銀黃—聚乙烯醇注射液穩(wěn)定性研究

伍濤 李茂婷 鄧余 曹政 閆志強(qiáng) 朱買勛

摘 要：通過添加穩(wěn)定劑聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，PVA），有效解決銀黃注射液的穩(wěn)定性問題。通過影響因素試驗(yàn)和加速試驗(yàn)對銀黃注射液的性狀、pH、鑒別及含量進(jìn)行穩(wěn)定性考察。結(jié)果表明：在高溫（60℃）、低溫（4℃）和強(qiáng)光照射（4500±500 lx）的影響因素試驗(yàn)和6個(gè)月的加速試驗(yàn)（溫度40±2℃、濕度75%±5%）條件下，按藥典標(biāo)準(zhǔn)制備銀黃注射液（對照組）的黃芩苷含量雖變化不顯著，性狀和鑒別也符合要求，但pH值和綠原酸含量均不穩(wěn)定，呈顯著性變化;而銀黃聚乙烯醇注射液（試驗(yàn)組）的pH值、綠原酸、黃芩苷含量穩(wěn)定，變化均不顯著，性狀和鑒別也符合要求。這說明在銀黃注射液配方中加入質(zhì)量比為2%的PVA，再調(diào)整注射液pH值至5.5～7.0，所制備得到的銀黃聚乙烯醇注射液，比藥典標(biāo)準(zhǔn)銀黃注射液更加穩(wěn)定有效。

關(guān)鍵詞：銀黃注射液;聚乙烯醇;綠原酸;穩(wěn)定性

中圖分類號：R283.1 ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? 文章編號：0253-2301（2019）11-010

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2019.11.010

Study on the Stability of Yinhuangpolyvinyl alcohol Injection

WU Tao1， LI Maoting2， DENG Yu1， CAO Zheng1， YAN Zhiqiang1， ZHU Maixun1

Abstract： The stability of yinhuang injection was effectively solved by adding the stabilizer polyvinyl alcohol. The stability of yinhuang injection was investigated through the influencing factor test and accelerated test. The results showed that under the conditions of influence factor test with high temperature （60℃）， low temperature （4℃） and strong light exposure （4500±500 lx）， and accelerated test of 6 months （with temperature of 40±2℃ and humidity of 75%±5%）， the change of baicalin content in yinhuang injection prepared according to pharmacopeia standards （control group） was not significant， and the traits and identification also met the requirements， while the pH value and chlorogenic acid content were not stable with significant changes. However， the pH value， chlorogenic acid and baicalin content of yinhuangpolyvinyl alcohol injection （treatment group） were stable with no significant changes， and the traits and identification were also in line with the requirements. This indicated that the yinhuangpolyvinyl alcohol injection by adding 2% PVA in the formula and adjusting the pH value of the injection to 5.5-7.0 was more stable and effective than the yinhuang injection prepared according to pharmacopoeia standard.

Key words： Yinhuang injection; Polyvinyl alcohol; Chlorogenic acid; Stability

銀黃注射液主要由金銀花提取物綠原酸和黃芩提取物黃芩苷制成。黃芩苷化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，但綠原酸在提取和入藥后容易因水解和分子內(nèi)酯基遷移發(fā)生異構(gòu)或氧化降解而影響療效[1]，這主要是因?yàn)榫G原酸是由咖啡酸和奎尼酸形成的酯[2]，其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵和多元酚3個(gè)不穩(wěn)定部分[3]。近年來，一些科研人員在研究綠原酸穩(wěn)定性時(shí)發(fā)現(xiàn)，綠原酸在加入亞硫酸氫鈉、L半胱胺酸鹽、銅離子絡(luò)合物[4]、氫氧化鈣[5]、β環(huán)糊精[6]等物質(zhì)以及在酸性條件下較穩(wěn)定，因此可以通過添加適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑或抗氧化劑到銀黃注射液中，并調(diào)整pH值，以確保綠原酸不降解，提高銀黃注射液的穩(wěn)定性。聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，簡稱PVA）是一種富含羥基的高分子聚合物，具有多元醇的典型化學(xué)性質(zhì)，能進(jìn)行酯化、醚化及縮醛化等反應(yīng)，PVA常作為水溶性緩釋載體材料廣泛用于制藥行業(yè)[7]，但作為穩(wěn)定劑用于中藥注射液卻未見報(bào)道。本試驗(yàn)通過將PVA作為穩(wěn)定劑加入到銀黃注射液中，利用PVA含有的OH基團(tuán)抑制綠原酸酯鍵水解和分子內(nèi)酯基遷移，提升銀黃注射液中綠原酸含量的穩(wěn)定性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品 黃芩苷對照品，95.9%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，批號Z0271404;綠原酸對照品，97.3%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，批號Z0261407。

1.1.2 對照組供試品 按照《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2017年版，中藥卷）銀黃注射液制法[8]分別制作3批對照組供試品（每批20瓶），自編批號2018071302、2018071401和2018071701。

1.1.3 試驗(yàn)組供試品 在前期研究基礎(chǔ)上，按表1配方制備試驗(yàn)組供試品。

制備工藝為：（1）取適量注射用水，加入氫氧化鈉溶解后，加入黃芩提取物溶解，并調(diào)節(jié)pH<8.0，過濾備用;（2）在適量注射用水加入配方量聚乙烯醇并充分溶解，再加入金銀花提取溶解，過濾備用;（3）合并（1）（2）液，用注射用水定容至1000 mL，調(diào)節(jié)pH至5.5～7.0，過濾，分裝至安瓶中，滅菌即得，自編批號為2018071201。最后再按此配方工藝，再配制2個(gè)批次試驗(yàn)品（每批20瓶），自編批號2018071202、2018071301。

1.2 試驗(yàn)儀器

PHS3C型精密pH計(jì)（上海雷磁儀器廠）;269524872475高效液相色譜儀[沃特世科技（上海）Waters有限公司];ZF2型三用紫外儀（上海市安亭電子儀器廠）;YB2型澄明度檢測儀（天津大學(xué)精密儀器廠）;DHG9240A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海齊欣科學(xué)儀器有限公司）;SHH100GD藥品強(qiáng)光照射試驗(yàn)箱（重慶市永生試驗(yàn)儀器廠）;LSC528BW立式冷藏陳列柜（浙江星星家電股份有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 影響因素試驗(yàn) 為減小試驗(yàn)誤差，將同1 d制備的2種供試品[編號為2018071302（對照組）和2018071301（供試組）]放置于高溫（60℃）、低溫（4℃）和強(qiáng)光照射[（4500±500）lx]條件下，開展影響因素試驗(yàn)。分別于第0、5、10 d取樣，考察各組供試品性狀、pH值、鑒別、含量。

1.3.2 加速試驗(yàn) 取全部批次供試品，放置于溫度（40±2）℃、濕度（75±5）%條件下，于第0、1、2、3、6個(gè)月末取樣，考察各組供試品性狀、pH值、鑒別、含量。

1.4 檢測指標(biāo)

對照組供試品和試驗(yàn)組供試品的性狀、pH值、鑒別和含量4種主要質(zhì)量控制項(xiàng)目均參考《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（2017年版，中藥卷）銀黃注射液項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)[8]進(jìn)行考察。（1）性狀。為棕黃色至棕紅色的澄明液體。（2）pH值。應(yīng)為5.5～7.0。（3）鑒別。取供試品1mL，加75%乙醇9mL，搖勻，作為供試品溶液。另取黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品與綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，分別加甲醇制成每1mL含1.0、0.3mg的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液。吸取上述3種溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn);在與綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，記錄結(jié)果。（4）含量測定。均采用高效液相色譜法測定。本試驗(yàn)參考國家標(biāo)準(zhǔn)[8]并結(jié)合臨床使用效果，每毫升供試品綠原酸和黃芩苷含量分別不少于1.7mg和18.0mg視為合格。金銀花提取物色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅檢為填充劑;以乙腈0.4%磷酸溶液（10∶90）為流動相;檢測波長為327nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。黃芩提取物色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅檢為填充劑;以甲醇水磷酸（50∶0.2）為流動相;檢測波長為274nm。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS15.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 影響因素試驗(yàn)

2.1.1 高溫試驗(yàn) 從表2可以看出，供試品在第0d、第5d和第10d的鑒別均符合標(biāo)準(zhǔn)，外觀性狀均為棕紅色澄明液體，黃芩苷含量差異均不顯著。在高溫（60℃）試驗(yàn)條件下，隨時(shí)間推移，對照組pH值和綠原酸含量出現(xiàn)顯著性變化，不穩(wěn)定，而黃芩苷含量變化不顯著，性狀和鑒別符合要求;試驗(yàn)組pH值、綠原酸、黃芩苷變化不顯著，性狀和鑒別符合要求。因此說明，試驗(yàn)組pH值、綠原酸含量比對照組更穩(wěn)定。

注：表中同列數(shù)據(jù)后不同大寫、小寫字母表示同一批號在不同時(shí)間段內(nèi)各指標(biāo)值差異達(dá)極顯著（P<0.01）及顯著（P<0.05）水平;下同。

2.1.2 低溫試驗(yàn) 從表3可以看出，供試品在第0d、第5d和第10d的鑒別均符合標(biāo)準(zhǔn)，外觀性狀均為棕紅色澄明液體，黃芩苷含量差異均不顯著。在低溫（4℃）試驗(yàn)條件下，隨時(shí)間推移，對照組pH值和綠原酸含量出現(xiàn)顯著性變化，不穩(wěn)定，而黃芩苷含量變化不顯著;試驗(yàn)組pH值、綠原酸、黃芩苷變化不顯著，性狀和鑒別符合要求。因此說明，試驗(yàn)組pH值、綠原酸含量比對照組更穩(wěn)定。

2.1.3 強(qiáng)光照射試驗(yàn) 從表4可以看出，供試品在第0d、第5d和第10d的鑒別均符合標(biāo)準(zhǔn)，外觀性狀均為棕紅色澄明液體，黃芩苷含量差異均不顯著。在強(qiáng)光照射[（4500±500）lx]試驗(yàn)條件下，隨時(shí)間推移，對照組pH值和綠原酸含量出現(xiàn)顯著性變化，不穩(wěn)定，而黃芩苷含量變化不顯著，性狀和鑒別符合要求;試驗(yàn)組pH值、綠原酸、黃芩苷變化不顯著，性狀和鑒別符合要求。因此說明，試驗(yàn)組pH值、綠原酸含量比對照組更穩(wěn)定。

2.2 加速試驗(yàn)

從表5可以看出，供試品性狀無明顯變化，均為棕紅色澄明液體，鑒別均符合標(biāo)準(zhǔn)，黃芩苷含量穩(wěn)定。在6個(gè)月的加速試驗(yàn)條件下，對照組pH和綠原酸含量出現(xiàn)顯著性變化，不穩(wěn)定，而黃芩苷含量變化不顯著，性狀和鑒別符合要求;試驗(yàn)組pH值、綠原酸、黃芩苷變化不顯著，性狀和鑒別符合要求。因此說明，試驗(yàn)組pH值、綠原酸含量比對照組穩(wěn)定。

3 結(jié)論與討論

在高溫（60℃）、低溫（4℃）和強(qiáng)光照射[（4500±500）lx]的影響因素試驗(yàn)和6個(gè)月的加速試驗(yàn)[溫度（40±2）℃、濕度75%±5%]條件下，按藥典標(biāo)準(zhǔn)制備的銀黃注射液黃芩苷含量雖變化不顯著，性狀和鑒別也符合要求，但pH值和綠原酸含量均不穩(wěn)定，呈顯著性變化;而銀黃聚乙烯醇注射液pH值、綠原酸、黃芩苷含量穩(wěn)定，變化均不顯著，性狀和鑒別也符合要求。這說明在銀黃注射液配方中加入質(zhì)量比為2%的PVA，再調(diào)整注射液pH值至5.5～7.0，所制備得到的銀黃聚乙烯醇注射液，比藥典標(biāo)準(zhǔn)銀黃注射液更加穩(wěn)定有效。

黃芩提取物不溶于水，溶于氫氧化鈉試液，化學(xué)穩(wěn)定性較好[9-10]。金銀花提取物易溶于水，但有效成分綠原酸僅在pH<4.0環(huán)境中較穩(wěn)定（pH=3.0穩(wěn)定性最好），隨pH值上升綠原酸則快速降解[11]。此外，綠原酸具有酯鍵和多元酚結(jié)構(gòu)，酯鍵易水解形成咖啡酸和奎寧酸，多元酚中的酚羥基又易被氧化致使綠原酸含量下降[12]，因此銀黃注射液pH值和綠原酸的穩(wěn)定性是影響銀黃注射液穩(wěn)定性的關(guān)鍵。鑒于銀黃注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求和黃芩穩(wěn)定性（隨pH降低黃芩溶解度降低，導(dǎo)致黃芩析出），因此將銀黃注射液pH值控制在6.5～7.0范圍[13-14]，即可有效抑制綠原酸結(jié)構(gòu)中的酯鍵水解和多元酚氧化，又可保證黃芩不析出。PVA是富含OH基團(tuán)的多羥基聚合物，能有效抑制酯鍵的水解反應(yīng)和降低多元酚酚羥基的氧化幾率，因此將PVA作為穩(wěn)定劑加入到銀黃注射液中，對其pH值和綠原酸的穩(wěn)定性具有良好作用。同時(shí)，將本試驗(yàn)結(jié)果與其他研究結(jié)果對比發(fā)現(xiàn)[4-6]，本試驗(yàn)制備的銀黃聚乙烯醇注射液更加穩(wěn)定，而且生產(chǎn)工藝簡單可行，所涉及原輔料成本低廉易得，通過驗(yàn)證，各方面指標(biāo)都能夠達(dá)到理想要求，具有良好的開發(fā)前景。參考文獻(xiàn)：

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（責(zé)任編輯：柯文輝）

收稿日期：2019-10-28

作者簡介：伍濤，男，1982年生，碩士，助理研究員，主要從事獸醫(yī)藥理與藥劑研究。

基金項(xiàng)目：重慶市畜牧科技研究與推廣項(xiàng)目（19532）。