高效液相色譜法同時(shí)測定防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿含量

楊帆 吳夢麗 高慧 閆國躍 何秋梅 謝陽姣

摘要：【目的】建立同時(shí)測定防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿含量的高效液相色譜方法（HPLC），為防己藥材質(zhì)量檢測提供有效方法。【方法】用2%鹽酸甲醇常溫超聲30 min提取粉防己堿和防己諾林堿，采用HPLC對江西、安徽、浙江、湖南、福建和廣東等不同產(chǎn)地防己藥材進(jìn)行測定。色譜條件：色譜柱Agilent ZORBAX Extend-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.08%三乙胺（75∶25），等度洗脫，進(jìn)樣量8 μL，流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃，檢測波長282 nm，運(yùn)行時(shí)間20 min?！窘Y(jié)果】粉防己堿和防己諾林堿的線性范圍分別為0～6000 μg/mL（R2=1.0000）和0～3000 μg/mL（R2=0.9999），平均回收率分別為104.99%和90.13%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.75%和2.70%;粉防己堿和防己諾林堿的穩(wěn)定性RSD分別為1.06%和0.62%、精密度RSD分別為1.57%和0.06%、重復(fù)性RSD分別為1.04%和1.45%。不同產(chǎn)地防己藥材中粉防己堿的含量變化范圍為0.836%～5.999%，最高的是江西金橋鄉(xiāng)株系3，最低的是浙江蘇莊株系4;防己諾林堿的含量變化范圍為0.507%～2.993%，最高的是廣東天子地株系4，最低的是湖南貫塘株系1，RSD均小于5%。【結(jié)論】建立的HPLC測定方法簡單、穩(wěn)定性好、精密度高且運(yùn)行時(shí)間短，可同時(shí)測定防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿含量，可考慮作為防己藥材質(zhì)量檢測的方法。

關(guān)鍵詞： 防己;粉防己堿;防己諾林堿;含量;高效液相色譜法（HPLC）

中圖分類號： S567.9? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）11-2545-07

Simultaneous determination of tetrandrine and fangchindine

contents in Stephania tetradra S. Moore by high efficiency

liquid chromatography

YANG Fan， WU Meng-li， GAO Hui， YAN Guo-yue， HE Qiu-mei， XIE Yang-jiao*

（Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning? 530001， China）

Abstract：【Objective】A high efficiency liquid chromatography（HPLC） method for the simultaneous determination of tetrandrine and fangchinoline in Stephania tetrandra S. Moore was established to provide effective method to detect the quality of S. tetrandra. 【Method】Tetrandrine and fangchinoline were extracted by 2% hydrochloric acid and methanol at room temperature and ultrasonic for 30 min. S. tetrandra produced from Jiangxi， Anhui， Zhejiang， Hunan， Fujian and Guangdong were determined by HPLC. Chromatographic conditions：column Agilent Zorbax Extend-c18（4.6 mm×250 mm， 5 μm）， the mobile phase acetonitrile-0.08% triethylamine water（75∶25）， isoelution， injection volume of 8 μL， flow rate of 1.0 mL/min， column temperature of 25 ℃， detection wavelength of 282 nm， operation time of 20 min. 【Result】The linear ranges of tetrandrine and tetrandrine were 0-6000 μg/mL（R2=1.0000） and 0-3000 μg/mL（R2=0.9999）， the average recoveries were 104.99% and 90.13%， the relative standard deviations（RSD） were 1.75% and 2.70%， the stability RSD of tetrandrine and tetrandrine were 1.06% and 0.62%， the precision RSD were 1.57% and 0.06%， the repeatability RSD were respectively 1.04% and 1.45%. The content of tetrandrine in different habitats ranged from 0.836% to 5.999%， the highest was strain 3 in Jinqiao， Jiangxi， the lowest was Strain 4 in Suzhuang， Zhejiang. The content of fangchinoline in different habitats ranged from 0.507% to 2.993%， and the highest was strain 4 in Tianzidi， Guangdong， the lowest was Strain 1 in Guantang， Hunan， with RSD less than 5%. 【Conclusion】The established HPLC method is simple， stable， precise and short in operation. It can be used for the simultaneous determination of tetrandrine and tetrandrine in Radix stephaniae， and can be considered as a method for the quality detection of S. tetradra.

Key words： Stephania tetradra S. Moore; tetrandrine; fangchinoline; content; high performance liquid chromatography（HPLC）

0 引言

【研究意義】防己為防己科植物粉防己（Stephania tetrandra S. Moore）的干燥根，具有利水消腫、祛風(fēng)止痛的功效（國家藥典委員會，2015）。粉防己堿和防己諾林堿為防己藥材的主要化學(xué)成分，其含量是衡量防己藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)。研究表明，粉防己堿具有抗塵肺、抗癌及抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種藥理作用（劉暢和趙寶祥，2015;宋占帥等，2017;張艷輝等，2017;陳寧姿和樓紅侃，2018;王宏等，2018）;防己諾林堿在抗腫瘤（Ncube et al.，2012;Shi et al.，2017;Wang et al.，2017）、抗癌（于有江等，2017）和抑制增生性瘢痕（宋英莉等，2018）等方面有顯著的生物活性。若能建立高效、簡便測定粉防己堿和防己諾林堿含量的方法，可為防己藥材質(zhì)量檢測提供有效手段。【前人研究進(jìn)展】2015版《中國藥典》（國家藥典委員會，2015）已記載防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿含量的測定方法，但該法流動相需添加十二烷基磺酸鈉，起泡多，消除泡沫時(shí)間長，且溶解溫度要求嚴(yán)格，操作復(fù)雜。流動相混合可有效減少消除泡沫的時(shí)間，但混合流動相適合單通道進(jìn)樣，對于新的多通道進(jìn)樣液相色譜儀，該操作方法已不具優(yōu)勢。至今，已有不少研究者對流動相進(jìn)行了改進(jìn)。和健等（2006）采用甲醇—乙腈-0.003 mol/L磷酸二氫鉀—二乙胺（55∶25∶20∶0.06）為流動相、楊學(xué)猛等（2007）采用甲醇—乙腈—水—二乙胺（60∶20∶20∶0.08）為流動相、白雪媛等（2017）采用甲醇—乙腈—水—二乙胺（52∶20∶28∶0.08）為流動相分別對迪可顆粒、舒肝飲丸和利心丸中粉防己堿和防己諾林堿含量進(jìn)行測定，在這些色譜條件下樣品中防己諾林堿和粉防己堿均分離效果良好。劉永剛等（2010）采用甲醇—乙腈—水—三乙胺（55∶25∶20∶0.05）為流動相測定防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿含量，結(jié)果表明該方法可有效測定這兩種成分含量。以上幾種改進(jìn)的流動相，相對于藥典法易配制，但流動相組分較多，仍具有改進(jìn)空間。饒毅等（2006）測定防己藥材中防己諾林堿和粉防己堿用的流動相為乙腈-0.2%磷酸（63∶37），流動相組分相對減少，但需用三乙胺調(diào)節(jié)pH，操作復(fù)雜且費(fèi)時(shí)，對于大批量試驗(yàn)，流動相pH的差異會成為新的誤差來源。蔡瑾瑾和韓海（2017）采用乙腈-0.2%三乙胺梯度洗脫測定復(fù)方防己注射液中延胡索乙素、粉防己堿和防己諾林堿含量，結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確，且流動相較簡單?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前，關(guān)于防己的研究主要集中在藥理藥效方面（朱祖成，2013;邢志博等，2016），雖然粉防己堿和防己諾林堿含量測定方法已有一定研究，但采用的流動相均較復(fù)雜（于士婷等，2017;關(guān)皎等，2018）。本研究基于2015版《中國藥典》方法存在的缺陷及相關(guān)文獻(xiàn)（朱鶴云等，2017）報(bào)道其流動相的復(fù)雜性，擬研究獲得流動相組分較少、配制簡單，同時(shí)測定粉防己堿和防己諾林堿含量的高效液相色譜法（HPLC）?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用超生法提取防己中粉防己堿和防己諾林堿化學(xué)成分，利用HPLC對該成分進(jìn)行含量測定，通過減少流動相數(shù)量，簡化配置程序，以期解決流動相數(shù)量多、配置程序復(fù)雜的問題，為防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿含量的同時(shí)測定提供高效、低耗、簡便的方法。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料于2017年10月采自防己分布區(qū)江西、安徽、浙江、福建、湖南和廣東等地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)瑤醫(yī)藥學(xué)院謝陽姣研究員鑒定防己藥材為正品。粉防己堿對照品（批號110711-201609，含量99.2%）購自中國食品藥品檢定研究院，防己諾林堿對照品（批號170301-005，含量98%）購自北京中興嘉仁生物技術(shù)有限公司，乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。主要儀器設(shè)備：Agilent 1260 Inifinal II高效液相色譜儀（包括G7111A四元泵、G7116A柱溫箱、G7129A自動進(jìn)樣器、G7114AVWD檢測器和Control panel化學(xué)工作站）（安捷倫科技有限公司）;Sartorious BP211D十萬分之一電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司];超聲波清潔機(jī)（寧波芝新科技有限責(zé)任公司）。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 溶液配制

1. 2. 1. 1 混合對照品溶液配制 取粉防己堿對照品和防己諾林堿對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每l mL含粉防己堿0.3 mg、防己諾林堿0.15 mg的混合溶液。

1. 2. 1. 2 供試品溶液配制 取防己藥材粉末約0.5 g，精密稱定，按2015版《中國藥典》中供試品溶液的制備方法，精密加入2%鹽酸甲醇溶液25 mL，稱定重量，常溫超聲30 min，取出，放冷，再稱定重量，用2%鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液5 mL置于10 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

1. 2. 2 色譜條件 色譜柱Agilent ZORBAX Extend-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.08%三乙胺（75∶25），等度洗脫，流速1.0 mL/min，紫外檢測282 nm，柱溫25 ℃，進(jìn)樣量8 μL，運(yùn)行時(shí)間20 min。上述色譜條件的色譜圖見圖1。

1. 3 方法學(xué)考察

隨機(jī)采用量多的江西省浮梁縣勒功鄉(xiāng)暗屋里2號藥材進(jìn)行試驗(yàn)。

1. 3. 1 線性關(guān)系考察 取混合對照品溶液，設(shè)儀器自動進(jìn)樣0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20 μL，以對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（x）、峰面積為縱坐標(biāo)（y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程，規(guī)定R2大于0.9999的濃度范圍為線性范圍。

1. 3. 2 精密度考察 取供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿的峰面積分別計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），檢驗(yàn)HPLC的精密度。

1. 3. 3 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12和24 h進(jìn)樣測定，根據(jù)粉防己堿和防己諾林堿的峰面積分別計(jì)算RSD，檢驗(yàn)HPLC的穩(wěn)定性。

1. 3. 4 重復(fù)性考察 制備供試品溶液6份，進(jìn)樣測定，以樣品峰面積的平均值計(jì)算RSD，檢驗(yàn)HPLC的重復(fù)性。

1. 3. 5 加樣回收率考察 精密稱取已測含量的防己樣品6份，每份約0.5 g，按樣品所含粉防己堿和防己諾林堿質(zhì)量1∶1的比例加入對照品，精密加入2%鹽酸甲醇50 mL，再按1.2.1.2的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。

1. 4 單因素考察

1. 4. 1 提取溶劑考察 分別采用2%鹽酸甲醇、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇和70%乙醇為提取溶劑，每種提取溶劑設(shè)3個(gè)重復(fù)，按1.2.2色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，篩選最佳提取溶劑。

1. 4. 2 提取方法考察 采用1.2.1.2供試品溶液提取方法，對比分析加熱回流30 min和常溫超聲30 min，考察較佳提取方法。

1. 5 樣品含量測定

取江西金橋鄉(xiāng)、安徽老家譚、浙江蘇莊鎮(zhèn)、福建洋坊、湖南貫塘和廣東天子地6個(gè)產(chǎn)地各3個(gè)不同株系的藥材，按1.2.1.2的方法制備供試品溶液，采用1.2.2色譜條件測定，記錄色譜峰面積，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各樣品含量。

1. 6 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2019和SPSS 13.0對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 方法學(xué)考察結(jié)果

2. 1. 1 線性關(guān)系考察結(jié)果 由圖2可知，防己諾林堿的回歸方程為y=88.70x-9.020（R2=0.9999），粉防己堿的回歸方程為y=186.50x+5.112（R2=1.0000），表明防己諾林堿和粉防己堿分別在0～3000 μg/mL和0～6000 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2. 1. 2 精密度考察結(jié)果 結(jié)果顯示，防己諾林堿峰面積RSD為0.06%，粉防己堿峰面積RSD為1.57%，均小于2.00%，表明建立的HPLC精密度良好。

2. 1. 3 穩(wěn)定性考察結(jié)果 結(jié)果顯示，防己諾林堿峰面積RSD為0.62%，粉防己堿峰面積RSD為1.06%，均小于2.00%，表明該供試品溶液在24 h內(nèi)化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。

2. 1. 4 重復(fù)性考察結(jié)果 結(jié)果顯示，防己諾林堿的RSD為1.45%，粉防己堿的RSD為1.04%，均小于2.00%，表明建立的HPLC重復(fù)性良好。

2. 1. 5 加樣回收率考察結(jié)果 由表1可知，防己諾林堿回收率為90.13%，粉防己堿回收率為104.99%，對應(yīng)的RSD分別為2.70%和1.75%，均小于3.00%。表明建立的HPLC回收率試驗(yàn)符合要求。

2. 2 單因素考察結(jié)果

2. 2. 1 提取溶劑的選擇 對各提取溶劑峰面積進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果見表2。由表2可知，2%鹽酸甲醇作為提取溶劑時(shí)，防己諾林堿和粉防己堿的峰面積均極顯著大于其他溶劑（P<0.01，下同），其次為70%乙醇和70%甲醇，兩者間無顯著差異（P>0.05），但均極顯著大于50%甲醇和100%甲醇的峰面積。粉防己堿各提取溶劑的分離度均較好;防己諾林堿的70%和50%甲醇不能有效分離，100%甲醇的分離度低于1.50，2%鹽酸甲醇和70%乙醇具有有效的分離度。綜合峰面積和分離度，選擇2%鹽酸甲醇作為最終提取溶劑。

2. 2. 2 提取方法的選擇 對常溫超聲提取和加熱回流提取兩種方法的峰面積進(jìn)行獨(dú)立樣本T 檢驗(yàn)，結(jié)果見表3。由表3可知，兩種提取方法的防己諾林堿含量差異未達(dá)95%的顯著水平（Sig.=0.08），但粉防己堿的常溫超聲提取法顯著高于加熱回流法（Sig.=0.03）。根據(jù)實(shí)際操作提取用時(shí)少，并考慮超聲提取方法簡單、方便、經(jīng)濟(jì)，且可大批量操作，確定超聲提取法為粉防己堿和防己諾林堿含量測定的前處理方法。

2. 3 含量測定結(jié)果

由表4可知，6個(gè)產(chǎn)地不同株系測定結(jié)果RSD均較小，表明建立的HPLC普遍適用于不同產(chǎn)地、不同防己藥材的粉防己堿和防己諾林堿含量測定。6個(gè)不同產(chǎn)地防己藥材的兩種有效成分含量均符合藥典規(guī)定的總含量不少于1.6%的最低要求，且不同產(chǎn)地和同一產(chǎn)地不同株系間防己藥材含量存在差異。不同產(chǎn)地中防己諾林堿的含量變化范圍為0.507%～2.993%，以廣東天子地株系4的含量最高，湖南貫塘株系1的含量最低;粉防己堿的含量變化范圍為0.836%～5.999%，最高的是江西金橋鄉(xiāng)株系3，最低的是浙江蘇莊株系4，其中，廣東和江西防己藥材的兩種成分含量普遍高于湖南、福建、浙江和安徽。

3 討論

3. 1 色譜柱的選擇

采用Agilent ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）色譜柱（pH適用范圍2～8）進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，適用流動相條件為乙腈-0.03%三乙胺（75∶25），pH接近7，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 ?L，柱溫25 ℃，波長282 nm，運(yùn)行時(shí)間25 min，在該條件下，防己諾林堿峰形有輕微拖尾、對稱因子較低，但總體基線平穩(wěn)。本研究采用的色譜柱為Agilent ZORBAX Extend-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m），其pH適用范圍2.0～11.5，該色譜柱采用前述條件，出現(xiàn)雜峰多、主要成分不出峰、基線不平穩(wěn)。調(diào)整三乙胺濃度為0.08%，流動相比例仍為75∶25，pH接近9.0、進(jìn)樣量降至8 ?L時(shí)，防己諾林堿峰形拖尾問題得到解決，對稱因子高，運(yùn)行時(shí)間降為15 min，但測定結(jié)果相對于Agilent ZORBAX SB-C18測定的含量較低。此外，兩根色譜柱的峰形分離度均較好，但第一根色譜柱由于pH耐堿范圍窄，出現(xiàn)硅膠基質(zhì)溶解、柱子進(jìn)樣壓力波動大，伴隨填料塌陷、柱效快速下降、峰形越來越差且有肩峰出現(xiàn)等現(xiàn)象。液相色譜測定法，因色譜柱的差異，測定條件和測定結(jié)果會有差異，粉防己堿類物質(zhì)作為堿性較強(qiáng)的物質(zhì)，需考慮耐堿范圍更寬的柱子，綜合考慮色譜柱耐用性和峰形對稱性，粉防己堿類物質(zhì)的測定宜采用pH適用范圍較寬的Agilent ZORBAX Extend-C18（4.6 mm×250 mm，5 ?m）色譜柱。

3. 2 流動相考察

本研究所測物質(zhì)為生物堿，堿性物質(zhì)色譜峰拖尾是一個(gè)較難解決的問題，一般解決原則為酸性化合物拖尾加酸，堿性化合物拖尾加堿，故本研究采用添加堿性物質(zhì)三乙胺以解決拖尾問題。試驗(yàn)僅以乙腈和三乙胺為流動相，通過調(diào)整流動相比例（90∶10、85∶15、80∶20和75∶25）和三乙胺濃度（0.03%、0.05%、0.06%、0.08%和0.10%），并比較不同流速（0.5、0.8和1.0 mL/min）和不同柱溫（25、30、35和40 ℃）下各待測成分的分離度，發(fā)現(xiàn)在流動相比例75∶25、三乙胺濃度0.08%、流速1.0 mL/min、25 ℃下能獲得較好的分離效果。在色譜條件摸索過程中發(fā)現(xiàn)，三乙胺用量是一個(gè)較敏感的因素，用量過小則分離度不好，用量過大會使流動相pH偏高，致使色譜柱硅膠基質(zhì)發(fā)生溶解，從而影響色譜柱的使用壽命，且色譜峰峰形對流動相pH的變化較敏感，與侯麗麗等（2013）的研究結(jié)果一致;柱溫對分離度影響不明顯;在有緩沖鹽的情況下不宜選擇低流速。由于三乙胺的比例和濃度是影響試驗(yàn)結(jié)果的敏感因素，若參照本研究方法但采用不同色譜柱時(shí)，建議重點(diǎn)考察三乙胺的比例和濃度。

3. 3 檢測波長的選擇

采用沃特世2695檢測器在200～400 nm進(jìn)行波長的考察，發(fā)現(xiàn)在波長210～280 nm會發(fā)生基線下移，出現(xiàn)負(fù)峰，波長達(dá)280 nm時(shí)負(fù)峰消失，與宋俊蓉等（2018）的研究結(jié)果存在差異。究其原因可能是波長不合適或使用的流動相具有高吸收系數(shù)，也有可能進(jìn)樣注射器進(jìn)入了空氣或色譜柱柱效下降等。

3. 4 提取注意事項(xiàng)

生物堿屬于大極性成分，對樣品前處理要求較高，若處理不當(dāng)，會出現(xiàn)峰形分離不理想，直接影響客觀判斷，也容易污染柱頭降低色譜柱使用壽命。因此，在提取過程中，應(yīng)注意使用器皿等的清洗、稱量紙的勤換、溶液的均勻度等細(xì)節(jié)問題。

3. 5 與前人已有成果的對比分析

本研究最初選擇藥典法，但由于流動相需添加表面活性劑，起泡性強(qiáng)，前處理較耗時(shí)，經(jīng)查閱相關(guān)文獻(xiàn)（和健等，2006;楊學(xué)猛等，2007;劉永剛等，2010;白雪媛等，2017），發(fā)現(xiàn)各研究對藥典法流動相的改進(jìn)均取得了較好的效果，但仍存在試驗(yàn)復(fù)雜和操作繁瑣的問題。本研究在前人研究的基礎(chǔ)上，對流動相進(jìn)行簡化，獲得與其他研究（楊學(xué)猛等，2007;劉永剛等，2010;于士婷等，2017;關(guān)皎等，2018）相同的測定結(jié)果，且具有更快速、高效、低耗和簡便的優(yōu)點(diǎn)。

3. 6 不同產(chǎn)地防己藥材防已諾林堿和粉防已堿含量差異分析

本研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地及同一產(chǎn)地不同株系防己藥材中防己諾林堿和粉防己堿含量均存在差異，與賴曉蓮等（2015）的研究結(jié)果一致。藥材的有效成分主要為植物次生代謝物質(zhì)，次生代謝物質(zhì)的合成和積累由種質(zhì)因素決定，同時(shí)受環(huán)境因素影響，是植物與環(huán)境長期進(jìn)化結(jié)果的產(chǎn)物（閻秀峰等，2007）。在藥用植物的生長發(fā)育過程中，藥用植物次生代謝產(chǎn)物的類型、含量和比例均可能受到一系列環(huán)境因素的影響（Ncube et al.，2012），進(jìn)而影響其藥物內(nèi)在含量。從本研究結(jié)果來看，不同產(chǎn)地防己中防己諾林堿和粉防己堿含量的差異可能受種質(zhì)差異和環(huán)境的雙重影響，而同一產(chǎn)地不同防己株系間藥材有效成分含量的差異，更多的來自于種質(zhì)間的差異。同一產(chǎn)地防己種質(zhì)存在多樣性，可為防己優(yōu)良種質(zhì)選育提供大量種質(zhì)資源。

不同產(chǎn)地防己藥材防己諾林堿和粉防己堿的含量測定結(jié)果也表明，本研究建立同時(shí)測定防己諾林堿和粉防己堿含量的方法，其重復(fù)性和穩(wěn)定性等均可達(dá)到HPLC測定藥材藥效成分含量的要求，可用于不同產(chǎn)地、不同批次防己藥材中防己諾林堿和粉防己堿含量的測定。

4 結(jié)論

建立同時(shí)測定防己藥材中防己諾林堿和粉防己堿含量的HPLC線性關(guān)系好，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性及加樣加收率均符合相關(guān)要求，且運(yùn)行時(shí)間短，可節(jié)約測試時(shí)間，可用于不同產(chǎn)地、不同批次防己藥材防己諾林堿和粉防己堿含量的測定，可考慮作為防己藥材質(zhì)量檢測的方法。

參考文獻(xiàn)：

白雪媛，尹翌秋，王彤，張巍，王佳雯，趙雨，趙大慶. 2017. HPLC法同時(shí)測定利心丸中粉防己堿和防己諾林堿含量[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，32（7）：3235-3238. [Bai X Y，Yin Y Q，Wang T，Zhang W，Wang J W，Zhao Y，Zhao D Q. 2017. Simultaneous determination of tetrandrine and fangchinoline in Lixin Pill by HPLC[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy，32（7）：3235-3238.]

蔡瑾瑾，韓海. 2017. HPLC同時(shí)測定復(fù)方防己注射液中延胡索乙素、粉防己堿和防己諾林的含量[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，40（2）：34-37. [Cai J J，Han H. 2017. Determination of tetrahydropalmatine，tetrandrine and fangchinoline in compound tetrandrine injection by HPLC[J]. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，40（2）：34-37.]

陳寧姿，樓紅侃. 2018. 漢防己甲素治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎合并骨質(zhì)疏松癥效果觀察[J]. 中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥，25（5）：26-27. [Chen N Z，Lou H K. 2018. Observation of the effect of tetrandrine on rheumatoid arthritis with osteoporosis[J]. Chinese Journal of Rural Medicine and Pharmacy，25（5）：26-27.]

關(guān)皎，張穎，費(fèi)雪，孫宇慧，王黎明，郝乘儀，馮波，朱鶴云. 2018. 反相高效液相色譜法測定防己黃芪湯中6種活性成分的含量[J]. 吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，39（5）：321-325. [Guan J，Zhang Y，F(xiàn)ei X，Sun Y H，Wang L M，Hao C Y，F(xiàn)eng B，Zhu H Y. 2018. Determination of six active components in Fangji Huangqi Decoction by RP-HPLC[J]. Journal of Jilin Medical University，39（5）： 321-325.]

國家藥典委員會. 2015. 中華人民共和國藥典[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社. [Chinese Pharmacopoeia Commi-ssion. 2015. Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China[M]. Beijing：China Medical Science Press.]

和健，穆麗華，王建國，劉剛?cè)? 2006. RP-HPLC法同時(shí)測定迪可顆粒中粉防己堿和防己諾林堿的含量[J]. 藥物分析雜志，26（l）：107-109. [He J，Mu L H，Wang J G，Liu G S. 2006. RP-HPLC determination of tetrandrine and fangchi-noline in Dike granules[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis，26（l）：107-109.]

侯麗麗，晏永新，張麗. 2013. HPLC法測定復(fù)方防己口服液中粉防己堿和防己諾林堿的含量[J]. 中國獸藥雜志，47（2）：24-26. [Hou L L，Yan Y X，Zhang L. 2013. Determination of tetrandrine and fangchinoline in compound Fangji oral solution by HPLC[J]. Chinese Journal of Veterinary Drug，47（2）：24-26.]

賴曉蓮，郭圣茂，彭仁，陳蘭蘭，廖興國. 2015. 江西省不同產(chǎn)地粉防己主要藥效成分含量分析[J]. 福建林業(yè)科技，42（1）：84-86. [Lai X L，Guo S M，Peng R，Chen L L，Liao X G. 2015. Determination of tetrandrine and fangchindine in Stephania tetrandra from different areas in Jiangxi Province[J]. Journal of Fujian Forestry Science and Technology，42（1）：84-86.]

劉暢，趙寶祥. 2015. 漢防己甲素對小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞的影響及其分子機(jī)制研究[J]. 中國生化藥物雜志，35（3）：54-57. [Liu C，Zhao B X. 2015. Effects of tetrandrine on murine hemangioendothelioma cell and its molecular mechanisms[J]. Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics，35（3）：54-57.]

劉永剛，劉勇，何瑞杰，趙保勝，韓靜，馬群. 2010. HPLC測定防己中防己諾林堿和粉防己堿的含量[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，16（9）：49-51. [Liu Y G，Liu Y，He R J，Zhao B S，Han J，Ma Q. 2010. Determination of tetrandrine and fangchinoline in Stephania tetradra S. Moore by HPLC[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，16（9）：49-51.]

饒毅，黎莉，劉隆洪，袁華生，魏惠珍，黃周華，楊世林. 2006. HPLC法同時(shí)測定防己藥材中防己諾林堿和粉防己堿[J]. 中草藥，37（4）：612-613. [Rao Y，Li L，Liu L H，Yuan H S，Wei H Z，Huang Z H，Yang S L. 2006. Simultaneous determination of tetrandrine and tetrandrine in Radix Stephaniae Tetrandrae by HPLC[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs，37（4）：612-613.]

宋俊蓉，婁華勇，方友來，藍(lán)俊杰，何敏，馬小攀，潘衛(wèi)東. 2018. HPLC法同時(shí)測定粉防己中漢防己甲素和漢防己乙素的含量[J]. 山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，37（3）：79-83. [Song J R，Lou H Y，F(xiàn)ang Y L，Lan J J，He M，Ma X P，Pan W D. 2018. Simultaneous determination of tetrandrine and fangchinoline from Stephania tetrandra by HPLC[J]. Journal of Mountain Agriculture and Biology，37（3）：79-83.]

宋英莉，王洪一，馬書丹，徐志山，陶凱. 2018. 防己諾林堿對增生性瘢痕的抑制作用[J]. 中國美容整形外科雜志，29（5）：297-299. [Song Y L，Wang H Y，Ma S D，Xu Z S，Tao K. 2018. The inhibitory effect of fangchinoline on hypertrophic scars[J]. Chinese Journal of Aesthetic and Plastic Surgery，29（5）：297-299.]

宋占帥，張娟，張蓉，沈秀娟. 2017. 補(bǔ)陽還五湯聯(lián)合漢防己甲素片改善矽肺肺纖維化效果觀察[J]. 山東醫(yī)藥，57（42）：51-53. [Song Z S，Zhang J，Zhang R，Shen X J. 2017. Effect of Buyang Huanwu decoction combined with tetrandrine tablets on silicosis fibrosis[J]. Shandong Medical Journal，57（42）：51-53.]

王宏，郭曉遠(yuǎn)，吳國建，陳陸馗. 2018. 漢防己甲素聯(lián)合紫杉醇逆轉(zhuǎn)腦膠質(zhì)瘤C6/MDR細(xì)胞耐藥及其機(jī)制研究[J]. 中草藥，49（11）：2584-2590. [Wang H，Guo X Y，Wu G J，Chen L K. 2018. Combination of tetrandrine and paclitaxel overcomes multidrug resistance on C6/MDR glioma cells[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs，49（11）：2584-2590.]

邢志博，王鳳梅，王翠平，慕強(qiáng)，王啟堂. 2016. 粉防己有效成分的藥理活性研究進(jìn)展[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，20（9）：241-246. [Xing Z B，Wang F M，Wang C P，Mu Q，Wang Q T. 2016. Advance on study of chemical components，pharmacological effect of Stephania tetrandra[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae，20（9）：241-246.]

閻秀峰，王洋，李一蒙. 2007. 植物次生代謝及其與環(huán)境的關(guān)系[J]. 生態(tài)學(xué)報(bào)，27（6）：2554-2562. [Yan X F，Wang Y，Li Y M. 2007. Plant secondary metabolism and its response to environment[J]. Acta Ecologica Sinica，27（6）：2554-2562.]

楊學(xué)猛，徐鳳梅，魏景文，羅桂萍. 2007. RP-HPLC測定舒肝飲丸中粉防己堿和防己諾林堿的含量[J]. 天津醫(yī)藥，35（4）：289-290. [Yang X M，Xu F M，Wei J W，Luo G P. 2007. Determination of tetrandrine and tetrandrine in Shuganyin pills by RP-HPLC[J]. Tianjin Medical Journal，35（4）：289-290.]

于士婷，趙大慶，尹翌秋，白雪媛. 2017. 利心丸中粉防己堿 HPLC檢測方法的建立及其評價(jià)[J]. 長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，33（4）：537-540. [Yu S T，Zhao D Q，Yin Y Q，Bai X Y. 2017. Simultaneous determination of tetrandrine in Lixin pills by HPLC[J]. Journal of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，33（4）：537-540.]

于有江，羅雪，葉記林，蘇蘭娣，彭建明. 2017. 漢防己乙素對人肺癌95D細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用及機(jī)制[J]. 山東醫(yī)藥，57（38）：5-7. [Yu Y J，Luo X，Ye J L，Su L D，Peng J M. 2017. Effect of fangchinoline on proliferation of human lung cancer 95D cells[J]. Shandong Medical Journal，57（38）：5-7.]

張艷輝，郝翠，王炳高，邢志博，王鳳梅. 2017. 防己諾林堿誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231凋亡的作用機(jī)制[J]. 癌癥進(jìn)展，15（3）：250-282. [Zhang Y H，Hao C，Wang B G，Xing Z B，Wang F M. 2017. The mechanism of fangchi-noline in inducing the apoptosis of MDA-MB-231 human breast cancer cells[J]. Oncology Progress，15（3）：250-282.]

朱鶴云，費(fèi)雪，孫宇慧，王黎明，郝乘儀，馮波，關(guān)皎. 2017. UFLC法同時(shí)測定防己中粉防己堿和防己諾林堿的含量[J]. 中國獸醫(yī)雜志，53（8）：91-93. [Zhu H Y，F(xiàn)ei X，Sun Y H，Wang L M，Hao C Y，F(xiàn)eng B，Guan J. 2017. Simultaneous determination of tetrandrine and fangchinoline in Stephania tetrandra S. Moore by UFLC[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine，53（8）：91-93.]

朱祖成. 2013. 粉防己堿對腎性高血壓大鼠血壓及抗氧化作用影響研究[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，15（4）：44-46. [Zhu Z C. 2013. Effects of tetrandrine on blood pressure and serum antioxidant ability in renovascular hypertensive rats[J]. Journal of Liaoning University of Traditio-nal Chinese Medicine，15（4）：44-46.]

Ncube B，F(xiàn)innie J F，van Staden J. 2012.Quality from the field：The impact of environmental factors as quality determinants in medicinal plants[J]. South African Journal of Botany，82：11-20.

Shi J，Guo B Y，Hui Q，Chang P，Tao K. 2017. Fangchinoline suppresses growth and metastasis of melanoma cells by inhibiting the phosphorylation of FAK[J]. Oncology Reports，38（1）：63-70.

Wang B G，Xing Z B，Wang F M， Yuan X Y， Zhang Y H. 2017. Fangchinoline inhibits migration and causes apoptosis of human breast cancer MDA-MB-231cells[J]. Oncology letters，14（5）：5307-5312.

（責(zé)任編輯 羅 麗）