苓澤合劑對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清 IL-6、TNF-α含量的影響

趙用　劉佳　馬寶東　陳巖松　張宏　喬敏　甘雨

〔摘要〕 目的 觀察苓澤合劑對尿酸鈉誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的抗炎作用，并探討其作用機制。方法 將80只Wistar大鼠隨機分為空白組、模型組、芬必得組、苯溴馬隆組、痛風(fēng)定組及苓澤合劑低、中、高劑量組，每組10只。用尿酸鈉誘導(dǎo)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，測定血清中白細胞介素-6（interlenkin 6， IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）的含量。結(jié)果 與模型組比較，各給藥組血清中IL-6與TNF-α的含量均顯著降低（P<0.01） 。苓澤合劑中劑量組、高劑量組與低劑量組比較，血清中 IL-6、TNF-α的含量明顯下降（P<0.05）。結(jié)論 苓澤合劑可抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-6、TNF-α的表達，治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。

〔關(guān)鍵詞〕 苓澤合劑;痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎;IL-6;TNF-α。

〔中圖分類號〕R285.5;R684.3? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.01.007

Effect of Lingze Mixture on Serum Levels of IL-6 and TNF-α in Rats with Acute Gouty Arthritis

ZHAO Yong， LIU Jia， MA Baodong*， CHEN Yansong， ZHANG Hong， QIAO Min， GAN Yu

（Department of Rheumatology， The Second Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang， Liaoning 110034， China）

〔Abstract〕 Objective To explore the anti-inflammatory effect of Lingze Mixture on monosodium urate （MSU） crystal-induced gouty arthritis in rats and its mechanism of action. Methods Eighty Wistar rats were randomly divided into blank group， model group， fenbid group， benzbromarone group， Tongfengding group， and traditional Chinese medicine （TCM） Lingze Mixture groups （low， medium， and high doses）， with ten rats in each group. A rat model of gouty arthritis was established by MSU crystals. Then the serum levels of interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） were determined. Results Compared with the model group， levels of IL-6 and TNF-α in serum in each model group were significantly decreased （P<0.01）. Compared with the low-dose Lingze Mixture group， the medium-and high-dose Lingze Mixture groups had significantly reduced serum levels of IL-6 and TNF-α （P<0.05）. Conclusion Lingze Mixture can inhibit the expression of IL-6 and TNF-α in rats with acute gouty arthritis， thus achieving the aim of preventing and alleviating gouty arthritis.

〔Keywords〕 Lingze Mixture; gouty arthritis; interleukin-6; tumor necrosis factor-α

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是由于血尿酸升高而導(dǎo)致尿酸鹽（monosodium urate，MSU）在關(guān)節(jié)囊、滑囊、軟骨、骨質(zhì)和其他組織中形成微晶體沉淀，引起非特異性的炎性反應(yīng)[1]，MSU在關(guān)節(jié)周圍組織沉積，刺激局部組織細胞膜形成破裂，引起白細胞的活化和吞噬，產(chǎn)生大量炎性細胞，釋放白細胞介素-6（interlenkin 6， IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）等細胞因子，導(dǎo)致如局部血管擴張、白細胞集聚、血漿滲出、滲透性增加等一系列的連鎖炎癥反應(yīng)，局部組織易被溶解侵蝕，使痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者出現(xiàn)劇烈疼痛，局部紅腫發(fā)熱的癥狀[2-4]。本病在中醫(yī)學(xué)屬于“歷節(jié)病”“痹證”等范疇[5]，苓澤合劑為我院協(xié)定方，臨床用治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎十余年，由土茯苓、澤瀉、蒼術(shù)等9味中藥組成，有清熱消腫、利濕除痹、通絡(luò)止痛之功。本實驗采用MSU引起急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動物模型[6]，觀察苓澤合劑對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6和TNF-α含量的影響，以探討苓澤合劑對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎治療的部分作用機制。

1 材料與方法

1.1? 實驗動物

80只健康雄性Wistar大鼠，質(zhì)量（200±20）g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司購入，公司許可證號：SCXK（遼）2015-0001。

1.2? 實驗藥物

苓澤合劑（組成：土茯苓30 g，澤瀉30 g，川黃柏20 g，蒼術(shù)15 g，知母25 g，生姜10 g，當歸20 g，白芍15 g，紅花15 g），由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)制劑中心制備，生藥濃度4.3 g/mL;芬必得，由中美天津史克制藥有限公司生產(chǎn)，批號：16110441，規(guī)格：0.3 g/粒;苯溴馬隆片，Excella GmbH（德國，昆山龍燈瑞迪制藥有限公司分裝），批號：1604591，規(guī)格：50 mg/片;痛風(fēng)定膠囊，四川升和藥業(yè)股份有限公司，批號：1609104，規(guī)格：0.4 g/粒;尿酸鈉，美國Sigma公司，批號：1122B052，規(guī)格：10 mg/瓶。

1.3? 儀器與試劑

BS6005型電子天平（上海友聲衡器有限公司），BSZOOS型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司），RB-200型智能熱板儀（淮北正華生物儀器有限公司），UV1700紫外可見分光光度計（日本島津公司），Anke TDL-60C離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠），IL-6、TNF-α試劑盒（北京奇松生物科技有限公司）。

1.4? 造模方法

取尿酸鈉研磨成粉，過篩，用滅菌注射用水制成100 mg/mL尿酸鈉溶液。參考相關(guān)文獻[6]，在無菌條件下，模型組和各給藥組將配制好的尿酸鈉溶液0.1 mL用6號注射針注入大鼠右后足跖皮下。空白組大鼠給予同體積生理鹽水。

1.5? 給藥方法

按照“人與動物體表面積換算的等效劑量”換算方法計算大鼠給藥量，將80只大鼠按每組10只隨機分成空白組、模型組、芬必得組（0.144 g/kg）、苯溴馬隆組（18 mg/kg）、痛風(fēng)定組（0.86 g/kg）、苓澤合劑中劑量組（33.30 g/kg）、低劑量組（50%中劑量組藥量，即16.65 g/kg）、高劑量組（200%中劑量組藥量，即66.60 g/kg）。給藥組大鼠按上述劑量口服給予相應(yīng)藥物20 mL/kg，空白組和模型組給予同體積的蒸餾水，1次/d，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后30 min造模，24 h后取血檢測相應(yīng)檢查指標。

1.6? 指標檢測

造模后4 h眼眶取血2 mL，以4 000 r/min離心15 min，按試劑盒檢測步驟及方法，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）成批檢測大鼠血清中IL-6、TNF-α的含量。

1.7&nbsp; 統(tǒng)計學(xué)處理

運用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行實驗數(shù)據(jù)分析，計量資料用“x±s”表示，采用單因素方差分析比較多組樣本的差異，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

與空白組相比較，模型組血清IL-6、TNF-α含量均顯著升高（P<0.05），表明造模成功;與模型組相比較，各給藥組血清中IL-6、TNF-α含量均顯著降低（P<0.01）;與苓澤合劑低劑量組比較，苓澤合劑中、高劑量組血清中IL-6、TNF-α含量顯著降低（P<0.05）;苓澤合劑中劑量組和高劑量組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表1。

3 討論

現(xiàn)代研究認為，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的根本原因是高尿酸血證及其導(dǎo)致的關(guān)節(jié)局部MSU結(jié)晶的析出。在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生及發(fā)展過程中，作為炎癥趨化因子和激活因子的IL-6、TNF-α起重要作用。IL-6是多功能炎性細胞因子，是炎性介質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵成分，在炎癥反應(yīng)中起重要作用。IL-6不僅參與炎癥反應(yīng)，增加滑膜組織的炎癥細胞，而且直接導(dǎo)致炎癥，同時也通過促進其他炎癥介質(zhì)的釋放間接導(dǎo)致炎癥，并可趨化激活中性粒細胞。由此可見，IL-6既是炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)，更是調(diào)節(jié)炎癥的始動因素，在急慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病程中，都起著極為重要的作用，更有學(xué)者將 IL-6作為判斷痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎疾病活動性和嚴重程度的指標[7]。TNF-α主要由單核巨噬細胞和中性粒細胞分泌，為介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的核心物質(zhì)和前炎癥網(wǎng)鏈中的一級細胞因子。一般認為，中性粒細胞、內(nèi)皮細胞黏附是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的本質(zhì)，TNF-α可增加中性粒細胞的募集，上調(diào)內(nèi)皮細胞選擇素活性，使中性粒細胞和內(nèi)皮細胞表面的黏附分子結(jié)合，為促炎癥介質(zhì)，可對局部部位產(chǎn)生浸潤，導(dǎo)致炎性介質(zhì)釋放，引起關(guān)節(jié)局部如紅腫熱痛等炎癥反應(yīng)。TNF-α水平的變化既是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的機制，也可反映關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)的輕重，已被用于治療痛風(fēng)藥物療效評價[8-9]。由上述發(fā)病機制可見，IL-6、TNF-α在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的炎癥病情中發(fā)揮著重要的作用。因此，抑制兩者產(chǎn)生并阻斷其所介導(dǎo)和激發(fā)的炎癥過程，對緩解急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎病情有積極意義。

中醫(yī)學(xué)認為本病的病因或為飲食不節(jié)，嗜食肥甘厚味;或為脾腎虧虛，導(dǎo)致濕熱內(nèi)蘊，由外感風(fēng)寒或日久化瘀，致營衛(wèi)行澀，濕熱瘀阻，經(jīng)絡(luò)不通，痹阻經(jīng)絡(luò)[10]。治療應(yīng)以清熱消腫、利濕除痹、通絡(luò)止痛為主。苓澤合劑由土茯苓、澤瀉、知母、蒼術(shù)、川黃柏、當歸、紅花、生姜和白芍九味中藥組成。方中土茯苓、澤瀉清熱、消腫、利濕，為君藥，兩者均具有較強的抗炎作用，土茯苓鎮(zhèn)痛作用較強，澤瀉亦可利尿[11-12]。知母、蒼術(shù)、川黃柏清熱、利濕，為臣藥。三者均有減輕炎癥損傷的藥理作用，知母還可保護血管內(nèi)皮、抑制血管通透性、減輕水腫，蒼術(shù)有明確的抑制IL-6、TNF-α及IL-8、PGE2等炎性因子的作用，川黃柏還可保護腎臟、抑制免疫等[13-15]。當歸、紅花活血除痹、通絡(luò)止痛，為佐藥。兩者除減輕炎癥損傷及拮抗多種炎癥因子外，當歸還具有鎮(zhèn)痛等功效[16-17]。生姜、白芍一溫中化濕，一緩急止痛，為使藥，兩者均具抗炎等功效，白芍還有調(diào)和諸藥、鎮(zhèn)痛、抗自身免疫病等作用[18-19]。上述諸藥合用，共奏清熱消腫、利濕除痹、通絡(luò)止痛之功，其現(xiàn)代藥理學(xué)作用也部分揭示苓澤合劑在治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎過程中的基本作用機制。

近年來，我國高尿酸血癥及痛風(fēng)的患病率逐年增加。西醫(yī)目前用于治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物主要為秋水仙堿和非甾體類抗炎藥，其胃腸道不良反應(yīng)較多，常有肝腎損害，嚴重者可出現(xiàn)骨髓抑制。中藥湯劑苓澤合劑藥味組合簡單常見，有較高的安全性，且性價比適宜，治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎療效明確，值得臨床推廣。

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