜是世界各小麥產(chǎn)區(qū)的常發(fā)性害蟲，隸屬于同翅目（Homoptera）蚜科（Aphidinae），為多型性昆蟲。麥蚜主要寄生在小麥穗部和中上部葉片上刺吸為害，直接造成麥類作物大量減產(chǎn)（李宏德，2016）。麥蚜還可傳播麥類病毒（劉艷莉等，2018），間接造成糧食作物嚴(yán)重減產(chǎn)。另外，一些麥蚜已成為入侵物種，對(duì)國(guó)際糧食生產(chǎn)和貿(mào)易產(chǎn)生嚴(yán)重危害（Bass et al.，2014）。麥蚜在我國(guó)已連續(xù)多年嚴(yán)重發(fā)生，對(duì)我國(guó)小麥的安全生產(chǎn)構(gòu)成嚴(yán)重威脅（李素娟等，2001）。在我國(guó)，危害麥類作物的蚜蟲主要有4種（韓松等，2018），在長(zhǎng)江中下游地區(qū)危害小麥的主要蚜蟲是麥長(zhǎng)管蚜[Sitobion avenae（Fabricius）]和禾谷縊管蚜[Rhopalosiphum padi（Linnaeus）]（杜新慧，2014）。長(zhǎng)期以來，麥蚜的防治仍以化學(xué)防治為主，田間的不合理用藥導(dǎo)致麥蚜危害加劇及麥蚜抗藥性水平顯著上升（王曉軍等，2004;李宏德，2016）。由于蚜蟲屬典型的r-對(duì)策昆蟲，其生活周期短，營(yíng)孤雌生殖，具有不同的寄主類型和顏色多型現(xiàn)象（張廣學(xué)，1999;Shufran et al.，2000），因而對(duì)各種生態(tài)系統(tǒng)具有較強(qiáng)的生態(tài)適應(yīng)能力;另外，不同麥蚜對(duì)作物的取食部位和傳毒能力不同，對(duì)作物產(chǎn)生的危害程度也不同，對(duì)麥蚜的錯(cuò)誤識(shí)別將影響田間病蟲害的有效管理和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。因此，快速、準(zhǔn)確地識(shí)別不同蚜種，對(duì)保障小麥產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】Enders等（2018）研究了土地覆蓋、溫度和降水等生態(tài)因子對(duì)麥蚜豐度及傳播病毒能力的影響，結(jié)果表明其他生態(tài)因子可能影響了禾谷縊管蚜和麥長(zhǎng)管蚜的豐度和傳毒能力;麥二叉蚜（Schizaphis graminum）的豐度受秋季降水和冬季溫度的影響，而傳毒能力不受這些因素的影響，麥二叉蚜是麥田中病毒傳播能力最強(qiáng)的麥蚜。DNA條形碼（DNA barcoding）技術(shù)是近年來對(duì)昆蟲進(jìn)行物種鑒定的新方法。Hebert等（2003a）首次采用COI基因序列對(duì)不同物種進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該基因能進(jìn)行有效的物種識(shí)別。近幾年有關(guān)其他昆蟲的研究也表明，COI基因片段作為條形碼可進(jìn)行有效識(shí)別和物種鑒定。如為確定入境口岸攔截的變?nèi)~木上纓翅目薊馬科的Leucothrips是否對(duì)美國(guó)農(nóng)業(yè)構(gòu)成入侵威脅，Skarlinsky等（2017）采集美國(guó)不同地點(diǎn)和不同宿主的薊馬科Leucothrips成蟲和幼蟲進(jìn)行比較分析，發(fā)現(xiàn)采集到的成蟲間無形態(tài)差異，形態(tài)學(xué)分析鑒定為薊馬科昆蟲L. furcatus，但采集的幼蟲形態(tài)差異明顯，經(jīng)線粒體COI基因和rRNA驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)該樣本分成2組，第一組僅由幼蟲構(gòu)成，與第二組存在明顯遺傳差異，第二組樣本由幼蟲和成蟲組成，遺傳分化較低且形態(tài)高度相似，表明它們構(gòu)成單一物種，而兩組幼蟲在形態(tài)上的不同和遺傳上的差異，表明其可能存在另一種隱蔽物種。Syromyatnikov等（2017）發(fā)現(xiàn)形態(tài)鑒定不易區(qū)分扁盾蝽屬物種，因此采用COI基因序列對(duì)4種扁盾蝽屬有害物種進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示該序列能準(zhǔn)確鑒定麥扁盾蝽（Eurygaster integriceps），并開發(fā)了能快速鑒定麥扁盾蝽的PCR-RFLP方法。Mackenzie等（2018）采用COI基因序列檢測(cè)田間常見蚜種中具有抑制馬鈴薯Y病毒（PVY）傳播殺蟲劑的特定抗性突變基因的頻率，結(jié)果表明，在田間采集的45種蚜蟲中至少有17種蚜種被認(rèn)為是PVY的載體，其中，桃蚜是所有檢測(cè)蚜種中對(duì)殺蟲劑抗性突變頻率最高的物種，是PVY和馬鈴薯卷葉病毒（PLRV）中最有效的載體物種?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】湖北省是我國(guó)南方小麥主產(chǎn)省份，在全國(guó)小麥生產(chǎn)中占有重要地位。近年來，由于化學(xué)農(nóng)藥的不合理使用，致使麥蚜抗性水平不斷增強(qiáng)。因此，如何通過現(xiàn)代生物技術(shù)與傳統(tǒng)化學(xué)防治相結(jié)合，對(duì)田間麥蚜物種進(jìn)行有效鑒定及合理利用化學(xué)農(nóng)藥和田間綜合治理具有重要的實(shí)踐意義。目前，基于COI基因序列對(duì)田間常見麥蚜蚜種進(jìn)行分析鑒定的研究報(bào)道較少?！緮M解決的關(guān)鍵問題】對(duì)湖北省武漢地區(qū)常見麥蚜種類的COI基因序列片段進(jìn)行擴(kuò)增及測(cè)序，分析不同麥蚜的遺傳特征，探討COI基因序列作為田間常見麥蚜蚜種分子鑒定標(biāo)記的可行性，為田間麥蚜的有效識(shí)別和綜合治理提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試禾谷縊管蚜（RP）和麥長(zhǎng)管蚜（SA）樣品于2017年5月采自湖北省武漢市周邊麥田內(nèi);麥二叉蚜（SG）為2017年9月采自田間，之后室內(nèi)采用瑞華HP300G型智能光照培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。所有樣本于-20 ℃保存?zhèn)溆?。此外，為進(jìn)行相關(guān)物種間的比較分析，從NCBI下載3種麥蚜的16條COI基因序列及取食小麥的其他3種害蟲的COI基因序列進(jìn)行分析，序列信息見表1。

1. 2 樣本DNA提取、PCR擴(kuò)增及測(cè)序

參照薩姆布魯克和拉塞爾（2002）、楊子祥等（2006）的方法，采用酚—氯仿法提取基因組DNA。利用Foottit等（2008）的引物L(fēng)epF：5'-ATTCAACCA ATCATAAAGATATTGG-3'/LepR：5'-TAAACTTCT GGATGTCCAAAAAATCA-3'（由北京六合華大基因科技股份有限公司合成）擴(kuò)增COI基因。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃ 50 s，45～50 ℃每升1 ℃循環(huán)5次，50 ℃循環(huán)10次，退火1 min，72 ℃ 1.5 min，進(jìn)行30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。將擴(kuò)增產(chǎn)物送至武漢艾康健生物科技有限公司進(jìn)行純化和測(cè)序。

1. 3 數(shù)據(jù)分析

對(duì)所得COI基因序列采用ClustalX ver.1.83進(jìn)行多重比對(duì)（Thompson et al.，1997），包括NCBI下載3種麥蚜的16條COI基因序列及3條取食小麥的其他害蟲（麥紅吸漿蟲、大青葉蟬和小麥皮薊馬）的COI基因序列（表1），識(shí)別COI基因序列后進(jìn)行不同物種間序列比對(duì)分析。利用MEGA 7.0分析3種麥蚜COI基因的序列特征、堿基組成及序列變異情況（Kumar et al.，2016），計(jì)算所有序列間的遺傳距離，采用鄰接法（Neighbour-joining）構(gòu)建不同麥蚜蚜種間的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，替代模型為Kimura雙參數(shù)法（Kimura-2-parameter），聚類樹分支的置信度選擇重復(fù)1000次自引導(dǎo)法（Bootstrap analysis）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 麥蚜COI基因片段的核苷酸組成

對(duì)麥蚜的線粒體COI基因序列進(jìn)行多重比對(duì)，得到長(zhǎng)度為669 bp的COI基因片段，該片段中未發(fā)現(xiàn)堿基插入或缺失。測(cè)序分析結(jié)果表明，在所有位點(diǎn)中，保守位點(diǎn)有589個(gè)（88%）、變異位點(diǎn)80個(gè)（12%）。3種麥蚜的堿基平均含量分別為T=40.9%、C=13.9%、A=34.5%和G=10.7%。堿基A+T含量為75.4%，其中第3位點(diǎn)A+T含量為94.1%。堿基C和G的總含量低于堿基A和T的總含量，其中含量最低的堿基為G，但不同麥蚜蚜種間的堿基組成無顯著差異（P>0.05）。堿基替換分析結(jié)果表明，有615個(gè)一致位，29個(gè)位點(diǎn)發(fā)生了堿基轉(zhuǎn)換，25個(gè)位點(diǎn)發(fā)生顛換，轉(zhuǎn)換主要發(fā)生在T～C之間，顛換主要發(fā)生在T～A之間，堿基變異均勻地分布于該序列的各區(qū)域。

2. 2 不同麥蚜COI基因序列的遺傳結(jié)構(gòu)

對(duì)不同麥蚜COI基因序列間的遺傳距離進(jìn)行分析，結(jié)果（表2）表明，3種麥蚜COI基因序列間的群體內(nèi)遺傳距離較低，均低于0.010，而所有麥蚜COI基因序列間的平均遺傳距離為0.084。種間遺傳距離約是種內(nèi)遺傳距離的10倍，種間遺傳距離差異顯著（P<0.05），而種內(nèi)差異較小。

2. 3 不同麥蚜COI基因序列的聚類分析結(jié)果

基于COI基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖1）顯示，蚜科的3個(gè)種聚成一支，其他的麥類害蟲各聚成不同的分支;蚜科物種聚成獨(dú)立的一支后，又形成3個(gè)獨(dú)立分支，分屬于蚜科的3種麥蚜，即麥二叉蚜、禾谷縊管蚜和麥長(zhǎng)管蚜。3種麥蚜的不同個(gè)體各自聚類形成相對(duì)獨(dú)立的分支，且節(jié)點(diǎn)支持率較高。

3 討論

對(duì)于小型昆蟲蚜蟲物種而言，其在不同季節(jié)、不同地點(diǎn)和宿主均存在多種生物型、顏色變種和隱存種的可能（Rebijith et al.，2013）。Duan等（2017）研究了禾谷縊管蚜種群生命周期與遺傳多態(tài)性的關(guān)系，結(jié)果表明，具有相同生殖方式的禾谷縊管蚜種群表現(xiàn)出相似的遺傳結(jié)構(gòu)，而生殖方式不同的群體間遺傳差異顯著。這些差異將增加形態(tài)學(xué)鑒定的難度，且消耗大量的鑒定時(shí)間和精力。DNA條形碼技術(shù)為小型昆蟲的快速鑒定提供了可能。已有研究表明，COI基因序列作為條形碼可有效識(shí)別和鑒定不同的昆蟲物種（Hebert et al.，2003a;Syromyatnikov et al.，2017），同時(shí)可檢查不同地理種群的差異。Xu等（2011）擴(kuò)增了17個(gè)地區(qū)麥長(zhǎng)管蚜種群的線粒體COI基因序列，結(jié)果顯示，我國(guó)北方麥長(zhǎng)管蚜種群的遺傳多樣性高于華南種群，季節(jié)對(duì)寄主植物的影響可能增強(qiáng)了北方種群的遺傳多態(tài)性水平。

COI基因?yàn)榫€粒體內(nèi)的蛋白質(zhì)編碼基因。在本研究中，3種麥蚜的COI基因序列與其他昆蟲線粒體DNA序列組成具有相似的特點(diǎn)，COI基因序列中的堿基組成表現(xiàn)出明顯的堿基偏倚性（Jermiin and Crozier，1994），序列中未發(fā)現(xiàn)堿基缺失或插入現(xiàn)象，可能與COI基因?yàn)榫€粒體蛋白質(zhì)編碼基因滿足功能上的需要和三聯(lián)體密碼子結(jié)構(gòu)的限制有關(guān)（Hebert et al.，2003b）。在蚜科中，已采用COI基因序列片段作為DNA條形碼對(duì)取食不同寄主植物的蚜蟲進(jìn)行快速而準(zhǔn)確的鑒定。汪珍春等（2013）研究表明，采用DNA條形碼快速鑒定常見花卉蚜種具有可行性。溫娟等（2013）基于COI基因序列對(duì)北京薔薇科植物上的9屬12種蚜蟲進(jìn)行DNA條形碼分析，結(jié)果顯示北京薔薇科花卉蚜種有83%能通過DNA條形碼進(jìn)行有效區(qū)分。Coeur d'acier等（2014）為274種歐洲蚜種構(gòu)建了DNA條形碼數(shù)據(jù)庫，其可對(duì)歐洲蚜種進(jìn)行無偏差分類，簡(jiǎn)化了80%用于物種鑒定的消耗。Lee等（2015）采用COI基因序列對(duì)寄生于同種沙棘植物上形態(tài)相似的3種蚜種進(jìn)行有效區(qū)分，并鑒定出一個(gè)隱種。

種間和種內(nèi)遺傳距離間的差異程度是COI基因序列作為DNA條形碼進(jìn)行物種鑒定的關(guān)鍵（Aliabadian et al.，2009），在DNA條形碼研究中物種劃分的參考值為0.02（腔腸動(dòng)物門除外）（Hebert et al.，2003b）。本研究中武漢市常見麥蚜物種內(nèi)COI基因的遺傳距離差異均低于0.010，且與種間遺傳距離的差距在10倍左右，表明該基因序列適用于麥蚜蚜種間的鑒定（Hebert et al.，2003a，2004;Meyer and Paulay，2005）。Shufran和Puterka（2011）采用基于COI基因條形碼檢驗(yàn)了美國(guó)谷物作物上的蚜蟲，發(fā)現(xiàn)該序列可成功鑒定8種全周期型蚜蟲和2種常見谷物蚜蟲。本研究以COI基因序列構(gòu)建麥蚜系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行樹，結(jié)果顯示，蚜科聚成獨(dú)立的一支，之后又形成3個(gè)分支，分屬于蚜科的3種麥蚜，麥二叉蚜、禾谷縊管蚜和麥長(zhǎng)管蚜個(gè)體各自聚類形成相對(duì)獨(dú)立的分支，其他物種也各自聚成獨(dú)立的分支，物種間界限明晰，分支節(jié)點(diǎn)支持率較高，說明麥蚜的COI基因序列分子鑒定與常規(guī)分類結(jié)果一致，表明該基因?qū)ξ錆h市常見麥蚜物種的鑒定可行。因此，可通過COI基因鑒定技術(shù)與傳統(tǒng)分類結(jié)合的方法，對(duì)田間麥蚜物種和其他麥類害蟲進(jìn)行有效鑒定。

4 結(jié)論

3種麥蚜的分子鑒定與應(yīng)用形態(tài)學(xué)方法分類的結(jié)果一致，表明采用COI基因序列可對(duì)武漢地區(qū)常見麥蚜進(jìn)行有效鑒定。

參考文獻(xiàn)：

杜新慧. 2014. 麥株蚜蟲密度對(duì)供鉀水平的響應(yīng)及其生理生化機(jī)制[D]. 鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué). [Du X H. 2014. The response of aphids density to potassium levels and its physiological and biochenmical mechanism of wheat[D]. Zhengzhou：Henan Agricultural University.]

韓松，張揚(yáng)，郭小奇，梁九進(jìn)，劉愛芝. 2018. 小麥播量和吡蟲啉用量對(duì)麥蚜防治效果及安全性的影響[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，52（5）：728-732. [Han S，Zhang Y，Guo X Q，Liang J J，Liu A Z. 2018. Effects and safety of sowing rate and imidacloprid dosage on control efficacy against wheat aphids[J]. Journal of Henan Agricultural University，52（5）：728-732.]

J. 薩姆布魯克，D. W. 拉塞爾. 2002. 分子克隆實(shí)驗(yàn)室指南[M]. 黃培堂譯. 第3版. 北京： 科學(xué)出版社： 463. [Sambrook J，Russell D W. 2002. Molecular cloning： A laboratory manual[M]. Translated by Huang P T. The 3rd Edition. Beijing： Science Press： 463.]

李宏德. 2016. 田間麥蚜和實(shí)驗(yàn)室麥蚜抗藥性毒力測(cè)定和生化測(cè)定的研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)，（2）： 33-39. [Li H D. 2016. Study on the virulence determination and biochemical determination of resistance to wheat aphid in field and laboratory[J]. Gansu Agriculture，（2）： 33-39.]

李素娟，劉愛芝，武予清，李世功，魯曉華，殷花娥. 2001. 小麥不同品種上麥蚜及其天敵的數(shù)量變動(dòng)[J]. 昆蟲知識(shí)，38（5）： 355-358. [Li S J，Liu A Z，Wu Y Q，Li S G，Lu X H，Ying H E. 2001. Population dynamics of wheat aphids and natural enemies in different wheat varieties[J]. Entomological Knowledge，38（5）： 355-358.]

劉艷莉，王艷芳，趙彥宏，柏新富，劉林德. 2018. 大麥黃矮病毒的生物信息學(xué)分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，49（9）： 1760-1767. [Liu Y L，Wang Y F，Zhao Y H，Bai X F，Liu L D. 2018. Bioinformatics analysis of Barley yellow dwarf virus[J]. Journal of Southern Agriculture，49（9）： 1760-1767.]

汪珍春，王小蘭，鄭毅勝，周伯春，姜立云. 2013. DNA條形碼快速鑒定廣州常見菊花蚜蟲[J]. 環(huán)境昆蟲學(xué)報(bào)，35（6）： 764-771. [Wang Z C，Wang X L，Zheng Y S，Zhou B C，Jiang L Y. 2013. Rapid identification of aphids on Chrysanthemum plants in Guangzhou based on DNA barco-ding[J]. Journal of Environmental Entomology，35（6）： 764-771.]

王曉軍，陶嶺梅，張青文. 2004. 麥長(zhǎng)管蚜和禾谷縊管蚜對(duì)吡蟲啉敏感性的比較研究[J]. 昆蟲知識(shí)，41（2）： 155-157. [Wang X J，Tao L M，Zhang Q W. 2004. Susceptibility of Macrosiphum avenae and Rhopalosiphum padi to imidacloprid[J]. Entomological Knowledge，41（2）：155-157.]

溫娟，陳睿，姜立云，喬格俠. 2013. 基于DNA條形碼對(duì)北京地區(qū)薔薇科花卉上蚜蟲的快速鑒定[J]. 應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào)，50（1）： 29-40. [Wen J，Chen R，Jiang L Y，Qiao G X. 2013. Rapid identification of aphids on flowering plants of Rosaceae in Beijing based on DNA barcoding[J]. Chinese Journal of Applied Entomology，50（1）： 29-40.]

楊子祥，陳曉鳴，馮穎，繆迎春. 2006. 蚜蟲基因組DNA提取方法的改進(jìn)[J]. 昆蟲知識(shí)，43（6）： 880-884. [Yang Z X，Chen X M，F(xiàn)eng Y，Miao Y C. 2006. Method improvement for extraction genomic DNA from aphids[J]. Chinese Bulletin of Entomology，43（6）： 880-884.]

張廣學(xué). 1999. 西北農(nóng)林蚜蟲志：昆蟲綱、同翅目、蚜蟲類[M]. 北京： 中國(guó)環(huán)境科學(xué)出版社： 1-8. [Zhang G X. 1999. Northwest agroforestry insect pest： Insecta，Homoptera，Aphididae[M]. Beijing： China Environmental Science Press： 1-8.]

Aliabadian M，Kaboli M，Niijn V，Vences M. 2009. Molecular identification of birds performance of distance-base DNA barcoding in three genes to delimit it parapatric species[J]. PLoS One，4（1）： e4119.

Bass C，Puinean A M，Zimmer C T，Denholm I，F(xiàn)ield L M，F(xiàn)oster S P，Gutbrod O，Nauen R，Slater R，Williamson M S. 2014. The evolution of insecticide resistance in the peach potato aphid，Myzus persicae[J]. Insect Biochemistry and Molecular Biology，51： 41-51.

Coeur d'acier A，Cruaud A，Artige E，Genson G，Clamens A L，Pierre E，Hudaverdian S，Simon J C，Jousselin E，Rasplus J Y. 2014. DNA barcoding and the associated PhylAphidB@se website for the identification of Euro-pean aphids（Insecta：Hemiptera：Aphididae）[J]. PLoS One，9（6）： e97620.

Duan X L，Peng X，Qiao X F，Chen M H. 2017. Life cycle and population genetics of bird cherry-oat aphids Rhopalosiphum padi in China： An important pest on wheat crops[J]. Journal of Pest Science，90（1）： 103-116.

Foottit R G，Maw H E L，Von Dohlen C D，Hebert P D N. 2008. Species identification of aphids（Insecta：Hemiptera：Aphididae） through DNA barcodes[J]. Molecular Ecology Resources，8： 1189-1201.

Hebert P D N，Cywinska A，Ball S L，deWaard J R. 2003a. Bio-logical identifications through DNA barcodes[J]. The Ro-yal Society Proceedings B，270： 313-321.

Hebert P D N，Ratnasingham S，De Waard J R. 2003b. Barcoding animal life： Cytochrome c oxidase subunit 1 divergences among closely related species[J]. Proceedings of the Royal Society B： Biological Sciences，270（S1）： S96-S99.

Hebert P D N，Stoeckle M Y，Zemlak T S，F(xiàn)rancis C M. 2004. Identification of birds through DNA barcodes[J]. PLoS Biology，2（10）： 1657.

Jermiin L S，Crozier R H. 1994. The cytochrome b region in the mitochondrial DNA of the ant Tetraponera rufoniger： Sequence divergence in Hymenoptera may be associated with nucleotide content[J]. Journal of Molecular Evolution，38（3）： 282-294.

Kumar S，Stecher G，Tamura K. 2016. MEGA7： Molecular evolutionary genetics analysis version 7.0 for bigger datasets[J]. Molecular Biologyand Evolution，33： 1870-1874.

Lee Y，Lee W，Lee S，Kim H. 2015. A cryptic species of Aphis gossypii（Hemiptera：Aphididae） complex revealed by combined morphological，and molecular data[J]. Bu-lletin of Entomological Research，105： 40-51.

Mackenzie T D B，Arju I，Poirier R，Singh M. 2018. A genetic survey of pyrethroid insecticide resistance in aphids in New Brunswick，Canada，with particular emphasis on aphids as vectors of potato virus Y[J]. Journal of Economic Entomology，111（3）： 1361-1368.

Meyer C P，Paulay G. 2005. DNA Barcoding： Error rates based on comprehensive sampling[J]. PLoS Biology，3（12）： 2229-2238.

Rebijith K B，Asokan R，Kumar N K，Krishna V，Chaitanya B N，Ramamurthy V V. 2013. DNA barcoding and elucidation of cryptic aphid species（Hemiptera： Aphididae） in India[J]. Bulletin of Entomological Research，103（5）： 601-610.

Shufran K A，Burd J D，Anstead J A，Lushai G. 2000. Mitochondrial DNA sequence divergence among greenbug （Homoptera：Aphididae） biotypes：Evidence for host-adapted races[J]. Insect Molecular Biology，9（2）： 179-184.

Shufran K A，Puterka G J. 2011. DNA barcoding to identify all life stages of holocyclic cereal aphids（Hemiptera： Aphididae） on wheat and other poaceae[J]. Annals of the Entomological Society of America，104（1）： 39-42.

Skarlinsky T L ，Rugman-Jones P ，F(xiàn)underburk J ，Stouthamer R，Ujueta C S. 2017. Adult identity crisis in Leucothrips （Thysanoptera：Thripidae） associated with the tropical ornamental plant Codiaeum variegatum（Euphorbiaceae）[J]. Florida Entomologist，100（3）： 509-514.

Syromyatnikov M Y，Golub V B，Kokina A V，Soboleva V A，Popov V N. 2017. DNA barcoding and morphological analysis for rapid identification of most economically important crop-infesting sunn pests belonging to Eurygaster Laporte，1833（Hemiptera，Scutelleridae）[J]. Zookeys，706： 51-71.

Thompson J D，Gibson T J，Plewniak F，Jeanmougin F，Higgins D G. 1997. The CLUSTAL-X windows interface：Flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools[J]. Nucleic Acids Research，25（24）： 4876-4882.

Xu Z H，Chen J L，Cheng D F，Liu Y，F(xiàn)rancis F. 2011. Gene-tic variation among the geographic population of the grain aphid，Sitobion avenae（Hemiptera： Aphididae） in China inferred from mitochondrial COI gene sequence[J]. Agricultural Sciences in China，10（7）： 1041-1048.

（責(zé)任編輯 麻小燕）