5味山姜屬中藥不同極性部位對胃潰瘍寒證模型大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響

柳俊輝 丘海冰 謝鵬 蘇善美 李明芳 陳俊其 尹優(yōu) 秦華珍

摘 要 目的：探討高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智等5味山姜屬中藥不同極性部位對胃潰瘍寒證大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響。方法：取SD大鼠，均灌胃4 ℃知母水煎液、冰醋酸溶液復(fù)制胃潰瘍寒證模型，并于造模后隨機分為模型組、附子理中丸組（陽性對照，9.0 g/kg）、西咪替丁組（陽性對照，0.003 3 g/kg）以及5種中藥石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取部位低、高劑量組（以下簡稱“高石低/高”“大石低/高”“紅石低/高”“草石低/高”“益石低/高”“高乙低/高”“大乙低/高”“紅乙低/高”“草乙低/高”“益乙低/高”“高正低/高”“大正低/高”“紅正低/高”“草正低/高”“益正低/高”“高水低/高”“大水低/高”“紅水低/高”“草水低/高”“益水低/高”，劑量分別為0.064/0.256、0.032/0.128、0.008/0.032、0.075/0.3、0.1/0.4、0.064/0.256、0.108/0.432、0.16/0.64、0.064/0.25、0.125/0.5、0.056/0.224、0.108/0.432、0.08/0.32、0.2/0.8、0.3/1.2、0.14/0.56、0.032/0.128、0.028/0.112、0.05/0.2、0.087/0.348 g/kg，以萃取部位質(zhì)量計），每組10只;另設(shè)空白組（常溫水）。造模次日，空白組和模型組大鼠均灌胃等容常溫水，各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥液2 mL/100 g，q12 h，共給藥4次。末次給藥后，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測各組大鼠尿液中17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）和兒茶酚胺類（CAs）物質(zhì)[腎上腺素（A）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）]以及血清中促腎上腺皮質(zhì)素（ACTH）、多巴胺-β-羥化酶（D-β-H）的含量。結(jié)果：與空白組比較，模型組大鼠尿液中17-OHCS、A、NE、DA以及血清中ACTH、D-β-H含量均顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，不同給藥組大鼠尿液17-OHCS（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石低/高、大石高、紅石高、草石高、益石高組，5種藥材乙酸乙酯部位各劑量組，大正高、紅正高、草正高、益正高組，高水高、大水高、紅水高組）、A（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石高、大石高、紅石低/高、草石低/高、益石高組，5種藥材乙酸乙酯部位各劑量組，高正高、大正高、紅正低/高、草正高、益正高組，紅水高組）、NE（附子理中丸組、西咪替丁組，5種藥材石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位各劑量組，以及高水高、大水高、紅水高組）、DA[附子理中丸組、西咪替丁組，5種藥材石油醚部位各劑量組（除高石低外），乙酸乙酯部位各劑量組，以及高正高、大正高、紅正高、草正高、益正高組，紅水高組]含量和血清ACTH[附子理中丸組，5種藥材石油醚部位各劑量組（除高石低、大石低、草石低組外）、乙酸乙酯部位各劑量組（除大乙低、紅乙低組外）、紅正高組、大水高組]、D-β-H[附子理中丸組以及高石高、大石高、紅石低/高、益石高組，5種藥材乙酸乙酯部位各劑量組（除大乙低、紅乙低、益乙低組外），大正高、紅正高組、紅水高組]含量均顯著升高（P<0.05或P<0.01）;且大石高組17-OHCS、D-β-H含量，草石高組ACTH、D-β-H含量以及高石高、益石高組D-β-H含量均顯著低于紅石高組;高乙高、草乙高、益乙高組DA含量以及高乙高、紅乙高、草乙高、益乙高組D-β-H含量均顯著低于大乙高組，高乙高、草乙高組DA含量均顯著低于紅乙高組，高乙高、大乙高、草乙高、益乙高組ACTH含量均顯著高于紅乙高組;高正高、大正高、草正高、益正高組17-OHCS、DA、ACTH含量，大正高、草正高、益正高組A含量，高正高、草正高、益正高組D-β-H含量均顯著低于紅正高組;草水高、益水高組17-OHCS、D-β-H含量均顯著低于大水高組;草水高、益水高組17-OHCS、DA、D-β-H含量和高水高組DA、D-β-H含量均顯著低于紅水高組（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：5味山姜屬中藥的不同極性部位對胃潰瘍寒證模型大鼠具有不同程度的改善作用，其中紅豆蔻最佳，高良姜次之;上述中藥均可通過增加17-OHCS、CAs、D-β-H的含量來調(diào)節(jié)交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)的機能。

關(guān)鍵詞 山姜屬中藥;極性部位;胃潰瘍寒證;交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng);機能;大鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To investigate the effects of different polar parts of 5 kinds of Alpinia on the function of sympathetic-adrenal system in gastric ulcer model rats with cold syndrome， such as the root of Alpinia officinarum， the rhizome and fruit of Alpinia galangal， the seed of Alpinia katsumadai， and the fruit of Alpinia oxyphylla. METHODS： SD rats were given Anemarrhena asphodeloides decoction at 4 ℃ and Glacial acetic acid solution intragastrically to induce gastric ulcer model with cold syndrome; the model rats were randomly divided into model group， Fuzi lizhong pills group （positive control， 9.0 g/kg）， cimetidine group （positive control， 0.003 3 g/kg）， low-dose and high-dose groups of petroleum ether， ethyl acetate， n-butanol and water extraction parts from 5 medicinal materials （hereinafter referred to as “gaoshidi” “gaoshigao” “dashidi” “dashigao” “hongshidi” “hongshigao” “caoshidi” “caoshigao” “yishidi” “yishigao” “gaoyidi” “gaoyigao” “dayidi” “dayigao” “hongyidi” “hongyigao” “caoyidi” “caoyigao” “yiyidi” “yiyigao” “gaozhengdi” “gaozhenggao” “dazhengdi” “dazhenggao” “hongzhengdi” “hongzhenggao” “caozhengdi” “caozhenggao” “yizhengdi” “yizhenggao” “gaoshuidi” “gaoshuigao” “dashuidi” “dashuigao” “hongshuidi” “hongshuigao” “caoshuidi” “caoshuigao” “yishuidi” “yishuigao”， 0.064/0.256， 0.032/ 0.128， 0.008/0.032， 0.075/0.3， 0.1/0.4， 0.064/0.256， 0.108/0.432， 0.16/0.64， 0.064/0.25， 0.125/0.5， 0.056/0.224， 0.108/0.432， 0.08/0.32， 0.2/0.8， 0.3/1.2， 0.14/0.56， 0.032/0.128， 0.028/0.112， 0.05/0.2， 0.087/0.348 g/kg， by mass of extraction parts）， with 10 rats in each group; and the blank group （normal temperature water） was set up. Next day after modeling， blank group and model group were given constant volume of normal temperature water intragastrically; administration group was given relevant solution 2 mL/100 g intragastrically， q12 h， 4 times in total. After last medication， urine contents of 17-OHCS， CAs substances （A， NE， DA） and serum contents of ACTH and D-β-H were determined by ELISA. RESULTS： Compared with blank group， the contents of 17-OHCS， A， NE and DA in urine， the contents of ACTH and D-β-H in serum were decreased significantly in model group （P<0.01）. Compared with model group， the contents of 17-OHCS （Fuzi lizhong pills group， cimetidine group， gaoshidi， gaoshigao， dashigao， hongshigao， caoshigao and yishigao groups， ethyl acetate part groups of 5 medicinal materials， dazhenggao， hongzhenggao， caozhenggao and yizhenggao groups， gaoshuigao， dashuigao and hongshuigao groups）， A （Fuzi lizhong pills group， cimetidine group， gaoshigao， dashigao， hongshidi， hongshigao， caoshidi， caoshigao and yishigao groups， ethyl acetate part groups of 5 medicinal materials， gaozhenggao， dazhenggao， hongzhengdi， hongzhenggao， caozhenggao and yizhenggao groups， hongshuigao group）， NE （Fuzi lizhong pills group， cimetidine group， petroleum ether part， ethyl acetate part and n-butanol part groups of 5 medicinal materials， gaoshuigao， dashuigao and hongshuigao groups）， DA [Fuzi lizhong pills group， cimetidine group， petroleum ether part （except for gaoshidi group） and ethyl acetate part groups of 5 medicinal materials， gaozhenggao， dazhenggao， hongzhenggao， caozhenggao and yizhenggao groups， hongshuigao group] in urine， serum contents of ACTH [Fuzi lizhong pills group， petroleum ether part （except for gaoshidi， dashidi and caoshidi groups） and ethyl acetate part （except for dayidi and hongyidi groups） groups of 5 medicinal materials， hongzhenggao group， dashuigao group]， and D-β-H [Fuzi lizhong pills group， gaoshigao， dashigao， hongshidi， hongshigao and yishigao groups， ethyl acetate part groups of 5 medicinal materials （except for dayidi， hongyidi and yiyidi groups）， dazhenggao and hongzhenggao groups， hongshuigao group] were increased significantly （P<0.05 or P<0.01）. The contents of 17-OHCS and D-β-H in dashigao group， the contents of ACTH and D-β-H in caoshigao group and the contents of D-β-H in gaoshigao and yishigao groups were significantly lower than hongshigao group. The contents of DA in gaoyigao， caoyigao and yiyigao groups as well as the contents of D-β-H in gaoyigao， hongyigao， caoyigao and yiyigao groups were significantly lower than dayigao group; the contents of DA in gaoyigao and caoyigao groups were significantly lower than hongyigao group， the contents of ACTH in gaoyigao， dayigao， caoyigao and yiyigao groups were significantly higher than hongyigao group. The contents of 17-OHCS， DA and ACTH in gaozhenggao， dazhenggao， caozhenggao and yizhenggao groups， the contents of A in dazhenggao， caozhenggao and yizhenggao groups as well as the contents of D-β-H in gaozhenggao， caozhenggao and yizhenggao groups were significantly lower than hongzhenggao group. The contents of 17-OHCS and D-β-H in caoshuigao and yishuigao groups were significantly lower than dashuigao group. The contents of 17-OHCS， DA and D-β-H in caoshuigao and yishuigao groups as well as the contents of DA and D-β-H in gaoshuigao groups were significantly lower than hongshuigao group （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Different polar parts of 5 kinds of Alpinia can improve gastric ulcer model rats with cold syndrome to different extents; among them， the fruit of A. galangal is the best， followed by the root of A. officinarum. Above medicinal materials can regulate the function of sympathetic-adrenal system by increasing the contents of 17-OHCS， CAs and D-β-H.

KEYWORDS? ?Alpinia; Polar part; Gastric ulcer with cold syndrome; Sympathetic-adrenal system; Function; Rat

高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智均為姜科山姜屬（Alpinia）中藥，其中高良姜為高良姜（Alpinia officinarum Hance）的干燥根，大高良姜、紅豆蔻分別為大高良姜（Alpinia galangal Willd.）的干燥根莖和果實，草豆蔻為草豆蔻（Alpinia katsumadai Hayata）的干燥近成熟種子，益智為益智（Alpiniae oxyphylla Miq.）的干燥成熟果實。這5味中藥的植物親緣關(guān)系密切，皆收載于《中華本草》[1]，且高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智收載于2015年版《中國藥典》（一部）[2]。上述中藥均味辛、性溫（熱），具有散寒燥濕、消食止痛、止瀉止嘔等功效，臨床上廣泛用于治療脘腹冷痛、食積脹滿等癥[3]。本課題組前期研究顯示，高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智、建砂仁等山姜屬中藥所含揮發(fā)油均可上調(diào)胃實寒證模型大鼠胃組織中環(huán)腺苷酸（cAMP）的含量以及cAMP與環(huán)鳥苷酸（cGMP）含量的比值（cAMP/cGMP），并可降低磷酸二酯酶（PDE）的含量，表明其揮發(fā)油具有辛散溫通、溫中散寒之功效[4]。交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的減弱和增強分別是寒證和熱證形成的重要因素，溫?zé)崴幱刑岣呓桓猩窠?jīng)-腎上腺（皮質(zhì)、髓質(zhì)）系統(tǒng)機能活動的作用，而寒涼藥則與之相反[5]。本研究以藥用植物親緣關(guān)系為出發(fā)點，在建立實驗性胃潰瘍寒證大鼠模型的基礎(chǔ)上，初步探討了5味山姜屬中藥不同極性部位對大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響，以期為山姜屬中藥的進一步開發(fā)利用提供參考，為闡釋中藥藥性理論與功效的科學(xué)內(nèi)涵提供思路。

1 材料

1.1 儀器

Epoch型全自動酶標(biāo)儀（美國BioTek公司）;DNP- 9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）;HVE-50型自動高壓滅菌器（日本Hirayama公司）;PGL- 16型冷凍離心機（湖南賽特湘儀離心機儀器有限公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

知母、高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智飲片（批號分別為150601、160101、170912、160605、170801、170718）均購自南寧生源中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定學(xué)教研室田慧教授鑒定為真品。

附子理中丸（陽性對照，北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，批號：15010241，規(guī)格：每100粒重10 g）;西咪替丁片（陽性對照，廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批號：150802，規(guī)格：0.2 g）;17-羥皮質(zhì)類固醇（17-OHCS）、腎上腺素（A）、去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、促腎上腺皮質(zhì)素（ACTH）、多巴胺-β-羥化酶（D-β-H）試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號分別為RA20057、RA20337、RA20557、RA20050、RA20014、RA20218）;乙醇、乙酸乙酯等試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動物

SPF級SD大鼠，雄性，6～7周齡，體質(zhì)量180～220 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2013-0004。

2 方法

2.1 藥液的制備

2.1.1 造模藥液 稱取知母飲片適量，用10倍量（g/L，下同）水充分浸泡60 min，武火煮沸后轉(zhuǎn)文火煎煮1 h，濾過，殘渣用8倍量水煎煮40 min，濾過，合并兩次濾液，濃縮，即得質(zhì)量濃度為0.5 g/mL（以生藥量計）的知母水煎液，于4 ℃冰箱中保存，備用;臨用前，用4 ℃水稀釋至相應(yīng)劑量。取冰醋酸75 mL，用水稀釋至500 mL，得15%冰醋酸溶液，于4 ℃冰箱中保存，備用。

2.1.2 受試藥液 分別取高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智飲片適量，粉碎成粗粉，首先用10倍量95%乙醇回流提取2 h，濾過，收集濾液;殘渣用8倍量95%乙醇回流提取2 h，濾過，收集濾液;殘渣再依次用10、8、8倍量5%乙醇回流提取3次，每次2 h，濾過，收集濾液;合并上述濾液，減壓、低溫揮去乙醇，即得到各藥材浸膏[得率分別為16.94%、9.97%、12.74%、15.73%、12.39%（質(zhì)量百分比，下同）]。取上述浸膏，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次5 000 mL，合并相同萃取部位，減壓濃縮，即得各藥材不同極性萃取部位（即石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水）浸膏[得率分別為2.56%、2.54%、2.15%、4.75%（高良姜），1.58%、5.25%、3.41%、1.44%（大高良姜），0.27%、6.24%、3.16%、1.04%（紅豆蔻），2.99%、2.56%、8.18%、2.12%（草豆蔻），2.64%、3.12%、8.21%、2.13%（益智）]，于4 ℃冰箱中保存，備用。臨用前，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液稀釋至相應(yīng)劑量。

2.1.3 陽性對照藥液 取附子理中丸、西咪替丁片各適量，粉碎，用水溶解后，再用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液稀釋至相應(yīng)劑量，備用。

2.2 造模、分組與給藥

所有大鼠均適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機取10只作為空白組，灌胃等容常溫水;其余大鼠均于每日上午8點灌胃4 ℃知母水煎液（10.44 g/kg）、下午18點灌胃4 ℃ 15%冰醋酸溶液（1 mL），連續(xù)4 d，以復(fù)制胃潰瘍寒證大鼠模型。造模結(jié)束后，將其隨機分為模型組、附子理中丸組（陽性對照，9.0 g/kg，劑量根據(jù)臨床成人用藥劑量的上限換算而得）、西咪替丁組（陽性對照，0.003 3 g/kg，劑量根據(jù)臨床成人用藥劑量的上限換算而得）以及高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取部位低、高劑量組[以下簡稱“高石低/高”“大石低/高”“紅石低/高”“草石低/高”“益石低/高”“高乙低/高”“大乙低/高”“紅乙低/高”“草乙低/高”“益乙低/高”“高正低/高”“大正低/高”“紅正低/高”“草正低/高”“益正低/高”“高水低/高”“大水低/高”“紅水低/高”“草水低/高”“益水低/高”，劑量分別為0.064/0.256、0.032/0.128、0.008/0.032、0.075/0.3、0.1/0.4、0.064/0.256、0.108/0.432、0.16/0.64、0.064/0.25、0.125/0.5、0.056/0.224、0.108/0.432、0.08/0.32、0.2/0.8、0.3/1.2、0.14/0.56、0.032/0.128、0.028/0.112、0.05/0.2、0.087/0.348 g/kg，以萃取部位質(zhì)量計;劑量根據(jù)《中華本草》[1]和2015年版《中國藥典》（一部）[2]規(guī)定的成人用藥劑量的上限并結(jié)合前期預(yù)實驗結(jié)果換算而得]，每組10只。造模次日，空白組和模型組大鼠均灌胃等容常溫水，各給藥組大鼠灌胃相應(yīng)藥液，給藥體積均為2 mL/100 g，每12 h給藥1次，共給藥4次[6-7]。

2.3 樣本采集及指標(biāo)檢測

末次給藥后，各組大鼠均禁食、不禁水12 h，收集其24 h尿液，以3 000 r/min離心15 min，取上清液，作為備檢尿樣。各組大鼠均腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）進行麻醉，于腹主動脈取血，于4 ℃下以3 000 r/min離心10 min，分離血清，作為備檢血樣。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）以全自動酶標(biāo)儀檢測各組大鼠尿液中17-OHCS以及兒茶酚胺類（CAs）物質(zhì)（A、NE、DA）的含量，同法檢測各組大鼠血清中ACTH、D-β-H的含量。嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書操作。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 24.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，采用Kolmogorov-Smimov檢驗進行正態(tài)性分析，符合正態(tài)分布的資料采用LSD檢驗，不符合正態(tài)分布的資料采用Dunnett’s T3檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 5味山姜屬中藥石油醚部位對胃潰瘍寒證模型大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響

與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與模型組比較，不同給藥組大鼠尿液17-OHCS（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石低/高、大石高、紅石高、草石高、益石高組）、A（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石高、大石高、紅石低/高、草石低/高、益石高組）、NE（各給藥組）、DA（除高石低組外的其余各給藥組）以及血清ACTH（附子理中丸組以及高石高、大石高、紅石低/高、草石高、益石低/高組）、D-β-H（附子理中丸組以及高石高、大石高、紅石低/高、益石高組）含量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;且大石高組17-OHCS、D-β-H含量，草石高組ACTH、D-β-H含量以及高石高、益石高組D-β-H含量均顯著低于紅石高組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），詳見表1。

3.2 5味山姜屬中藥乙酸乙酯部位對胃潰瘍寒證模型大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響

與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與模型組比較，不同給藥組大鼠尿液17-OHCS（各給藥組）、A（各給藥組）、NE（各給藥組）、DA（各給藥組）、ACTH（除西咪替丁、大乙低、紅乙低組外的其余各給藥組）以及血清D-β-H（除西咪替丁、大乙低、紅乙低、益乙低組外的其余各給藥組），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;且高乙高、草乙高、益乙高組DA含量以及高乙高、紅乙高、草乙高、益乙高組D-β-H含量均顯著低于大乙高組，高乙高、草乙高組DA含量均顯著低于紅乙高組，高乙高、大乙高、草乙高、益乙高組ACTH含量均顯著高于紅乙高組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01），詳見表2。

3.3 5味山姜屬中藥正丁醇部位對胃潰瘍寒證模型大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響

與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與模型組比較，不同給藥組大鼠尿液17-OHCS（附子理中丸、西咪替丁組以及大正高、紅正高、草正高、益正高組）、A（附子理中丸、西咪替丁組以及高正高、大正高、紅正低/高、草正高、益正高組）、NE（各給藥組）、DA（附子理中丸、西咪替丁組以及高正高、大正高、紅正高、草正高、益正高組）以及血清ACTH（附子理中丸組以及紅正高組）、D-β-H（附子理中丸組以及大正高、紅正高組）含量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;且高正高、大正高、草正高、益正高組17-OHCS、DA、ACTH含量，大正高、草正高、益正高組A含量以及高正高、草正高、益正高組D-β-H含量均顯著低于紅正高組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），詳見表3。

3.4 5味山姜屬中藥水部位對胃潰瘍寒證大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的影響

與空白組比較，模型組大鼠尿液17-OHCS、A、NE、DA以及血清ACTH、D-β-H含量均顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與模型組比較，不同給藥組大鼠尿液17-OHCS（附子理中丸、西咪替丁組以及高水高、大水高、紅水高組）、A（附子理中丸、西咪替丁組以及紅水高組）、NE（附子理中丸、西咪替丁組以及高水高、大水高、紅水高組）、DA（附子理中丸、西咪替丁組以及紅水高組）以及血清ACTH（附子理中丸組以及大水高組）、D-β-H（附子理中丸組以及紅水高組）含量均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）;且草水高、益水高組17-OHCS、D-β-H含量均顯著低于大水高組;草水高、益水高組17-OHCS、DA、D-β-H含量和高水高組DA、D-β-H含量均顯著低于紅水高組（P<0.05或P<0.01），詳見表4。

4 討論

山姜屬為姜科一大屬，全世界約有植物250種，主要分布于亞洲熱帶地區(qū)，我國有46種，廣西是主產(chǎn)地之一[3]。該屬植物藥用歷史悠久，是具有重要臨床應(yīng)用價值的常用中藥，也是廣西大宗特產(chǎn)藥材。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，高良姜、大高良姜、山姜、艷山姜、益智、紅豆蔻、草豆蔻、小草蔻、建砂仁、箭桿風(fēng)等山姜屬中藥均含有γ-杜松烯、γ-萜品烯、芳樟醇、莰烯、石竹素、4-萜烯醇、1，1，4，8-四甲基-4，7，10-環(huán)十一三烯等揮發(fā)性成分，并初步推測上述成分可能也是上述中藥具辛香氣味的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[8]。同時藥理研究結(jié)果顯示，高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智等5味山姜屬中藥石油醚及乙酸乙酯部位（高劑量）均可通過提高大鼠胃組織中腺苷環(huán)化酶（AC）、cAMP含量以及cAMP/cGMP，降低PDE含量等途徑來發(fā)揮對胃潰瘍寒證模型大鼠的治療作用[9]。本研究在藥用植物親緣關(guān)系的基礎(chǔ)上，以胃潰瘍寒證模型大鼠為對象，以附子理中丸、西咪替?。ㄎ笣兒C為胃實寒證，臨床上常以附子理中丸治療胃寒證，以西咪替丁等治療胃潰瘍）為陽性對照，初步考察了上述5味中藥通過調(diào)節(jié)交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能對模型大鼠的改善作用。

據(jù)報道，建立胃潰瘍寒證模型后，大鼠中樞部位特別是丘腦下部興奮性減弱，導(dǎo)致交感神經(jīng)緊張性低下或副交感神經(jīng)偏亢，最終使得腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)功能以及能量代謝受到抑制等，17-OHCS、CAs、ACTH、D-β-H等指標(biāo)與此過程密切相關(guān)[10]。其中，17-OHCS含量能夠反映機體交感神經(jīng)腎上腺皮質(zhì)功能，當(dāng)該功能低下、能量代謝減弱時，大鼠體內(nèi)17-OHCS的含量明顯下降[11]。同時有研究指出，給大鼠灌胃寒涼藥可使其腎上腺功能下降，CAs排出量減少，D-β-H含量降低，而溫?zé)崴幍淖饔脛t剛好相反，其機制可能與寒涼藥能抑制交感神經(jīng)中樞而減慢心率，并抑制腎上腺D-β-H分泌，從而減少CAs的合成和釋放，最終降低交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能有關(guān)[12]。由此可見，CAs的排出量及D-β-H含量也是反映交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能強弱的關(guān)鍵指標(biāo)[13]。CAs在人體內(nèi)由交感神經(jīng)刺激腎上腺髓質(zhì)和交感神經(jīng)元嗜鉻細胞分泌，包括A、NE、DA等3種物質(zhì);其含量越高，則表明CAs類物質(zhì)對交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的調(diào)節(jié)作用越強[14]。ACTH是一種能夠刺激腎上腺皮質(zhì)發(fā)育及機能作用的激素，其含量對刺激腎上腺分泌激素和維持腎上腺機能有顯著影響[5]。D-β-H主要存在于腎上腺髓質(zhì)嗜鉻顆粒和交感神經(jīng)末鞘的貯存囊泡內(nèi)，是CAs重要的合成酶，其能夠促使DA β位的羥化反應(yīng)，從而形成NE，刺激腎上腺髓質(zhì)和交感神經(jīng)元嗜鉻細胞分泌CAs類物質(zhì)，進而調(diào)節(jié)交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能，提示ACTH和D-β-H含量的變化是直接改變或者通過中樞改變交感神經(jīng)系統(tǒng)機能的重要因素[15]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，灌胃冰知母水煎液和冰醋酸溶液后，模型組大鼠尿液中17-OHCS、A、NE、DA的含量以及血清中ACTH、D-β-H的含量均較空白組顯著降低。這提示大鼠中樞抑制能力有所增強，交感神經(jīng)中樞活動以及腎上腺D-β-H酶活性受到抑制，CAs的合成和釋放減少，機體交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能下降，胃潰瘍寒證模型復(fù)制成功。與模型組比較，不同給藥組大鼠尿液17-OHCS（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石低/高、大石高、紅石高、草石高、益石高組，5種藥材乙酸乙酯部位各劑量組，大正高、紅正高、草正高、益正高組，高水高、大水高、紅水高組）、A（附子理中丸組、西咪替丁組以及高石高、大石高、紅石低/高、草石低/高、益石高組，5種藥材乙酸乙酯部位各劑量組，高正高、大正高、紅正低/高、草正高、益正高組，紅水高組）、NE（附子理中丸組、西咪替丁組以及5種藥材石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位各劑量組，高水高、大水高、紅水高組）、DA[附子理中丸組、西咪替丁組以及5種藥材石油醚部位各劑量組（除高石低組外），乙酸乙酯部位各劑量組，高正高、大正高、紅正高、草正高、益正高組，紅水高組]含量和血清ACTH[附子理中丸組以及5種藥材石油醚部位各劑量組（除高石低、大石低、草石低組外）、乙酸乙酯部位各劑量組（除大乙低、紅乙低組外）、紅正高組、大水高組]、D-β-H[附子理中丸組以及高石高、大石高、紅石低/高、益石高組，5種藥材乙酸乙酯部位各劑量組（除大乙低、紅乙低、益乙低組外），大正高、紅正高組，紅水高組]含量均顯著升高，表明5味山姜屬中藥的不同極性部位對模型大鼠交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能均有不同程度的影響。這提示上述中藥發(fā)揮溫?zé)崴幮约皽刂猩⒑πУ目茖W(xué)內(nèi)涵為：通過調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)使得交感神經(jīng)中樞活動增強，腎上腺D-β-H酶活性增強，17-OHCS、CAs合成及釋放增多，從而提高交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能。

鑒于不同極性部位高劑量組作用較明顯，故本研究對各藥材的高劑量組進行了組間比較。結(jié)果顯示，大石高組17- OHCS、D-β-H含量，草石高組ACTH、D-β-H含量以及高石高、益石高組D-β-H含量均顯著低于紅石高組;高乙高、草乙高、益乙高組DA含量以及高乙高、紅乙高、草乙高、益乙高組D-β-H含量均顯著低于大乙高組，高乙高、草乙高組DA含量均顯著低于紅乙高組，高乙高、大乙高、草乙高、益乙高組ACTH含量均顯著高于紅乙高組;高正高、大正高、草正高、益正高組17-OHCS、DA、ACTH含量，大正高、草正高、益正高組A含量，高正高、草正高、益正高組D-β-H含量均顯著低于紅正高組;草水高、益水高組17-OHCS、D-β-H含量均顯著低于大水高組;草水高、益水高組17-OHCS、DA、D-β-H含量和高水高組DA、D-β-H含量均顯著低于紅水高組。這提示在5味藥材的石油醚部位高劑量中，紅豆蔻增強D-β-H含量的能力以及調(diào)節(jié)交感神經(jīng)-腎上腺機能的作用優(yōu)于其余4味中藥。在乙酸乙酯部位高劑量組中，大高良姜升高DA含量的作用優(yōu)于高良姜、草豆蔻和益智，增強D-β-H含量的作用優(yōu)于其余4味中藥;紅豆蔻升高DA含量的作用優(yōu)于高良姜和草豆蔻，但其升高ACTH含量的作用則相對弱。在正丁醇部位高劑量組中，紅豆蔻升高17-OHCS、DA、ACTH含量的作用優(yōu)于其余4味山姜屬中藥，且在A、D-β-H含量上分別優(yōu)于大高良姜、草豆蔻、益智和高良姜、草豆蔻、益智。在水部位高劑量組中，大高良姜升高17-OHCS、D-β-H含量以及紅豆蔻升高17-OHCS、DA、D-β-H含量的作用均優(yōu)于草豆蔻和益智，且紅豆蔻升高DA、D-β-H含量的作用優(yōu)于高良姜。這提示上述具有親緣關(guān)系的5味山姜屬中藥對交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)機能的調(diào)節(jié)作用存在一定的差異，其中紅豆蔻的作用相對最好，大高良姜次之。

綜上所述，5味山姜屬中藥的不同極性部位對胃潰瘍寒證模型大鼠具有一定的改善作用，可通過增加17-OHCS、CAs、D-β-H的含量來調(diào)節(jié)交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)的機能。同時，上述中藥的調(diào)節(jié)作用存在一定差異，以紅豆蔻最佳、大高良姜次之，但其具體物質(zhì)基礎(chǔ)及植物親緣、藥用部位、活性成分、藥效間的相關(guān)性尚有待后續(xù)研究進一步闡明。

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（收稿日期：2018-12-12 修回日期：2019-06-29）

（編輯：張元媛）